Filenaab@gmail.com
filenaab.ir
%31تخفیف

جداسازی و تهیه تک­کلون­های القاء کننده پرحساسیتی دیررسDTH) ) از لیشمانیا ماژور و ارزیابی آن­ها به صورت in vitro و invivo در مقایسه با لیشمانین  

تعداد 102صفحه در فایل word

کارشناسی ارشد ((.M.Sc))

گرایش: علوم سلولی و مولکولی

 

 

جداسازی و تهیه تک­کلون­های القاء کننده پرحساسیتی دیررسDTH) ) از لیشمانیا ماژور و ارزیابی آن­ها به صورت in vitro و invivo در مقایسه با لیشمانین

 

خلاصه فار

خلاصه فارسی

 

مقدمه: لیشمانیا ماژور یک انگل پاتوژن پروتوزوأ داخل سلولی است که عامل طیف وسیعی از عفونت­های پوستی با پیامدهای بالینی متنوع، از یک زخم پوستی خود بهبود شونده تا زخم­های گسترش یافته غیر بهبود شونده می­باشد. ایمنی سلولی نقش مهمی در مقاومت در برابر لیشمانیا ماژور بازی می­کند. واکنش­های حساسیت شدید دیررس که با تست­های پوستی لیشمانین تشخیص داده می­شوند یک روش تشخیصی برای سنجش ایمنی سلولی است و بطور وسیع برای سنجش اپیدمیولوژیکی افراد در معرض آنتی­ژن­های لیشمانیایی، سنجش واکسن­های کاندید و در کمک به تشخیص، مورد استفاده است. تست پوستی لیشمانین پبطور عمومی به نام تست مونتنگرو یا تست لیشمانین شناخته می­شود، که نیازمند یک آنتی­ژن استاندارد خالص و هموژن می­باشد.

هدف: تهیه و سنجش تک­کلون­های جداشده از لیشمانیا ماژور برای تست­ پوستی

روش: جداسازی تک­کلون­ها از سوش لیشمانیا ماژور مرجع (MRHO/IR/75/ER) به روش رقت دهی محدود شونده انجام گرفت. کلون­های جداشده با استفاده از روش­های برون­تنی، SDS-PAGE و تست تکثیر لنفوسیتی با استفاده از سلول­های تک­هسته­ای خون محیطی افراد  بهبود یافته از عفونت لیشمانیا ماژور مورد ارزیابی قرار گرفتند. توانایی هر تک­کلون جداشده با تست پوستی چهار خوکچه هندی ایمن شده دربرابر لیشمانیا ماژور مورد سنجش قرار گرفته شدند. تک­کلون­های جداشده به­همراه لیشمانین در ناحیه اصلاح شده شکمی حیوان­ها بطور داخل پوستی تزریق شدند.

 

نتایج: نتایج نشان دادند که سه نمونه از هفت تک­کلون­ ( نمونه D و(B,C در آنالیزهای SDS-PAGE یک تک باند را نشان دادند. این تک­کلون­ها برای سنجش در تست تکثیر لنفوسیتی مورد استفاده قرار گرفتند که همگی میزان ضریب تحریک (03/2±71/8، 65/2±71/8، 13/2±43/8 به ترتیب) قابل مقایسه­ای با لیشمانین ( 512/3±10) نشان دادند. سنجش درون­تنی تک­کلون­های جداشده، در خوکچه­های هندی نشان داد که هر سه تک­کلون میزان القاء قابل قبولی در مقایسه با لیشمانین از خود نشان دادند. بعلاوه، کلون C (83/0±333/7) میزان القاء معنادار بیشتری از لیشمانین ( mm00/4) در خوکچه­های هندی تست شده با آنتی­ژن C نشان داد.

