بررسی ارتباط میان آلزایمر و توکسوپلاسموزیس در بیماران شهر خرم آباد در سال94

فهرست مطالب

عنوان                                                                                                                            صفحه

چکیده 1

فصل اول: مقدمه

1-1 توکسوپلاسما 2

1-1-1 طبقه بندی.. 5

1-1-2 انواع توکسوپلاسما 6

1-1-3 انتشار جغرافیایی.. 6

1-1-4 ریخت شناسی.. 6

1-1-4-1 تاکی زوئیت… 7

1-1-4-2 کیست… 9

1-1-4-3  اووسیست… 9

1-1-5 چرخه زندگی.. 10

1-1-6 بیماریزایی وعلائم بالینی.. 12

1-1-6-1 مکانیسم بیماری.. 12

1-1-6-2 توکسوپلاسموزیس چشمی.. 13

1-1-6-3 توکسوپلاسموزیس منتشر. 13

1-1-6-4 توکسوپلاسموزیس در میزبان مبتلا به اختلالات ایمنی.. 15

1-1-6-5 توکسوپلاسموزیس مادرزادي.. 16

1-1-6-6 علائم بیماری.. 18

1-1-6-7  توکسوپلاسموزیس اکتسابی.. 18

1-1-7 تشخیص…. 19

1-1-8 ایمنی شناسی.. 24

1-1-9 اپیدمیولوژی.. 27

1-1-10 پیشگیری وکنترل. 31

1-1-11 درمان. 31

1-1-11-1 درمان زنان باردار. 33

1-2 دمانس… 33

1-2-1 رویکرد تشخیصی.. 34

1-2-2 علل شایع دمانس… 34

1-2-3 سایرعلل دمانس… 35

1-2-4 بیماری آلزایمر. 37

1-2-4-1 پاتولوژی.. 38

1-2-4-2 اتیولوژی.. 39

1-2-4-3 عوامل خطر. 39

1-2-4-4 بررسی های تشخیصی.. 39

1-2-4-5 درمان. 40

1-2-4-6 اپیدمیولوژی.. 41

1-3 مساله تحقیق.. 41

فصل دوم: مروری بر تحقیقات انجام شده

2-1 توکسوپلاسما در بیماران نورودژنراتیو. 43

فصل سوم: مواد وروش ها

3-1  مواد مورد استفاده 47

3-1-1 کیت های آزمایشگاهی.. 47

3-1-2 مستر میکس PCR.. 47

3-1-3 مارکر bp 100. 47

3-1-4 ژل الکتروفورز. 47

3-1-5 آب مقطر استریل.. 47

3-1-6 مواد شیمایی.. 47

3-1-7 سنتز الیگو نوکلئوتید. 48

3-1-8 وسایل و تجهیزات آزمایشگاهی.. 48

3-2 جامعه مورد بررسی.. 49

3-2-1 روش نمونه گیری.. 49

3-2-2 نمونه گیری.. 49

3-3 روش جداسازی بافی کوت وسرم. 50

3-4 سنجش عیار آنتی بادي IgG توسط کیت تجاري.. 50

3-4-1 اساس آزمایش… 50

3-4-2 مواد ومحلول ها 51

3-4-3 روش کار. 51

3-4-4 ارزشیابی آزمایش… 52

3-4-5 محاسبه کیفی.. 53

3-4-6 نمونه جذب نوری استاندارد ها  ونمودار بدست آمده از کیت تجاری.. 53

3-5 سنجش عیار آنتی بادي  IgMتوسط کیت تجاري.. 54

3-5-1 اساس آزمایش… 54

3-5-2 مواد ومحلول ها 54

3-5-3 روش کار. 55

3-5-6 ارزشیابی آزمایش… 56

3-5-7 محاسبه نتایج.. 56

3-6 تخلیص بافی کوت… 57

3-7 اسخراج DNA.. 57

3-7-1مواد لازم جهت استخراج DNA.. 57

3-7-2 روش کار. 58

3-7-3 اندازه گیری غلظت DNA.. 59

3-7-4 بررسی غلظت  DNA با انجام الکتروفورز. 59

3-8 آزمون PCR.. 59

3-8-1 مواد لازم جهت انجام آزمون PCR.. 59

3-8-2 مواد لازم جهت الکتروفورز محصول PCR.. 60

3-8-3 طرز تهیه بافر TAE 60

3-8-4 طرز تهیه بافر لودینگ DNA.. 60

3-8-5 طرز تهیه محلول رنگ اتیدیوم بروماید. 61

3-8-6 طرز تهیه ژل آگارز. 61

3-8-7 انجام PCR توسط روش استاندارد Taq DNA Polymerase. 62

3-8-8 تنظیم دستگاه ترموسایکلر. 62

3-8-9 الکتروفورز محصول PCR بر روي ژل آگارز. 63

3-8-9-1 الکتروفورز محصول PCR.. 63

3-8-9-2 مراحل الکتروفورز. 63

فصل چهارم : نتایج

4-1 فراوانی ویژگی‌های دموگرافیک و شاخص‌های جمعیت دردوگروه مورد و شاهد. 65

4-2 فراوانی علائم در بیماران آلزایمری.. 66

4-3 میزان فراوانی سرمی آنتی‌بادی‌های اختصاصی (IgG,IgM)ضدتوکسوپلاسما گوندی‌ در دو گروه مورد وشاهد  67

