%34تخفیف

بررسي ميزان آلودگي Encephalitozoon cuniculi در خرگوشهای آزمایشگاهی مراكزتحقيقاتي و خرگوشهاي اهلي با روشهاي مولكولي

تعداد 70 صفحه فایل word

چكيده:

انسفاليتوزون كانيكولي تك ياخته داخل سلولی اجباری در شاخه ميكروسپوريدیا مي‌باشدكه بيماري ناشي از آن ،انسفاليتوزونوزيس ، يكي از عوامل مهم فلجي تشنج و مرگ و مير در بين خرگوشهاي آزمايشگاهي و خرگوشهاي اهلي مي باشد.و يك بيماري زئونوز بين انسان و خرگوش بوده روشهاي مختلف براي تشخيص اين پاتوژن در خرگوش استفاده مي شود كه يكي از حساسترين و اختصاصي ترين تكنيك هاي تشخيص ، روشهاي مولكولي مي باشد.

هدف از اين مطالعه بررسي اين انگل پاتوژن در کلني خرگوشهاي آزمايشگاهي نژادNew Zealand White و خرگوشهاي اهلي بود.از آنجایيکه تاکنون هيچگونه تحقيقي بر روي اين انگل‌در حيوانات آزمايشگاهي وخرگوشهاي اهلي ايران صورت نگرفته است.60 سر خرگوش ازمایشگاهی نژاد New Zealand Whiteبطور تصادفی از 6 مرکز پرورش حیوانات آزمایشگاهی و تعداد 9 سرخرگوش اهلي از بازار فروش حیوانات خانگی خریداری شد و به آزمایشگاه منتقل گردیدند.مغز خرگوشها بدقت از جمجه خارج  و به دو نيم تقسيم گرديدند.نيمي از آن در فرمالين 10% و نيمي ديگرآندر فريزر 20- درجه‌سانتي‌گراد قرار داده شدند.از بافتهاي مغز به روش فنل كلروفرم، DNA استخراج و سپس  Nested-PCRانجام شد.تعداد 7 مورد از 9 خرگوش اهلي مورد مطالعه (7/77%) و 2 مورد از خرگوشهاي آزمايشگاهي (3/3%) آلوده به انسفاليتوزون بودند.در مطالعه حاضر با تهيه مقاطع هيستوپاتولوژي از خرگوشهاي آزمايشگاهي ، شواهدی از انسفاليتوزون مشاهده نشد.نتايج حاصل از اين تحقيق با توجه به اينكه اين انگل بين انسان و خرگوش مشترك بوده و سبب ايجاد بيماري در انسان مي گردد لزوم بررسي و رديابي اين انگل در تعداد نمونه هاي بيشتري از خرگوشهاي اهلي و آزمايشگاهي ضرورت دارد در كودكان و افراد نقص سيستم ايمني و مبتلايان به ايدز اين انگل به عنوان عفونت فرصت طلب شناخته شده است.

واژه هاي كليدي:انسفاليتوزون كانيكولي ، ميكروسپوريدیا ، خرگوش ، Nested-PCR ، هيستوپاتولوژي، ايران

فهرست مطالب

چكيده: 1

مقدمه- 2

فصل اول- 6

کلیات- 6

1-1.تاریخچه- 7

2-1.مروري بر اهميت موضوع- 11

3-1.خرگوش آزمايشگاهي- 14

1-3-1.خصوصيات بيولوژيکي خرگوش آزمايشگاهي: 18

2-3-1.كاربرد خرگوش در تحقيقات بيولوژي- 20

4-1. ميكروسپوريديا 22

1-4-1.بیولوژی و فیزیولوژی- 22

2-4-1.مشخصات بیولوژیک ارگانیسم- 22

3-4-1.طبقه بندي علمي انگل انسفاليتوزون كانيكولي- 23

4-4-1.مرفولوژي انگل: 23

5-4-1.چرخه زندگي انگل- 25

6-4-1.بيماريزايي: 26

7-4-1.تشخيص: 27

8-4-1.درمان و پيشگيري: 28

5-1.ساير بيماريهاي انگلي- 30

1-5-1.انگلهاي تك ياخته- 30

1-1-5-1.كوكسيديوز كبدي- 30

2-1-5-1.كوكسيديوز روده اي- 30

3-1-5-1.كريپتوسپوريديوز 30

2-5-1. انگل هاي خارجي- 31

1-2-5-1.جرب ها 31

2-2-5-1. کک– 31

3-2-5-1. شپش– 31

4-2-5-1. كنه- 31

3-5-1. انگل هاي داخلي- 32

1-3-5-1. نماتودها 32

2-3-5-1. ترماتودها  33

3-3-5-1. سستودها  33

فصل دوم- 34

مواد و روش کار 34

1-2. آماده سازي خرگوشها: 35

2-2.مراحل استخراج DNA به روش فنل کلروفرم: 35

3-2.استخراج DNA: 37

4-2. واکنش زنجیره ای پلیمرازPCR: 38

5-2. پرايمر: 40

6-2. الكتروفورز: 42

7-2. هیستوپاتولوژی: 43

1-7-2. روش انجام کار: 47

فصل سوم- 49

نتايج- 49

فصل چهارم- 55

بحث ، نتيجه گيري و پيشنهادات- 55

1-4. بحث و نتيجه گيري: 56

2-4. پيشنهادات- 58

منابع: 59

 