یافته­ها: اطلاعات نشان دادند که تک­کلون­های جداشده توانایی القاء واکنش­های درون­تنی و برون­تنی قابل مقایسه­ای با لیشمانین استاندارد دارند و امکان استفاده جهت آنتی­ژن خالص و هموژن را در تست­های پوستی در مطالعات لیشمانیوزی را دارند

کلید واژه: ایمنی سلولی، لیشمانیا ماژور، لیشمانین، تست تکثیر لنفوسیتی، تست های پوستی

دسته: , برچسب: , , , ,

 

عنوان                                                                                                                           صفحه

خلاصه فارسی………………………………………………………………………………………………………………………………………. 1

مقدمه …………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 3

فصل اول: کلیات

1-1 تعریف بیماری لیشمانیوز…………………………………………………………………………………………………………….. 6

1-1-2 تاریخچه لیشمانیوز در جهان………………………………………………………………………………………………….. 7

1-1-3 تاریخچه لیشمانیوز در ایران…………………………………………………………………………………………………… 8

1-2 رده­بندی و طبقه­بندی انگل لیشمانیا…………………………………………………………………………………………. 9

1-3 مورفولوژی و سیر تکاملی انگل لیشمانیا……………………………………………………………………………………. 11

1-3-1-1 مورفولوژی انگل………………………………………………………………………………………………………………….. 11

1-3-1-2 شکل بی تاژک (آماستیگوت یا جسم لیشمن)………………………………………………………………… 11

1-3-1-3 شکل تاژک دار (پروماستیگوت)………………………………………………………………………………………… 12

1-3-2-1 سیر تکاملی انگل……………………………………………………………………………………………………………….. 15

1-3-2-2 سير تكاملي انگل در بدن حشره………………………………………………………………………………………. 15

1-3-2-3 پشه خاكي………………………………………………………………………………………………………………………….. 15

1-3-2-4 سیر تکاملی انگل در بدن میزبان مهره دار………………………………………………………………………. 16

1-4  راههای انتقال لیشمانیا به انسان……………………………………………………………………………………………….. 18

1-4-1 انتقال از طریق نیش پشه خاکی…………………………………………………………………………………………… 19

1-4-2  انتقال مکانیکی………………………………………………………………………………………………………………………. 19

1-4-3 انتقال از راه خون……………………………………………………………………………………………………………………. 19

1-4-4 انتقال مستقیم………………………………………………………………………………………………………………………… 19

1-5 بیماری­زایی لیشمانیا……………………………………………………………………………………………………………………. 20

1-5-1 خصوصیات بیماری لیشمانیا…………………………………………………………………………………………………… 19

1-5-2 لیشمانیوز احشایی………………………………………………………………………………………………………………….. 20

1-5-3  لیشمانیوز جلدی پس از کالاآزار (PKDL)………………………………………………………………………. 21

1-5-3-1 لیشمانیوز جلدی و اشکال بالینی آن……………………………………………………………………………….. 22

1-5-3-2  لیشمانیوز جلدی خشک………………………………………………………………………………………………….. 22

1-5-3-3 لیشمانیوز جلدی مرطوب… 22

1-5-3-4 لیشمانیوز جلدی مزمن (Chronic Cutaneous Leisniasihmas)………………….. 23

1-5-3-4-1 شکل لوپوئید یا عود کننده سالک (Lupoid or Recidivan form)………………. 24

1-5-3-5  لیشمانیوز جلدی- مخاطی……………………………………………………………………………………………….. 24

1-6 ايمنولوژي عفونت­هاي ليشمانيا…………………………………………………………………………………………………… 25

1-6-1  مشخصات ايمنولوژيكي در ليشمانيوز پوستي……………………………………………………………………… 25

1-6-1-1 نقش آنتي بادي يا ايمني همورال……………………………………………………………………………………… 25

1-6-1-2 نقش ايمني سلولي در ليشمانيوز جلدي………………………………………………………………………….. 26

1-6-1-3 عمل سلولهاي نوتروفيل و ماكروفاژ در ليشمانيوز…………………………………………………………….. 26

1-6-1-3  عملکرد T-CELL………………………………………………………………. 27

1-6-2  مشخصات ايمنولوژيكي در ليشمانيوز احشايي…………………………………………………………………….. 28

1-6-2-1 نقش ايمني همورال در كالاآزار…………………………………………………………………………………………. 28

1-6-2-3 نقش ايمني سلولي در كالاآزار………………………………………………………………………………………….. 28

1-6-2-4 .نقش مهم سلول های CD+4…………………………………………………….. 29

1-7  روشهای تشخیص و مطالعه لیشمانیوز……………………………………………………………………………………… 30

1-7-1 روشهای مستقیم تشخیص انگل……………………………………………………………………………………………. 30

1-7-1-1 . جداسازی انگل از کناره ضایعات پوستی یا بافتهای آلوده……………………………………………. 31

