%31تخفیف

سنتز كمپلكس فلزي با كرستين و بررسي  تغييرات بيوشيمايي و ميانكنش آن با  DNA

تعداد 108صفحه در فایل word

کارشناسي ارشد  در رشته بيوشيمي

سنتز كمپلكس فلزي با كرستين و بررسي  تغييرات بيوشيمايي و ميانكنش آن با  DNA

واژه‌های کلیدی:  DNAتیموس گاوی؛ آنتی اکسیدان؛ کمپلکس­های کرستین-بيسموت ؛ برهم­کنش؛ اتصال به سطوح خارجی.

چکیده:

در سال­های اخیر تحقیقات بسیاری بر روی برهم­کنش مولکول­های کوچک با DNA متمرکز شده است. DNA معمولاً اولین هدف داخل سلولی داروهای ضد سرطان می­باشد، بنابراین برهم­کنش بین مولکول­های کوچک و DNAمی­تواند منجر به آسیب در سلول­های سرطانی و توقف تقسیم سلول­های سرطانی و در نتیجه مرگ سلولی شود.

فلاونوئیدها گروه بزرگی از ترکیبات پلی­فنولی طبیعی هستند که به طور گسترده در گیاهان عالی توزیع شده­اند. کرستین (3،′ 3،′4، 5 و7 پنتاهيدروكسي فلاون) یک آنتی اکسیدان هیدروکسیله قوی و یک فلاونوئید عمده در رژیم غذایی است که شایع­ترین ترکیب فلاونوئیدی موجود در طبیعت نیز محسوب می­شود. این ترکیب به طور کلی در بسیاری از غذاهای رايج از جمله سیب، چای، پیاز، آجیل، گل کلم و کلم یافت می­شود. فعالیت­های بیولوژیک کرستین در حضور یون­های فلزی تحت تأثیر قرار می­گیرد. گروه­های اکسو و هیدروکسی موجود در ساختار کرستین دارای توانایی تشکیل کمپلکس با کاتیون­های مثبت مختلف و تولید ترکیبات پایدار هستند. در این مطالعه کمپلکس­های کرستین با یون­های بيسموت (III)  سنتز شده و با استفاده از روش­های طیف سنجی مورد شناسایی و بررسی قرار گرفته است. سپس فعالیت آنتی اکسیدانی این کمپلکس با استفاده از روش­های پاکسازی رادیکال­های DPPH، فعالیت کاهندگی یون­های فریک (FRAP) و سنجش ABTS مورد ارزیابی قرار گرفت. همچنین برهم­كنش دو کمپلکس كرستين- بيسموت (III)و کمپلکس کرستین-قلع(II) با DNA تیموس گاوی با استفاده از طیف سنجی  ماوراءبنفش-مرئی، امپدانس، فلورومتری وويسكوزيته متري مورد بررسی قرار گرفت.

نتايج هر سه روش DPPH، FRAP و ABTS نشان می­دهد که فعالیت آنتی اکسیدانی کمپلکس در مقایسه با کرستین به میزان اندکی کاهش یافته است. از آنجائیکه فعالیت آنتی اکسیدانی فلاونوئیدها به تعداد و محل گروه­های هیدروکسیل در ساختار آنها وابسته است، نتایج بیان کننده جایگزینی یون­های فلزی بيسموت  (III) با گروه­های هیدروکسیل در ساختار کرستین می­باشد که در نتیجه توانایی هیدروژن دهندگی کمپلکس­ها در مقایسه با کرستین تنها کمتر می­شود.

طيف جذبي کمپلکس کرستین-قلع(II) با اضافه كردن  DNA افزايش جذب(هايپركروميسم) را نشان داد و ثابت اتصال105×5 بدست آمد كه با ثابت اتصال بدست آمده از فلورسانس دريك محدوده است(105×8 )است.ويسكوزيته  DNA با افزايش غلظت كمپلكس افزايش نشان داد.

