%31تخفیف

شناسایی  ژن مقاومت به متی سیلین و پروفایل مقاومت آنتی بیوتیکی استافیلوکوکوس اورئوس‌های جدا شده از نمونه‌های شیر مشکوک به ورم پستان در گاوداری‌های صنعتی همدان  

تعداد 71صفحه در فایل word

 کارشناسی ارشد در رشته باکتری شناسی

 

 

 

 

 

شناسایی  ژن مقاومت به متی سیلین و پروفایل مقاومت آنتی بیوتیکی استافیلوکوکوس اورئوس‌های جدا شده از نمونه‌های شیر مشکوک به ورم پستان در گاوداری‌های صنعتی همدان

 

چکیده:

       ورم پستان، به بروز پاسخ دفاعی پستان اطلاق می شود که معمولاَ ناشی از عفونت‌های باکتریایی می باشد. این بیماری به عنوان پر هزینه‌ترین بیماری گاو شیری در سرتاسر جهان مطرح می باشد. هنوز یک واکسن موثر علیه ورم پستان گاو در دسترس نیست. بررسی‌ها نشان می دهد که بیش از 25 درصد کل زیان‌های اقتصادی ناشی از بیماری‌ها می تواند مستقیماً در ارتباط با ورم پستان باشد. استافیلوکوکوس اورئوس  شایع‌ترین و از نظر اقتصادی مهم‌ترین عامل ایجاد عفونت‌های داخل پستانی در دام‌های شیری می باشد. عامل حدود 40-30 درصد از موارد ورم پستانی گزارش شده استافیلوکوکوس اورئوس می باشد. لذا این میکروارگانیسم می تواند از طریق پستان مبتلا به ورم پستان بالینی و یا تحت بالینی استافیلوکوکی و یا از طریق محیط ، شیر را آلوده کرده و به راحتی در داخل شیر و فرآورده‌های آن رشد و تکثیر نموده و منجر به تولید آنترو توکسین‌های بیماریزا شود.

هدف از این مطالعه شناسایی  ژن مقاومت به متی سیلین و پروفایل مقاومت آنتی بیوتیکی استافیلوکوکوس اورئوس‌های جدا شده از نمونه‌های شیر مشکوک به ورم پستان در گاوداری‌های صنعتی همدان با روش PCR می باشد. در این مطالعه از 415 نمونه شیر گرفته شده تعداد 76 (31/18%) جدایه استافیلوکوکوس اورئوس با انجام رنگ آمیزی گرم، تست کاتالاز، بررسی الگوی همولیز، کشت روی محیط‌های مانیتول سالت آگار، بردپارکر، DNase و انجام تست‌های مولکولی جدا و تأیید شد. تمام نمونه‌های استافیلوکوکوس اورئوس تأیید شده با روش‌های آزمایشگاهی و مولکولی با روش انتشار دیسک از بابت مقاومت یا حساسیت به 11 نوع آنتی بیوتیک مختلف مورد بررسی قرار گرفتند. مقاومت به اگزاسیلین در 12 نمونه (78/15%) تشخیص داده شد. بیشترین مقاومت آنتی بیوتیکی به  پنی سیلین (100%) و کمترین مقاومت به کلرامفنیکل (31/1%) مشاهده گردید. هیچ یک از جدایه‌ها نسبت به سیپروفلوکساسین و جنتامایسین مقاومتی نشان نداند. از مجموع 76 نمونه مورد بررسی تعداد 50 (78/65%) نمونه دارای ژن mecA بودند.

نتایج این مطالعه نشان دهنده وجود شیوع قابل توجه مقاومت به آنتی بیوتیک متی سیلین در بین استافیلوکوکوس اورئوس‌های جدا شده از نمونه‌های مشکوک به ورم پستان بود. بررسی الگوی مقاومت آنتی بیوتیکی در جدایه‌های مورد مطالعه حاکی از تفاوت مقاومت به سایر آنتی بیوتیک‌ها، در جدایه‌های مقاوم به متی سیلین می باشد.