1-7-1-1 رنگ آمیزی………………………………………………………………………………………………………………………… 31

1-7-1-2 کشت انگل………………………………………………………………………………………………………………………….. 32

1-7-2  روشهای ایمنولوژی در شناسایی انگل…………………………………………………………………………………. 32

1-7-2-1 آزمایشات سرولوژی برای بررسی ایمنی همورال……………………………………………………………… 32

1-7-2-2 آزمایشات ایمنولوژیکی جهت بررسی ایمنی سلولی………………………………………………………… 33

1-7-2-2-1 تستهای پوستی……………………………………………………………………………………………………………… 33

1-7-2-3 ماهیت پاسخهای ازدیاد حساسیت تاخیری (DTH)…………………………………………………….. 34

1-7-3 آزمون پوستی لیشمانین یا تست مونتنگرو…………………………………………………………………………… 35

1-7-3-1 معرف آنتی­ژنی لیشمانین برای تست پوستی………………………………………………………………….. 35

1-7-4 تست سنجش تکثیر لنفوسیتی  ymphocyte proliferation test(L.T.T) ……………………… 37

فصل دوم : مروری بر متون گذشته

فصل سوم: مواد و روشها

3-1کشت انگل…………………………………………………………………………………………………………………………………….. 43

3 -1-1  مواد مورد نياز جهت كشت انگل………………………………………………………………………………………… 43

3-1-2. وسايل مورد نياز جهت كشت انگل………………………………………………………………………………………. 43

3-1-3. طرز تهيه محيط كشت مايع RPMI- 1640‌…………………………………………………………………… 44

3-1-4. طرز تهیه محيط كشت كامل………………………………………………………………………………………………… 44

3-1-5. طرز تهیه محيط كشت NNN………………………………………………………. 44

3-1-6. طرز تهیه (PBS) Phosphate Buffered Saline…………………………….. 45

3-1-7. روش كشت انگل……………………………………………………………………………………………………………………. 45

3-1-8. روش شمارش سلولها……………………………………………………………………………………………………………… 46

3-1-8-1. مواد و وسایل لازم جهت شمارش انگل…………………………………………………………………………… 46

3-1-8-2. شمارش با لام نئوبار………………………………………………………………………………………………………….. 46

3-2. جداسازی انگلها با limiting dilution assay………………………………………. 47

3-2-1. مواد و وسایل مورد نیاز برای Limiting dilution assay………………………… 48

3-2-2. مراحل Limiting dilution assay……………………………………………… 48

3-3. تهیه کرایو برای ذخیره در بانک سلولی……………………………………………………………………………………. 50

3-3-1. مواد و وسایل لازم جهت تهیه کرایو…………………………………………………………………………………….. 50

3-4 تهیه آنتی­ژن Freeze – thaw از انگلها جهت درهم ریختگی غشاء و بروز تمامی آنتی­ژن­ها…………… 52

3-5 الکتروفورز آنتی­ژن­های پروتئینی در ژل پلی­آکریل­آمید ( SDS-PAGE )……………………….. 53