هايپركروميسم در طيف جذبي ماوراءبنفش-مرئي و افزايش شدت فلورسانس در طيف كمپلكس كرستين- بيسموت(III) در حضور  DNA حاصل شد و ثابت اتصال كمپلكس مقدار پاييني بدست آمد(105).ويسكوزيته DNA به همراه افزايش غلظت كمپلكس افزايش يافت .

نتایج داده ها نشان داده است که شیوه­ی اتصال هر دو کمپلکس به DNA، غيردرج شونده و اتصال به سطح DNA است و برهم­كنش هر دو کمپلکس با DNAاحتمالاَ از طریق گروه­های فسفات حضور یافته در اسکلت DNA است.

فصل اول

بررسي منابع.. 1

1-1-فلاونوئيدها 1

1-1-1-ساختار و ويژگي طيف سنجي فلاونوئيدها 1

1-1-2-كمپلكس­هاي فلزی فلاونوئیدها 3

1-1-2-1-فعالیت زیستی کمپلکسهای فلاونوئید-فلز: شلاته کردن فلز به عنوان آنتي اكسيدان. 4

1-1-3-كرستين.. 6

1-3-ساختمان DNA.. 6

1-3-1-نيروهاي پايدار كننده ساختمان دوم DNA.. 8

1-4-پلي مورفيسم ساختار DNA دو رشته اي.. 9

1-5- ويژگي‌هاي كلي ميان كنش دارو  با DNA.. 12

1-5-1-اتصال از نوع درج شونده……………………………………………………………………….  14

1-5-2-درج شونده­هاي ساده………………………………………………………………………………………………..15

1-5-3- درج شونده­هاي پيچيد……………………………………………………………………….…16

1-5-4-درج شونده­ها به شكاف…………..…………………………………………………………….. 19

1-5-5-درج شونده­ها به شكاف بزرگ………..…………….………………………………………….. 20

1-6-مولكول­هاي متصل شونده به شكاف..ه  ………..…………………………………………………………    22

1-7-روشهاي تحليلي برهم كنش مولكولهاي كوچك با  DNA.. 25

1-7-1-طيف سنجي مرئي- فرابنفش…. 25

1-7-2-طيف سنجي فلور سانس…. 26

1-7-3-ويسكوزيته. 27

1-7-4-طيف سنجي امپدانس…. 27

1-7-4-1-قانون اهم-مقاومت… 28

1-7-4-2-روشهاي نمايش امپدانس…. 30

1-7-4-3-كاربرد امپدانس در زيست شناسي.. 32

1-8-هدف از اين مطالعه. 33

فصل دوم : مواد و روش­ها

2-مواد و روشها 37

2-1-مواد مورد استفاده 37

2-2-دستگاههاي مورد استفاده 38

2-3-تهيه بافر تريس…. 38

2-4-تهيه محلول  DNA.. 39

2-5-سنتز كمپلكس كرستين-بيسموت (III) 40

2-5-1-تعيين استوكيومتري بين ليگاند و فلز. 41

2-6-مطالعات آنتي اكسيداني.. 42

2-6-1-روش راديكال زدايي DPPH.. 42

2-6-1-1-تهيه محلول  DPPH.. 43

2-6-1-2-روش كار. 43

2-6-2-سنجش قدرت آنتي اكسيداني به روش FRAP. 44

2-6-2-1-تهيه محلول. 44

2-6-2-2-آماده سازي محلولFRAP. 45

2-6-2-3-روش كار. 45

2-6-3- روش آنتي اكسيدانيABTS. 46

2-6-3-1-تهيه محلول. 46

2-6-3-2-روش كار. 47

2-7-بررسي بر هم كنش بين كمپلكس فلزي و  DNA.. 47