4-4 نتایج آزمون PCR.. 69

4-5 ارزیابی نتایج آزمون PCR.. 69

4-6  ارزیابی نتایج تعیین توالی DNA.. 71

فصل پنجم: بحث و نتیجه گیری

5-1 بحث… 74

5-2 نتیجه گیری.. 79

5-2-1 پیشنهادات… 80

منابع…………………………………………………………………………………………………………………………………………..81    چکیده انگلیسی………………………………………………………………………………………………………………………….89

فهرست جدول ها

عنوان                                                                                                                           صفحه

جدول 1-1. نتایج آزمون IgM فلورسنت انتی بادی درنوزادان مبتلابه توکسوپلاسموزیس مادرزادی……… 24

جدول1-2. شیوع آنتی بادی های توکسوپلاسمائی در کودکان وبالغان. 28

جدول1-3. معاینه مختصر وضعیت روانی. 36

جدول3-1.جذب نوری استانداردها در کیت پیشتاز طب…………………………………………………………………..53

جدول3-2. غلظت ژل مورد نیاز باتوجه به وزن قطعه ژن مورد نظر……………………………………………………62

جدول3-3.میزان وغلظت معرفهای مورد نیاز برای PCR- B₁ ……………………………………………………………62

جدول3-4.تنظیم دستگاه ترموسایکلر برایPCR ……………………………………………………………………………..62

جدول4-1. فراوانی ویژگی های دموگرافیک وشاخص های جمعیت های مورد مطالعه در دوگروه ……….65

جدول 4-2. فراوانی علائم در بیماران آلزایمری ……………………………………………………………………………..66

جدول4-3. نتایج مدل رگرسیون لوجیستیک به منظور شناسایی عوامل موثر در ابتلا به عفونت توکسوپلاسمایی…………………………………………………………………………………………………………………………..67

جدول4-4.تاثیر متغیرهای، جنس، آب ،تست سرولوژی و سن بر روی آلزایمر با استفاده از رگرسیون لجستیک چندمتغیره…………………………………………………………………………………………………………………………………..68

جدول 4-5.تاثیر متغیرهای، جنس، آب ،تست مولکولی و سن بر روی آلزایمر با استفاده از رگرسیون لجستیک چند متغیره………………………………………………………………………………………………………………… ………………68

جدول4-6.مقایسه نتایج دو آزمون الایزا و PCR در دو گروه مورد وشاهد ……………………………………….71

فهرست شکل ها

عنوان                                                                                                                            صفحه

شکل1-1. اشکال مختلف توکسوپلاسما گوندی………………………………………………………………………………..7

شکل1-2. ساختار تاکی زوئیت توکسوپلاسما گوندی………………………………………………………………………..8

شکل1-3. چرخه زندگی توکسوپلاسما گوندی……………………………………………………………………………….11

شکل1-4. نوزاد مبتلا به هیدرو سفالی……………………………………………………………………………………………16

شکل1-5. کوریورتینیت در نوزاد مبتلا به توکسوپلاسموز مادرزادی…………………………………………………..17

شکل1-6. لنفوسیت های آتیپیک……………………………………………………………………………………………………19

شکل1-7. الگوریتم تشخیص سرولوژیک توکسوپلاسموزیس……………………………………………………………21

شکل1-8. نمایش چگونگی تولید آنتی بادی در توکسوپلاسموزیس…………………………………………………..25

شکل1-9. لوب های تمپورال و پاریتال مغز…………………………………………………………………………………….40

شکل3-1. لایه های تشکیل دهنده خون پس از سانتریفیوژ……………………………………………………………….50

شکل4-1. نمودار نتایج حاصل ازعیار سنجی سرمی آنتی بادی های IgMوIgG علیه توکسوپلاسما در دو گروه مورد و شاهد……………………………………………………………………………………………………………………………… 69

شکل4-2. مقایسه نتایج بدست آمده از بررسی سرولوژیک به روش الایزا IgMوIgG…………………………..68

شکل4-3. ستاپ آزمونPCR برای ژن B₁ توکسوپلاسما گوندی……………………………………………………….70

شکل4-4. نتیجه آزمونPCR بر روی نمونه های گروه کنترل…………………………………………………………….70

شکل4-5. نتیجه آزمون PCRبر روی نمونه های گروه مورد………………………………………………………………71

شکل4-6 نتایج حاصل ازتعیین توالی محصولPCR  ژن B₁ توکسوپلاسما گوندی………………………………72

شکل4-7. نتیجه بلاست تعیین توالی محصولPCR  ژن B₁ توکسوپلاسما گوندی………………………………73