بررسي رابطه بين بيماري مولتيپل اسكلروزيس و برخي عفونت‌هاي باكتريايي  

فهرست مطالب

عنوان                                                                                                                                     صفحه

فصل اول: مقدمه

1-1 بيماري مولتيپل اسكلروزيس …………………………………………………………………………………………………………….

1-1-1 تاريخچه …………………………………………………………………………………………………………………………………………

1-1-2 توزيع جغرافيايي ……………………………………………………………………………………………………………………………

1-2 آسيب شناسي بيماري مولتيپل اسكلروزيس …………………………………………………………………………………….

1-2-1 علايم و نشانه‌ها ……………………………………………………………………………………………………………………………..

1-2-2 سير کلينيکي …………………………………………………………………………………………………………………………………

1-3 علت‌شناسي بيماري مولتيپل اسكلروزيس ………………………………………………………………………………………..

1-3-1 زمينه ايمنوژنتيك و عوامل ژنتيكي ………………………………………………………………………………………………

1-3-2 عوامل محيطي ………………………………………………………………………………………………………………………………

1-3-2-1 عوامل غير عفوني موثر در علت شناسي بيماري مولتيپل اسكلروزيس …………………………………..

1-3-2-2 عوامل عفوني موثر در علت شناسي بيماري اسكلروزيس ………………………………………………………..

1-4 مكانيسم‌هاي مورد استفاده توسط عوامل عفوني در القاي بيماري مولتيپل اسكلروزيس ………………..

1-4-1 تقليد مولكولي ……………………………………………………………………………………………………………………………….

1-4-2 فعال شدن باي استندر…………………………………………………………………………………………………………………..

1-5 نقش عفونت‌هاي ويروسي در علت شناسي بيماري مولتيپل اسكلروزيس ……………………………………….

1-6 نقش عفونت‌هاي باكتريايي در علت شناسي بيماري مولتيپل اسكلروزيس ……………………………………..

1-7 هليكوباكتر پيلوري …………………………………………………………………………………………………………………………….

1-7-1 روش‌هاي تشخيص عفونت هليكوباكتر پيلوري …………………………………………………………………………….

1-7-1-1 روش سرولوژي ………………………………………………………………………………………………………………………….

1-7-2 تظاهرات باليني عفونت هليكوباكتر پيلوري ………………………………………………………………………………….

1-7-2-1 هليكوباكتر پيلوري و مولتيپل اسكلروزيس ………………………………………………………………………………

1-8 استرپتوكوكوس پيوژنز ……………………………………………………………………………………………………………………….

1-8-1 طبقه بندي استرپتوكوكوس‌ها ………………………………………………………………………………………………………

1-8-2 استرپتوكوكوس هموليتيك گروه A ……………………………………………………………………………………………..

1

2

3

4

4

5

7

7

8

9

10

11

12

14

15

15

16

17

17

18

20

20

21

22

عنوان                                                                                                                                     صفحه

1-8-2-1 تشخيص عفونت با استرپتوكوكوس پيوژنز………………………………………………………………………………..

1-8-3 استرپتوكوكوس و بيماري‌ها ………………………………………………………………………………………………………….

1-9 آسينتوباكتر كالكواستيكوس ………………………………………………………………………………………………………………

1-9-1 آسينتوباكتر كالكواستيكوس و مولتيپل اسكلروزيس ……………………………………………………………………

1-10 اهداف تحقيق ………………………………………………………………………………………………………………………………….

فصل دوم: مواد و روش‌ها

2-1 دستگاه‌ها و وسايل مورد نياز ……………………………………………………………………………………………………………..

2-2 جمع آوري نمونه‌هاي آزمايشگاهي ……………………………………………………………………………………………………

2-3 اندازه‌گيري ميزان آنتي بادي‌هاي IgG و  IgM ضد هليكوباكتر پيلوري در نمونه‌هاي سرم…………..

2-3-1 مواد مورد نياز و آماده سازي محلول‌ها جهت انجام آلايزا ……………………………………………………………

2-3-1-1 تهيه بافر شست و شو ……………………………………………………………………………………………………………….

2-3-1-2 تهيه محلول رقيق كننده سرم ………………………………………………………………………………………………….

2-3-1-3 تهيه سوبستراي مورد استفاده براي آزمايش ……………………………………………………………………………

2-3-2 مراحل انجام الايزا ………………………………………………………………………………………………………………………….