2-7-1-مطالعات طيف سنجي ماورء بنفش-مرئي(UV-visable) 47

2-7-2-طيف سنجي فلورسانس…. 48

2-7-3-اندازه گيري ويسكوزيته. 48

2-7-3-1-ويسكومتر موئي اولسوالد. 49

2-7-4- اسپكتروسكوپي امپدانس…. 50

2-7-4-1-تهيه  الكترود تغيير يافته با  DNA.. 51

2-7-4-2-ميانكنش الكترود تغيير يافته با  DNAو هريك از كمپلكسها 51

فصل سوم

3-1-تشكيل كمپلكس بين كرستين و فلز بيسموت… 54

3-1-1-طيف سنجي ماوراءبنش مرئي(UV- visable) 54

3-1-1-2-استوكيومتري بين فلز و ليگاند(Job`s method) 56

3-1-1-3-بررسي تشكيل كمپلكس به روش طيف سنجي مادون قرمز. 57

3-1-3-مطالعه طيف رزونانس مغناطيسي هسته اي.. 59

3-2-مطالعه آنتي اكسيداني كرستين و كمپلكسQ-Bi. 60

3-2-1-فعاليت آنتي اكسيداني كرستين و كمپلكس Q-Bi به روش پاكسازي راديكال  DPPH.. 60

3-2-2-سنجش فعاليت آنتي اكسيداني كرستين و كمپلكس به روش FRAP. 62

3-2-3-سنجش فعاليت آنتي اكسيداني كرستين و كمپلكس به روش  ABTS. 64

3-3-مطالعه بر هم كنش بين كمپلكس و  DNA.. 66

3-3-1-طيف سنجي مرئي-فرابنفش…. 66

3-3-1-1- اثر  DNA بر روي طيف اشعه ماوراءبنفش-مرئي كمپلكس كرستين-بيسموت(III)  و کرستین-قلع(II) 68

3-3-1-2-بررسي تغييرات طيف جذبي DNA.. 71

3-3-1-2-1-بررسي تغييرات طيف جذبي  DNA  در حضور کمپلکس کرستین-قلع((II. 72

3-3-1-2-2-بررسي تغييرات طيف جذبي  DNA  در حضور كمپلكس كرستين –بيسموت (III) 73

3-3-2-طيف سنجي فلورسانس…. 73

3-3-2-1-مطالعه برهمكنش بين  DNA كمپلكس كرستين-قلع( II ) با روش فلورسانس مستقيم. 74

3-3-2-2-مطالعه برهمكنش بين  DNA و كمپلكس کرستین- بیسموت (III) با روش فلورسانس مستقيم  77

3-3-3-اندازه گيري ويسكوزيته. 80

3-3-4-مطالعات الكتروشيمي امپدانس…. 82

3-4-نتيجه گيري…………………………………………….………………………………………………………………….87

3-5-پيشنهادات…………………………………………………………………………………………………91

منابع………………………………………………………………………………………………………….……92

فهرست اشكال و جداول

شماره                                                                                                     صفحه

شکل1-1- ساختار فلاونوئیدها……………..……………………….…………………………2

شکل 1-2- ساختار کرستین.. 6

شكل 1-3 -نحوه اتصال نوكلئوتيدها به يكديگرA=T)  و C º G ) ……………………………….7

شکل 1-4- شکل آرایش فشرده و مارپیچ تصادفی پلی نوکلو تیدهای تک رشته ای …………………8

شکل1-5-تمام زوایای موجود در یک واحد نوکلوتیدی از زنجیره پلی نوکلئوتید.چرخش این زوایا به نوبه ی خود بر پلی مورفیسم DNA اثر میگذارد. 11