3-5-1 اصول الکتروفورز در ژل پلی­آکریل­آمید………………………………………………………………………………… 53

3-5-2 سیستم بافری…………………………………………………………………………………………………………………………. 54

3-5-3  مواد و وسایل مورد نیاز برای SDS-PAGE……………………………………………………………………. 54

3-5-4 آماده­سازی نمونه…………………………………………………………………………………………………………………….. 57

3-5-6 طرز تهیه بافر الکترود……………………………………………………………………………………………………………… 57

3-5-7. روش انجام SDS-PAGE…………………………………………………………. 58

3-5-8 روش رنگ­آمیزی با کوماسی آبی R- 250…………………………………………… 59

مواد مورد نیاز رنگ­آمیزی کوماسی آبی R- 250:…………………………………………………………………………… 59

3-6 سنجش میزان پروتئین تام با Bradford assay……………………………………… 60

3-6-1 مواد و معرف­های مورد نیاز تست Bradford……………………………………….. 60

3-6- 2 روش کار سنجش پروتئین تام……………………………………………………………………………………………… 61

3-7 تست Lymphocyte transformation test (L.T.T)………………………….. 62

3-7-1 روش انجام تست L.T.T……………………………………………………………. 63

1-3-7-1. مواد و وسایل لازم جهت انجام تست L.T.T……………………………………… 64

3-8 ایمنی­زایی در خوکچه هندی……………………………………………………………………………………………………… 66

3-8-1 مواد و وسایل مورد نیاز ایمنی­زایی در خوکچه هندی…………………………………………………………. 67

3-8-2  نحوه ایمنی­زایی در خوکچه………………………………………………………………………………………………….. 67

3-9 تزریق داخل پوستی آنتی­ژن­ها و سنجش میزانDTH………………………………….. 69

3-9-1 مواد و وسایل لازم برای تزریق داخل پوستی و سنجش میزان DTH………………… 69

3-9-2  مراحل تزریق داخل پوستی…………………………………………………………………………………………………. 69

3-9-3  نحوه سنجش میزان DTH…………………………………………………………. 70

فصل چهارم: نتایج

4-1 کشت اولیه و جداسازی تک کلون­ها با روش limiting dilution……………………… 72

4-2  بررسی پروفایل پروتئینی در آنالیز تک کلون­ها……………………………………………………………………….. 72

4-3 نتایج میزان پروتئین تام آنتی­ژن­ها به روش Bradford………………………………… 73

4-4 بررسی نتایج تست L.T.T……………………………………………………………… 74

4-4-1  نتایج تست L.T.T در نمونه آنتی­ژن B…………………………………………….. 74

4-4-2  نتایج تست L.T.T در نمونه آنتی­ژن C…………………………………………….. 75

4-4-3.  نتایج تست L.T.T در نمونه آنتی­ژن D……………………………………………. 76

4-4-4 نتایج تست L.T.T در نمونه آنتی­ژن لیشمانین استاندارد (M)………………………………………. 76

4-4-5.  بررسی نتایج حاصل  از اندکس تحریکی تمامی آنتی­ژن­ها و میانگین آنها در مقایسه با Con-A……………………………………………………………………………………………. 77

4-4-6 بررسی نتایج کلی L.T.T……………………………………………………………. 79

4-5 بررسی نتایج تست­های DTH بر روی خوکچه­های هندی…………………………………………………….. 79

4-5-1  نتایج تست DTH 24 ساعته…………………………………………………………………………………………….. 79

4-5-2 نتایج تست DTH 48 ساعته………………………………………………………………………………………………. 82

4-5-3 نتایج تست DTH 72 ساعته………………………………………………………………………………………………. 83

فصل پنجم: بحث و پیشنهادات

منابع……………………………………………………………………………………………………………….. 95

خلاصه انگلیسی……………………………………………………………………………………………….. 106

فهرست اشکال و جداول و نمودارها

عنوان                                                                                                                           صفحه

شکل 1-1. اشکال مختلف انگل های لیشمانیا …………………………………………………………………………………. 11

شکل1-2. پروماستیگوت لیشمانیا (خارج سلولی) ……………………………………………………………………………. 14

شکل -1-3. اشکال اماستیگوت و پروماستیگوت …………………………………………………………………………….. 15

شکل 1-4. پشه خاکی ……………………………………………………………………………………………………………………….. 17

شکل1-5. چرخه زندگی لیشمانیا در میزبان مهره دار ……………………………………………………………………. 18

شکل 1-6.. اشکال مختلف لیشمانیوز جلدی (سالک) ……………………………………………………………………… 24

شکل 1-7. بلعیده شدن پروماستیگوت لیشمانیا توسط یک سلول ماکروفاژی ……………………………… 28

شکل3-1. شکل شماتیک لام نئوبار ………………………………………………………………………………………………….. 48

جدول3-1. جدول تهیه  ژل جدا کننده پایین SDS-PAGE …………………………………………………… 56

جدول3-1. جدول تهیه  ژل جدا کننده بالا SDS-PAGE ………………………………… 57

جدول3-1. جدول تنظیم رقت دستگاه spect ………………………………………………………………………………. 62

شکل 4-1. پروفایل پروتئینی باندهای حاصل از تک­کلون­ها در مقایسه با نمونه لیشمانین استاندارد……….. 74