2-4 تعيين كيفي آنتي استرپتوليزين O در سرم ……………………………………………………………………………………..

2-4-1 مراحل انجام تست كيفي آنتي استرپتوليزين ……………………………………………………………………………….

2-5 تعيين ميزان كمي آنتي استرپتوليزين O در سرم ……………………………………………………………………………

2-5-1 مراحل انجام روش نفلومتري ………………………………………………………………………………………………………..

2-6 بررسي سرولوژي عفونت آسينتوباكتر كالكواستيكوس به روش الايزا ……………………………………………….

2-6-1 تهيه مواد و محيط‌هاي كشت مورد نياز ……………………………………………………………………………………….

2-6-1-1 بافر فسفات نمكي ……………………………………………………………………………………………………………………..

2-6-1-2  بافر كربنات ………………………………………………………………………………………………………………………………

2-6-1-3  بافر بلاكينك الايزا …………………………………………………………………………………………………………………..

2-6-1-4  بافر شستشو و انكوباسيون الايزا ………………………………………………………………………………………………

2-6-1-5  محلول اسيد سولفوريك يك مولار ………………………………………………………………………………………….

2-6-1-6  محيط كشت آگار مغذي ………………………………………………………………………………………………………….

23

23

25

26

28

30

31

32

32

32

33

33

33

35

35

35

36

37

37

37

38

38

38

38

39

عنوان                                                                                                                                     صفحه

2-6-1-7 محيط كشت آبگوشت مغذي ……………………………………………………………………………………………………

2-6-1-8 محيط كشت SIM …………………………………………………………………………………………………………………..

2-6-1-9 محيط كشت آگار خوندار ………………………………………………………………………………………………………….

2-6-1-10 محيط كشت‌هاي قندي …………………………………………………………………………………………………………

2-6-2 تهيه كشت باكتري آسينتوباكتر كالكواستيكوس ………………………………………………………………………….

2-6-3 انجام تست‌هاي شناسايي باكتري آسينتوباكتر كالكواستيكوس …………………………………………………..

2-6-3-1 رنگ آميزي گرم ……………………………………………………………………………………………………………………….

2-6-3-2 بررسي واكنش كاتالاز ……………………………………………………………………………………………………………….

2-6-3-3 بررسي واكنش اكسيداز …………………………………………………………………………………………………………….

2-6-3-4 بررسي هموليز …………………………………………………………………………………………………………………………..

2-6-3-5 بررسي حركت …………………………………………………………………………………………………………………………..

2-6-3-6 بررسي تخمير هيدارت كربن …………………………………………………………………………………………………….

2-6-4 تهيه مايه ميكروبي جهت كوت نمودن چاهك‌هاي الايزا ……………………………………………………………..

2-6-5 مراحل انجام الايزا ………………………………………………………………………………………………………………………….

2-6-6 تعيين غلظت بهينه مواد در سيستم الايزا …………………………………………………………………………………….

2-6-7 بررسي اختصاصات سيستم الايزاي طراحي شده ………………………………………………………………………….

2-7 آناليز‌هاي آماري…………………………………………………………………………………………………………………………………..

فصل سوم: نتايج

3-1 مطالعات كلينيكي و جمعيت‌ شناختي بيماران مبتلا به مولتيپل اسكلروزيس و افراد سالم ……………

3-2  ميزان سرمي آنتي‌بادي‌هايIgG  و IgM ضد هليكوباكتر پيلوري …………………………………………………

3-2-1 بررسي توصيفي ميزان آنتي‌بادي‌هايIgG  و IgM ضد هليكوباكتر پيلوري در نمونه‌هاي سرم….

3-2-2 مقايسه ميانگين‌ها …………………………………………………………………………………………………………………………

3-2-3 مقايسه فراواني‌ها …………………………………………………………………………………………………………………………..

3-2-4 رگرسيون لجستيك ……………………………………………………………………………………………………………………….

3-3 بررسي كيفي و كمي آنتي استرپتوليزين O در نمونه‌هاي سرم ……………………………………………………….

39

39

40

40

40

41

41

41

41

42

42

42

42

43

45

45

46

47

49

49

50

51

52

53

عنوان                                                                                                                                     صفحه

3-4 بررسي‌ سرولوژي آنتي‌بادي‌هاي IgG،IgM،IgA ضد آسينتوباكتركالكواستيكوس در نمونه‌هاي سرم….