شکل1-6- مقایسه conformation BIو BII. 11

شكل 1-7- مولكول پروفلاوين كه بر روي يك جفت باز قرار گرفته است… 14

شكل 1-8- درج شدگي يك مولكول داروي مسطح به DNA.. 15

شكل 1-9- درج شونده‌هاي ساده (پروفلاوين-اتيديوم-دائونوروبيسين وآدريامايسين). 17

شكل 1-10- قرار گرفتن يون منيزيم هيدراته در شكاف بزرگ… 17

شكل 1- 11- درج شونده‌هاي پيچيده (داروي ضد سرطان دائونومايسين). 18

شكل1-12- درج شونده‌هاي پيچيده (اكتينومايسين D). 18

شكل1-13- درج شونده‌ها به شكاف بزرگ (ساختمان داروي ضد سرطان آكريدينDACA). 20

شكل 1- 14- درج شونده‌ها به شكاف بزرگ (ساختمان كريستالي كمپلكسي بين 9-آمينو DACA وتوالي d(CGTACG) از DNA ). 21

شكل 1- 15- درج شونده‌هاي دوتايي.. 22

شكل 1- 16- بعضي مولكولهاي متصل شونده به شكاف‌ها 23

شكل 1- 17- ساختمان كريستالي كمپلكسي بين Hoechst33258ودو رشته‌اي d(CGCAAATTTGCG) 24

شكل 1- 18- نمايش سطح دو رشته‌اي DNA ديكرسون – درو با نمايش شكاف كوچك… 25

شکل 1-19- انتقالات رخ داده در طي جذب و نشر فلورسانس…………………………………..27

شكل 1-20-.شكل نمادين واكنشهايي كه در سطح الكترود با گونههاي اكسيدو احيا در محلول انجام ميشوند……………………………………………………………………………………….30

شكل 1-21-نموار نايكويست… 31

شكل 1-22-.نمودار سل رندر. 31

شكل2-1 -.مسير تغيير قدرت آنتي اكسيدان كرستين با راديكالDPPH.. 43

شکل 2-2- ويسکومتر موئينه اوسوالد. 50

. شکل  -2-3-تصویر الکترود که بر روی آن لایه ای از DNA پوشانده شده است را نشان میدهد.. 52

شكل3-1-طيف ماوراءبنفش-مرئي كرستين(5-10×6مولار) و غلظت هاي مختلف ازكاتيون بيسموت 5-10× 3, (a) 5-10× 5/4(b) ,5-10× 6 ,(c) 5-10× 5/7 (d) ,5-10× 9 (e)و 5-10× 5/10 (f) 55

3-2-نمودارکسر مولی کرستین در طول موج 430 نانومتر. 56

شكل3-3-طيفIR  كرستين (A) و كمپلكس كرستين- بيسموت(III) …..…………………….(B)58

شکل 3-4- درصد فعالیت پاکسازی رادیکالهای DPPH کرستین و کمپلکس کرستین – بيسموت(III)  در غلظتهای مختلف    61

شكل 3-5- ساختار شكل گرفته بين TPTZ و يون هاي آهن در معرف   FRAPو کاهش یونهای آهن در حضور مولکول آنتی اکسیدان. 62

شکل 3-6- نمودار استاندارد FRAP به منظور تعیین ارزش FRAP با استفاده از محلولهای استاندارد سولفات آهنΙΙ …………………………………………….………………………………………63

شکل 3-7- فعالیت آنتی اکسیدانی غلظتهای مختلف کرستین و کمپلکس کرستین- بيسموت(III)  در روش FRAP، مقادیر بر حسب ارزش FRAP بیان شدهاند………………………………………64

شکل 3-8- درصد پاکسازی رادیکالهای آزاد ABTS توسط کرستین و کمپلکس کرستین – بيسموت(III) پس از گذشت 5 دقیقه. 65

3-9-طيف ماوراء بنفش- مرئي کمپلکس کرستین-بیسموت(III)  در حضور غلظتهاي مختلف(0,05/0,1/0,2/0,6/0,7/0و8/0) DNA تيموس گاوي [ct-DNA]/ [Q-Bi (III) complex] =. 69

شکل3-10- طيف ماوراء بنفش- مرئي کمپلکس کرستین-قلع(II) در حضور غلظتهاي مختلف(0,02/0, 04/0, 08/0,2/0,6/0,8/0و1) DNA تيموس گاوي [ct-DNA]/ [Q–Sn(II) complex] =. 69