جدول 4-1. نتایج حاصل از تست L.T.T در نمونه آنتی­ژنB …………………………………………………….. 75

جدول 4-2. نتایج حاصل از تست L.T.T در نمونه آنتی­ژن c…………………………………………………….. 76

جدول 4-3. نتایج حاصل از تست L.T.T در نمونه آنتی­ژنی D……………………………… 77

جدول 4-4. نتایج حاصل از تست L.T.T در نمونه آنتی­ژنیM……………………………………………………. 78

جدول 4-5. مقایسه نتایج اندکس تحریکی به دست آمده در حضور نمونه­های آنتی­ژنی تک کلونی

و Con-A…………………………………………………………………………………… 79

نمودار1-4. نتایج میانگین اندکس تحریکی هر یک از تک کلون­ها در تست L.T.T…………… 80

جدول4-6.  میانگین تست­های DTH ،24 ساعته………………………………………………………………………….. 81

  نمودار 2-4. بررسی نتایج تست­های داخل پوستی پس از 24 ساعت ………………………………………… 81

جدول4-7.  میانگین تست­های DTH ، 48 ساعته ………………………………………………………………………… 82

  نمودار 4-3. بررسی نتایج تست­های داخل پوستی پس از 48 ساعت ………………………………………… 82

جدول4-8.  میانگین تست­های DTH ،72ساعته …………………………………………………………………………. 83

نمودار 4-4. بررسی نتایج تست­های داخل پوستی پس از 72 ساعت …………………………………………… 83

نقد و بررسی‌ها

هنوز بررسی‌ای ثبت نشده است.

اولین کسی باشید که دیدگاهی می نویسد “جداسازی و تهیه تک­کلون­های القاء کننده پرحساسیتی دیررسDTH) ) از لیشمانیا ماژور و ارزیابی آن­ها به صورت in vitro و invivo در مقایسه با لیشمانین  ”

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *

لینکدین واتساپ

محصولات مرتبط

%34تخفیف

جداسازی، ژنوتایپینگ و توالی یابی بخشی از ژن فیوژن و تعیین جایگاه فیلوژنتیک ویروس نیوکاسل ‏ولوژنیک ویسروتروپیک دخیل درواگیری اخیر استان ایلام

قیمت اصلی 32,000 تومان بود.قیمت فعلی 21,000 تومان است.
3.18
0 فروش
افزودن به سبد خرید
%34تخفیف

همزمانی مجدد فحلی با استفاده از کیومیت و استرادیول بنزوات در گاوهای شیری

قیمت اصلی 32,000 تومان بود.قیمت فعلی 21,000 تومان است.
3.00
0 فروش
افزودن به سبد خرید
%34تخفیف

بررسی مقایسه‌ای میزان بیان ژن‌های SOX2، MHC-I وCD90 در سلول‌های بنیادی مزانشیمی استحصال‌شده از مغز استخوان و بافت چربی اسب

قیمت اصلی 32,000 تومان بود.قیمت فعلی 21,000 تومان است.
2.53
0 فروش
افزودن به سبد خرید
امتیاز 0 از 5 از 0 دیدگاه

قیمت اصلی 36,000 تومان بود.قیمت فعلی 25,000 تومان است.

  • تاریخ ایجاد بهمن 12, 1399
  • تاریخ بروزرسانی اسفند 13, 1401
  • فروش 0
  • دیدگاه 0
شرایط استفاده از محصول

تمام محصولات به ازای پرداخت پروژه تنها قابل استفاده می باشند. این بدین معنی است که برای استفاده از یک یا چند محصول ، لازم به خرید آن محصول است.

مزایای خرید این محصول:
  • دسترسی به فایل به صورت همیشگی
  • پشتیبانی رایگان
  • پشتیبانی 24 ساعته محصول
  • بازگشت وجه در صورت عدم رضایت مشتری
مشاهده قوانین سایت
قبلا حساب کاربری ایجاد کرده اید؟
گذرواژه خود را فراموش کرده اید؟
ثبت نام کنید
enemad-logo