3-4-1 تست هاي شناسايي باكتري آسينتوباكتر كالكواستيكوس …………………………………………………………..

3-4-2 تعيين غلظت بهينه مواد در سيستم الايزا و بررسي اختصاصيت سيستم الايزاي طراحي شده ….

3-4-3 ميزان آنتي‌بادي‌هاي IgG، IgM، IgA ضد آسينتوباكتركالكواستيكوس در نمونه‌هاي سرم ……

فصل چهارم: بحث، نتيجه‌گيري و پيشنهادات

4-1 هليكوباكتر پيلوري و مولتيپل اسكلروزيس ……………………………………………………………………………………….

4-2 آسينتوباكتر كالكواستيكوس و مولتيپل اسكلروزيس ………………………………………………………………………..

4-3 استرپتوكوكوس پيوژنز و مولتيپل اسكلروزيس ………………………………………………………………………………….

4-4 پيشنهادات ………………………………………………………………………………………………………………………………………….

پيوست‌ها

1  نتايج حاصل از اندازه‌گيري ميزان آنتي‌بادي‌هاي IgG و IgM ضد هليكوباكترپيلوري در سرم بيماران مبتلا به مولتيپل اسكلروزيس و افراد سالم …………………………………………………………………………………..

2  ميزان قرائت جذب نوري هر يك از آنتي‌بادي‌هاي IgG، IgM، IgA  ضد آسينتوباكتر كالكواستيكوس در طول موج 450 نانومتر در سرم بيماران مبتلا به مولتيپل اسكلروزيس …………………….

3 ميزان قرائت جذب نوري هر يك از آنتي‌بادي‌هاي IgG، IgM، IgA  ضد آسينتوباكتر كالكواستيكوس در طول موج 450 نانومتر در سرم افراد سالم …………………………………………………………………

منابع و ماخذ …………………………………………………………………………………………………………………………………………….

54

54

56

58

61

64

67

69

70

74

78

82

فهرست شكل‌ها

عنوان                                                                                                                                     صفحه

شكل 1-1 انواع مختلف سير كلينيكي در بيماري مولتيپل اسكلروزيس ………………………………………………….

شكل 1-2 برخي از انواع هومولوژي و تقليد مولكولي بين MBP و عوامل عفوني…………………………………..

شكل 1-3 تشابه مولكولي بين آنزيم هاي آسينتوباكتر و آنتي ژن هاي مغزي ………………………………………..

شكل 1-4 مسير احتمالي پاتوژنز در بيماري مولتيپل اسكلروزيس توسط گونه هاي آسينتوباكتر ………….

شكل 2-1 دستگاه خواننده الايزا ……………………………………………………………………………………………………………….

شكل 2-2 دستگاه نفلومتري ……………………………………………………………………………………………………………………..

شكل 3-1 نمودار توزيع پراكندگي سن در بين بيماران مبتلا به مولتيپل اسكلروزيس (MS) و افراد     سالم ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………

شكل3-2 ميانگين ميزان (U/mL) آنتي‌بادي‌هاي IgG و IgM ضد هليكوباكترپيلوري در سرم بيماران مولتيپل اسكلروزيس (MS) و افراد سالم به همراه اشتباه معيار ميانگين‌ها …………………………………………….

شكل3-3 فراواني نمونه هاي سرمي مثبت از نظر آنتي‌بادي‌هاي IgM و IgG ضد هليكوباكتر پيلوري در بيماران مبتلا به مولتيپل اسكلروزيس(MS) و افراد سالم …………………………………………………………………..

شكل3-4 بررسي كيفي ASO در 4 نمونه سرم بيمار به همراه كنترل‌هاي مثبت و منفي ……………………

شكل3-5 تصاوير مربوط به تست‌هاي شناسايي باكتري آسينتوباكتر كالكواستيكوس …………………………….

شكل3-6 ميانگين و اشتباه معيار ميزان آنتي‌بادي‌هاي IgG، IgM، IgA ضد آسينتوباكتر كالكواستيكوس در بيماران مبتلا به مولتيپل اسكلروزيس (MS) و افراد سالم ………………………………………..

شكل3-7 ميانگين و اشتباه معيار ميزان آنتي‌بادي‌هاي IgG،IgM،IgA ضد آسينتوباكتر كالكواستيكوس در گروه‌هاي مختلف كلينيكي بيماران مبتلا به مولتيپل اسكلروزيس ……………………………

6

13

26

27

34

37

49

51

52

53

55

58

60