شکل 3-11- نمودار [DNA]/(εa- εb) در مقابل [DNA]. 70

شکل 3-12- نمودار [DNA]/(εa- εb) در مقابل [DNA]. 71

شکل 3-13- طیف ماوراء بنفش مرئی DNA تیموس گاوی در حضور افزایش غلظت کمپلکس کرستین – قلع((II (0, 2/0,4/0,6/0,7/0,8/0و1) در pH خنثی، ri= [Q–Sn(II) complex]/ [DNA] 72

شکل 3-14- طیف ماوراء بنفش مرئی DNA تیموس گاوی در حضور افزایش غلظت کمپلکس کرستین – بیسموت ( (III(0،1/0،2/0،3/0،4/0،5/0،5/0،8/0و1) در pH خنثی.] ri= [Q-Bi (III) complex]/ [DNA]……………………………………………………………………………………………………………………72

شکل 3-15- طيف نشري کمپلکس کرستین-قلع  با افزايش غلظتDNA Ct- (0,03/0, 04/0,05/0,06/0,07/0,08/0, 09/0,2/0,4/0,6/0,8/0و1 ) در دماي اتاق [DNA]/[ Q–Sn(II) complex] =. 75

شکل 3-16- نمودار استرن-ولمر، مربوط به خاموشسازي فلورسانس کمپلکس کرستین-قلع(II)   توسط خاموشکنندهي ct-DNA.. 76

شکل 3-17- طيف نشري کمپلکس کرستین-بيسموت با افزايش غلظت ct-DNA (0,03/0,05/0,07/0,3/0,4/0,8/0,9/0,1)در دماي اتاق [ct-DNA]/[ Q–Bi(III) complex] ……………77

شكل3-18-مقادير log [(F0  – F)/(F – F∞)] با log[DNA] 79

شکل 3-19- نمودار تغييرات ويسکوزيتهDNA با غلظت 5-10×5 مولار و pH خنثي در حضور افزايش غلظت كمپلكس كرستين- قلع(II) (0,7/0,9/0,1,5/1و2) [Q–Sn(II) complex]/[DNA] 82

شکل 3-20- نمودار تغييرات ويسکوزيتهDNA با غلظت 5-10×5 مولار و pH خنثي در حضور افزايش غلظت كمپلكس كرستين-بيسموت(III) (0,7/0,9/0,1,5/1و2) [Q-Bi (III) complex]/[DNA] 82

شكل3-21-طيف امپدانس الكترود پوشش داده شده با DNA.. 84

شكل 3-22-طيف امپدانس الكترود پوشش داده شده با( II)DNA-Q-S. 84

شکل 3-23- طیف امپدانس الکترود پوشش داده شده با (III)  DNA-Q-Bi. 85

جدول3-3- مقدار Rct از الکترود تغییر یافته در محلول 1mM Fe(CN)6 3–/4– 85

3-23-ساختارهاي پيشنهادي براي كمپلكس كرستين-بيسموت… 87

 فهرست جدول                     صفحه

جدول2-1-.نسبت محلولها درروش جاب………………………………………………………41

جدول3-1- داده هاي طيف سنجي IR كرستين و كمپلكس كرستين-بيسموت )جايگاه باند درCm-1). 59

جدول3-3- جدول3-3- مقدار Rct از الکترود تغییر یافته در محلول 1mM Fe(CN)6 3–/4

.. 79

1 دیدگاه برای سنتز كمپلكس فلزي با كرستين و بررسي  تغييرات بيوشيمايي و ميانكنش آن با  DNA

  1. Bgacud

    best prescription allergy pills names of prescription allergy pills allergy medication without side effects

دیدگاه خود را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *

قبلا حساب کاربری ایجاد کرده اید؟
گذرواژه خود را فراموش کرده اید؟
Loading...
enemad-logo