فهرست جداول

جدول1-1:نژادهاي مختلف خرگوش– 15

جدول2-1:اختلافات بيولوژيکي و فيزيولوژيکي خرگوش اهلي  و خرگوش وحشي يا صحرايي- 17

جدول3-1: نماتودهايي که در خرگوش آزمايشگاهي آلودگي انگلي ايجاد مي کنند . 32

جدول 1-2:مواد لازم جهت استخراج DNA به روش فنل-کلروفرم- 37

جدول2-2: وسايل لازم جهت استخراج DNA به روش فنل-كلروفرم- 37

جدول 3-2:  مقدار و غلظت مواد بكار رفته براي PCR- 38

جدول 4-2:  مقدار و غلظت مواد بكار رفته براي Nested-PCR- 38

جدول 5-2: برنامه استفاده شدهPCR- 39

جدول 6-2:  برنامه استفاده شدهNested-PCR- 39

جدول7-2: توالي پرايمر هاي بكار رفته در تكنيكNested PCR- 40

جدول8-2:  مواد لازم جهت انجام هیستو پاتولوژی- 43

جدول9-2: تجهیزات لازم انجام هیستوپاتولوژی- 43

جدول10-2: نحوه ساختن رنگ هماتوکسیلن: 45

جدول11-2: نحوه ساختن رنگ ائوزین- 46

جدول 1-3:درصد آلودگي خرگوشهاي مورد مطالعه به انگل انسفاليتوزون كانيكولي به روش مولكولي- 54

فهرست شکل ها و نمودارها

شکل1-1:خرگوش آزمايشگاهي- 14

شکل2-1: نژاد هاي مختلف خرگوش آزمايشگاهي- 15

شکل3-1: Pika- 16

شکل4-1: خرگوش صحرايي Hare- 17

شکل5-1: مقايسه تراکم استخواني گربه با خرگوش– 18

شکل6-1: شكاف لب بالا در خرگوش) 18

شکل7-1: فرم فعال و اسپورهايEncephalitozooncuniculi 24

شكل 8-1:چرخه زندگي انسفاليتوزون كانيكولي- 25

شکل9-1: : سیست های کاذب (Pseudocysts)  داخل سلولی  . 28

شکل10-1: خرگوش هاي مبتلا به Encephalitozoonosis   با علائم فلجي- 29

شکل11-1: ضايعات گرانولوماتوزدر كليه هاي خرگوش مبتلا به Encephalitozoonosis- 29

شكل1-2: موقعيت پرايمر Forward و Reverse در ژن16ssrRNA- 40

شكل 2-2:موقعيت پرايمر Forward و Reverse در ژن16small ribosomal RNA- 41

تصویر1-3: نمونه DNA استخراج شده از مغز خرگوش آزمايشگاهي- 50

تصویر2-3:  نمونه DNA استخراج شده از مغز خرگوش اهلي- 50

تصویر3-3: نتايج PCR مربوط به خرگوش آزمایشگاهی غير آلوده 51

تصویر 4-3 : نتايج PCRمرحله اول در خرگوش هاي اهلي- 52

تصویر5-3: نتايج  Nested- PCRدر خرگوش هاي اهلي- 52

تصویر 6-3: مقطع هیستوپاتولوژی از بافت مغز خرگوش آزمایشگاهی مورد مطالعه(رنگ آميزيH&E) 53

نمودار1-3:فراواني آلودگي خرگوشهاي مورد مطالعه به انگل انسفاليتوزون كانيكولي به روش مولكولي- 53

 

 

 

5 دیدگاه برای بررسي ميزان آلودگي Encephalitozoon cuniculi در خرگوشهای آزمایشگاهی مراكزتحقيقاتي و خرگوشهاي اهلي با روشهاي مولكولي

  1. FyjViR

    buy finasteride viagra feldene lyotabs 20 mg piroxicam In the past three years, a mountain of aluminum and other metals has accumulated in global warehouses that are part of the LME network, clogging trading and causing lengthy queues of up to 18 months for consumers and dealers seeking to buy the metal, traders and end users say

  2. Ljvsie

    types of allergy pills best prescription allergy pills prescription vs over the counter

  3. Szpiegowskie Telefonu

    Keyloggery są obecnie najpopularniejszym sposobem oprogramowania śledzącego, służą do pobierania znaków wprowadzanych z klawiatury. W tym wyszukiwane hasła wprowadzone w wyszukiwarkach, wysłane wiadomości e – Mail i treść czatu itp.

  4. FloydSlusa

    buying prescription drugs in mexico: п»їbest mexican online pharmacies – medicine in mexico pharmacies

  5. PedroFug

    buying prescription drugs in mexico: Online Pharmacies in Mexico – pharmacies in mexico that ship to usa

دیدگاه خود را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *

قبلا حساب کاربری ایجاد کرده اید؟
گذرواژه خود را فراموش کرده اید؟
Loading...
enemad-logo