واژه‌های کلیدی: ورم پستان، استافیلوکوکوس اورئوس مقاوم به متی سیلین، مقاومت آنتی بیوتیکی، mecA

مقدمه 1

1-1 تعریف ورم پستان: 6

1-2 انواع ورم پستان بر حسب شدت نشان دادن علائم کلینیکی… 6

1-2-1 ورم پستان غیر کلینیکی (مخفی) 6

1-2-2 ورم پستان کلینیکی.. 7

1-3 عوامل اصلی بیماری‌زای ورم پستان.. 9

1-3-1 عوامل غیر عفونی.. 9

1-3-2 عوامل عفونی.. 10

1-4 ورم پستان محیطی… 10

1-5 ورم پستان مسری: 10

1-6 عوامل خطر ساز و مستعد کننده ورم پستان.. 11

1-7 عامل اصلی ورم پستان مسری… 12

1-8 نشانه‌های کلینیکی ورم پستان ناشی از استافیلوکوکوس اورئوس…. 12

1-9 کشت باکتری جهت شناسایی استافیلوکوکوس اورئوس…. 12

1-10 تست ورم پستان کالیفرنیایی (CMT). 12

1-11 آزمایش شمارش سلول‌های سوماتیک…. 13

1-12 کنترل ورم پستان ناشی از استافیلوکوکوس اورئوس…. 13

1-13 درمان ورم پستان استافیلوکوکی… 13

1-14 استافیلوکوکوس اورئوس…. 14

1-14-1 زیستگاه و انتشار 15

1-14-2 خصوصيات استافيلوكوكوس اورئوس (مورفولوژي و مشخصات) 15

1-14-3 ساختمان استافيلوكوكوس اورئوس… 16

1-14-4 ساختمان آنتي ژني.. 16

1-14-5 آنزیم‌های استافیلوکوکی.. 17

1-14-6 سموم  استافيلوكوكوس اورئوس… 18

1-14-7 بيماري زايي استافیلوکوک‌ها 19

1-15 تشخيص آزمايشگاهي استافيلوكوكوس اورئوس…. 20

1-15-1 روش ميكروسكوپي.. 20

1-15-2 تست‌هاي بيوشيميايي.. 20

1-15-3 تست‌هاي حساسيت آنتي بیوتیکی.. 20

1-16 مقاومت دارویی… 21

1-17 آنتی بیوتیک‌ها. 21

1-18 اهمیت مقاومت آنتی بیوتیکی… 22

1-19 منشأ مقاومت دارویی… 22

1-19-1 منشأ غیر ژنتیکی مقاومت دارویی.. 22

1-19-2 منشأ ژنتیکی مقاومت دارویی.. 23

1-19-3 مقاومت جانبی.. 24

1-20 محدودیت بروز مقاومت آنتی بیوتیکی… 24

1-21 پنی سیلین‌ها. 24

1-22 سفالوسپورین‌ها. 26

1-23 آنتی بیوتیک‌های پلی پپتیدی… 27

1-24 آمینوگلیکوزیدها. 28

1-25 آنتی بیوتیک‌هایی که از سنتز RNA جلوگیری می‌کنند.. 30

1-26 آنتی بیوتیک‌های باکتریوستاتیکی که سنتز  پروتئین را متوقف می‌کنند.. 30

1-27 کوئینولون‌ها. 32

1-28 سولفانامیدها و تری متوپریم.. 32

2-1 مواد مصرفی… 36

2-1-1 محیط‌های کشت… 36

2-1-2 باکتری‌های استفاده شده 36

2-1-3 سایر مواد مصرفی.. 36

2-2 مواد غیر مصرفی… 37

2-2-1 دستگاه‌ها 37

2-2-2 سایر وسایل غیر مصرفی.. 37

2-3 نمونه‌گیری… 37

2-3-1 روش نمونه‌گیری.. 38

2-3-2 تست ورم پستان کالیفرنیا 39

2-3-3 آزمایش شمارش سلول‌های سوماتیک… 39

2-4 جداسازی و شناسایی استافیلوکوکوس اورئوس…. 39

2-4-1 کشت بر روی محیط بلاد آگار 40

2-4-2 رنگ آميزی گرم. 40

2-4-3 آزمايش كاتالاز 40

2-4-4 کشت بر روی محیط مانیتول سالت آگار 41

2-4-5 کشت بر روی محیط برد پارکر. 41

 2-4-6 کشت بر روی محیط DNase  آگار……………………………………………………………………………………………………………………41

2-5 ذخيره نمونه‌ها. 42

2-6 آزمایش تعیین حساسیت باکتری به آنتی بیوتیک‌ها (با استفاده از روش انتشار دیسک). 42

2-7 استخراج DNA… 42

2-7-1 روش تهیه بافر لیزکننده 43

2-8 آزمایش  واکنش زنجیره‌ای پلیمراز. 43

2-8-1 برنامه حرارتی دستگاه ترمال سایکلر. 45

2-9 آنالیز محصولات PCR… 45

2-9-1 آماده سازی ژل آگارز 45

2-9-2 بار گذاری نمونه‌ها 46

2-9-3 الکتروفورز 46

2-9-4 قرائت نتایج الکتروفورز 46

نتیجه گیری نهایی… 67

پیشنهادات… 68

منابع.. 70

 

 

