%53تخفیف

پاسخ گیاه گوجه فرنگی (Solanum lycopersicum) در مراحل مختلف نموی به تنش شوری و امکان انتقال ژن SOS3 به منظور افزایش تحمل به تنش شوری

تعداد135صفحه در فایل word

گوجه‌فرنگی به عنوان یکی از سبزیجات مهم در کشاورزی محسوب می شود. یکی از روش‌هایی که از طریق آن می توان مقاومت به شوری در گیاه را بهبود بخشید بیان ژن‌هایی است که بوسیله تنش شوری القا می‌شوند و در برقراری تعادل یونی و اسمزی در گیاه نقش ایفا می‌کنند. در این پژوهش پاسخ شش ژنوتیپ گوجه‌فرنگی به شوری در مراحل جوانه‌زنی و ابتدای رشد مورد مطالعه قرار گرفت و ژنوتیپ‌های کال جی ان3 و فلات‌سی‌اچ به عنوان ژنوتیپ‌های متحمل معرفی شدند. مطالعه میکروسکوپی بافتهای رویشی تاخیر در رشد و کوچک شدن دهانه آوندی را نشان داد و شوری سبب تسریع در تکوین رویان در گیاهان تحت تنش شد. از طرف دیگر به سبب آنکه به دست آوردن یک روش کشت بافت مناسب جهت باززایی گوجه‌فرنگی برای کارهای مهندسی ژنتیک الزامی است، تاثیر تنظیم کننده‌های رشد متفاوت، ژنوتیپ و نوع قطعه جداکشت مطالعه گردید و ژنوتیپ فلات سی‌اچ بهترین درصد باززایی را داشت. برگ‌های لپه‌ای در تمام ژنوتیپ‌ها بالاترین درصد باززایی را نشان داد. ژن [1]SOS3 یکی از مهم‌ترین ژن‌های مسیر SOS می‌باشد، بنابراین بیان  این ژن می تواند قدم مهمی در تولید گیاهان مقاوم به شوری باشد. در این پژوهش گوجه‌فرنگی بواسطه آگروباکتریوم دارای پلاسمید حاوی ژن SOS3 تراریخت شد. حضور ژن SOS3 در گیاهان تراریخت بوسیله PCR و RT-PCR تائید شد.

[1] Salt Overly Sensitive3

فهرست مطالب

1-                  فصل اول 1

1-1-گوجه‌فرنگی 2

1-1-1- مشخصات گیاهشناسی گوجه‌فرنگی 2

1-1-2-تاریخچه گوجه‌فرنگی 3

1-1-3-اهمیت گوجه فرنگی 4

1-2-کشت بافت گیاه گوجه‌فرنگی 4

1-2-1-اهمیت کشت بافت گیاهی 4

1-2-2-کشت بافت گوجه‌فرنگی 6

1-3-سازوکارهای انتقال ژن به گیاهان 7

1-4-اصول انتقال ژن توسط آگروباکتریوم 8

1-4-1-بیولوژی آگروباکتریوم 8

1-4-2-تراریختی گوجه‌فرنگی به واسطه اگروباکتریوم 9

1-5-تنش‌های زیستی و غیر زیستی در گیاهان 11

1-5-1-اثرات تنش شوری در گیاهان 12

1-5-2-اثر شوری برتنفس 18

1-5-3-اثر شوری بر سوخت و ساز پروتئین 19

1-5-4-اثر شوری بر فعالیت آنزیمی 19

1-5-5-شوری و تولید مواد سمی 20

1-6-اثر عوامل محیطی بر تاثیر گذاری شوری 20

1-7-مقاومت به شوری 21

1-8-سازوکارهای مقاومت به شوری 22

1-8-1-سازوکارهای ریخت شناسی و تشریحی 22

1-8-2-سازوکارهای بیوشیمیایی 23

1-8-3-سازوکارهای ژنتیکی 24

1-9-ژن‌های مسیر SOS 24

1-9-1-تنظیم هوموستازی یونی توسط مسیر تنظیمی SOS 27

2-                  فصل دوم 31

2-1-  اثر تنش شوری بر شاخص های رشد شش ژنوتیپ گیاه گوجه‌فرنگی 32

2-2-  اثر تنش شوری بر ویژگی های تشریحی اندام های رویشی و زایشی 34

2-2-1-   جمع آوري نمونه هاي گياهي جهت مطالعات میکروسکوپی 34

2-2-2-   بررسي هاي بافت شناختي 35

2-3-  بهینه سازی محیط کشت بافت گوجه‌فرنگی 42

2-3-1-   تهیه محیط کشت 43

2-3-2-   کشت بافت گوجه‌فرنگی 46

2-3-3-   آنالیز داده ها 48

2-4-  تراریزش گیاه گوجه‌فرنگی به روش آگروباکتریوم 49

2-4-1-   ساختار ژنی SOS3 49

2-4-2-   آماده سازی آگروباکتریوم 49

2-4-3-   استخراج DNAی پلاسمید 53

2-5-  انتقال ژن به گیاه گوجه‌فرنگی 55

2-5-1-   محیط کشتهای بهینه برای کشت گوجه‌فرنگی 55

2-5-2     تهیّه ی کشت اگروباکتریوم 56

2-5-3-   تلقیح جداکشتها توسّط اگروباکتریوم 57

2-5-4-   انتخاب گیاهان تراریخت گوجه‌فرنگی 57

2-5-5-   استخراج DNA از بافت گیاهی 57

2-5-6-   تایید گیاهان تراریخت به کمک PCR 59

2-5-7-   استخراج RNA از گیاهان تراریخت 62

3-                  فصل سوم: نتایج 66

3-1-  نتایج حاصل از اعمال تنش شوری بر ژنوتیپ های مورد مطالعه گوجه‌فرنگی 67

3-2-  نتایج حاصل از کشت بافت ژنوتیپ های مختلف گوجه‌فرنگی 74

3-3-  بهینه سازی محیط کشت برای ژنوتیپ پتوارلی سی اچ 80

3-4-  بررسی ساختار تشریحی اندام‌‌های رویشی ژنوتیپ پتوارلی سی اچ 81

3-4-1-   بررسی مقایسه ای ریشه در گیاه شاهد و تحت تنش شوری گوجه فرنگی 81

3-4-2-   بررسی مقایسه ای ساقه در گیاه شاهد و تحت تنش شوری گوجه فرنگی 83

3-4-3-   بررسی مقایسه ای برگ در گیاه شاهد و تحت تنش شوری گوجه فرنگی 85

3-4-4-   بررسی مقایسه ای مراحل تکوین رویان در گیاه شاهد و تحت تنش شوری گوجه‌فرنگی 87

3-5-  انتقال ژن SOS3 به گیاه گوجه‌فرنگی 90

3-5-1-   آماده سازی آگروباکتریوم 90

3-5-2-   تراریزش و انتخاب گیاهان تراریخت شده 91

3-6-  استفاده از آهن سکسترون جهت کاهش اثرات منفی آنتی بیوتیکها در محیط رشد 93

3-7-  آنالیزهای مولکولی گیاهان تراریخت مقاوم به کانامایسین 93

3-7-1-   بررسی وجود ژن SOS3 در DNA گیاهان حاصل 93

3-7-2-   بررسي بيان ترانسژن با RT-PCR 94

3-7-3-   سنتز cDNA 95

4-                  بحث 98

4-1-  پیشنهادها 110

5-                  منابع: 111

قبلا حساب کاربری ایجاد کرده اید؟
گذرواژه خود را فراموش کرده اید؟
Loading...
enemad-logo