جدول 1-1 اثر ورم پستان غیر کلینیکی بر اجزای شیر 7

جدول 1-2  تغییرات قابل بررسی در انواع مختلف ورم پستان.. 9

جدول 1-3  عوامل ایجاد کننده ورم پستان محیطی و مسری.. 11

جدول 2-1 دستگاه‌های مورد استفاده 37

جدول 2-2 مشخصات گاوداری‌های مراجعه شده 38

جدول 2-3  پرایمرهای به کار رفته و اندازه محصولات مورد انتظار PCR.. 43

جدول 2-4 برنامه دمایی و زمانی واکنش PCR.. 45

جدول 3-1 نتایج تست ورم پستان کالیفرنیا در فصل گرم و خشک… 51

جدول 3-2 نتایج تست ورم پستان کالیفرنیا در فصل سرد و مرطوب… 52

جدول 3-3 نتایج شمارش سلول‌های سوماتیک در فصل گرم و خشک… 52

جدول 3-4 نتایج شمارش سلول‌های سوماتیک در فصل سرد و مرطوب.. 53

جدول 3-5 فراوانی باکتری‌های گرم مثبت و گرم منفی جدا شده از هر گاوداری در فصل گرم و خشک… 53

جدول 3-6 فراوانی باکتری‌های گرم مثبت و گرم منفی جدا شده از هر گاوداری در فصل سرد و مرطوب.. 54

جدول 3-7 تعداد استافیلوکوکوس اورئوس جدا شده از هر گاوداری در فصل گرم و خشک… 54

جدول 3-8 تعداد استافیلوکوکوس اورئوس جدا شده از هر گاوداری در فصل سرد و مرطوب.. 55

جدول 3-9 فراوانی و درصد مقاومت جدایه‌های تأیید شده با روش‌های مولکولی،  به آنتی بیوتیک‌های مختلف… 56

جدول 3-10 فراوانی استافیلوکوکوس اورئوس واجد ژن mecA از هر گاوداری در فصل گرم و خشک.…………………………………57

جدول 3-11 فراوانی استافیلوکوکوس اورئوس واجد ژن mecA از هر گاوداری در سرد و مرطوب…………………….…………57

جدول 3-12 خلاصه نتایج آزمون میکروبی.. 58

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

شکل 1-1 ساختمان شیمیایی متی سیلین.. 25

شکل 1-2 تشابه ساختمانی سولفانامید و PABA. 33

شکل 2-1 نحوه نمونه‌گیری از سالن شیر دوشی.. 38

شکل 3-1 نمونه CMT مثبت… 48

شکل 3-2 نمای میکروسکوپی شمارش سلول‌های سوماتیک… 48

شکل 3-3 کلونی‌های ایجاد شده از کشت  نمونه‌های شیر  بر روی محیط کشت بلاد آگار 49

شکل 3-4  نمای میکروسکوپی از رنگ آمیزی گرم جدایه‌های مشکوک 49

شکل 3-5 نمونه‌ایی از تست کاتالاز بر روی جدایه‌های مشکوک… 49

شکل 3-6 تست‌های تأییدی برای شناسایی جدایه‌های مورد ارزیابی.. 50

شکل 3-7 نمونه‌ایی از تست تعیین حساسیت جدایه‌های مورد ارزیابی به آنتی بیوتیک‌های مورد مطالعه  با روش انتشار دیسک    51

شکل 3-8 نمونه‌ای از نتایج الکتروفورز جدایه‌های استافیلوکوکوس اورئوس جهت شناسایی ژن‌های femA و mecA با روش multiplex PCR ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….60

نمودار 3-1 نتایج تست ورم پستان کالیفرنیا در فصل گرم و خشک/ سرد و مرطوب.. 58

نمودار 3-2  نتایج شمارش سلول‌های سوماتیک در فصل گرم و خشک/ فصل سرد و مرطوب.. 59

نمودار 3-3 تعداد استافیلو کوکوس اورئوس جدا شده از هر گاوداری در فصل گرم و خشک/ فصل سرد و مرطوب.. 59

2 دیدگاه برای شناسایی  ژن مقاومت به متی سیلین و پروفایل مقاومت آنتی بیوتیکی استافیلوکوکوس اورئوس‌های جدا شده از نمونه‌های شیر مشکوک به ورم پستان در گاوداری‌های صنعتی همدان  

  1. Jaaatp

    alternative to antihistamine for allergy allergy pills on sale best allergy pill

  2. Judith

    запись к психологу бесплатно w-495.ru

دیدگاه خود را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *

قبلا حساب کاربری ایجاد کرده اید؟
گذرواژه خود را فراموش کرده اید؟
Loading...
enemad-logo