%53تخفیف

تعیین طرح واره¬یDNA از نمونه های استخوانی کهنه با استفاده از رو¬ش¬های تکثیر کل ژنوم

تعداد165 صفحه در فایل word

زمینه و هدف: وجود مقادیر اندک DNA شامل قطعات خرد شده و انواع مهار کننده ها از موانع عمدهی تعیین طرح واره ی DNA (DNA Profiling) در نمونه های های حاصل از استخوان های کهنه است. تکثیر تعداد اندک نسخه هایDNA و کاهش مهار کننده ها با استفاده از روش های تکثیر کلی ژنوم (WGA) مانند روش خاص I-PEP PCR (Improved Primer Extension Preamplification) امکان پذیر است.

روش بررسی: با ارزیابی شیوه های موجود PEP و I-PEP بر روی رقت های متفاوت DNA، تلاش در جهت دستیابی به روش بهینه ای که با کمترین مقدار DNAالگو، طرح واره ای قابل اعتماد را ارائه دهد، انجام گرفت. این روش شامل نوعي PCR است که از پرایمرهای 15 نوکلئوتیدی تصادفی پیش از انجام PCR های اختصاصی استفاده می کند. پس از ارزیابی کارایی این روش، از این روش در تکثیر اختصاصی و تعیین طرح وارهی DNA حاصل از 65 نمونه از بقایای استخوان های کهنه استفاده شد.

یافته ها: پس از بهینه سازی روش I-PEP و تکثیر کل ژنوم با روش جدید، که ما آن را PCR KI-PEP نامیدیم، تعیین طرح واره با تنها 5/2 پیکوگرم از DNA اولیه صورت گرفت و هم چنین با استفاده از پرایمر های اختصاصی، قطعه ای به طول 1106 باز به راحتی تکثیر شد. به کار گیری این روش در نمونه های استخوان های کهنه، افزایش تعداد اندک نسخه های DNA و بررسی وجود مهار کننده در نمونه های استخوان را امکان پذیر ساخت ولی در تعیین طرح واره بهبود خاصی مشاهده نشد.

نتیجه گیری: روش KI-PEP نه تنها توانایی تکثیر مقادیر کم DNA را دارد، بلکه با توجه به طول STR های موجود در کیت های مرسوم تعیین هویت، طول مناسب برای تعیین طرح واره را نیز ایجاد می کند. اما در بهبود تعیین طرح واره ی نمونه هایی شامل تخریب و خرد شدگی فراوان مانند نمونه های حاصل از استخوان های کهنه، علی رغم افزایش تعداد اندک نسخه های DNA و کاهش نسبی مهار کننده ها، ناتوان است.

کلید واژه ها: تعیین طرح واره ی DNA، WGA، I-PEP PCR، استخوان های کهنه

دسته: زیست شناسی, علوم تجربی برچسب: I-PEP PCR, WGA, استخوان های کهنه, کلید واژه ها: تعیین طرح واره ی DNA

توضیحات

فهرست مطالب

عنوان صفحه

پیشگفتار 1

فصل اول: کلیات 1

1-1-تعیین طرح واره ی DNA 4

1-1-1-ساختار DNA و ژنوم انسان 5

1-1-2-انواع توالی های موجود در ژنوم 6

1-1-2-1-ریزماهواره ها 7

1-1-3- مارکر های ژنتیکی 8

1-1-4- نام گذاری مارکرهای ژنتیکی STR 9

1-1-5- مکانيسم هاي ایجاد چندشکلی در مارکرهای ژنتیکی 9

1-1-6- کاربرد مارکرهای ژنتیکی STR در تعیین طرح واره ی DNA 10

1-1-6-1-مفهوم تعیین طرح واره ی DNA 10

1-1-6-2- تاریخچه ی کاربرد مارکرهای ژنتیکی در تعیین طرح واره 10

1-1-6-3- روش کنونی تعیین طرح واره ی DNA 13

1-1-6-3-1-تکنیک Real-time PCR 15

1-1-6-3-2- تکثیر مارکرهای STR 17

1-1-6-3-3- کیت Identifler 18

1-1-6-3-4- الکتروفورز لوله ی موئین 20

1-1-6-3-5- آنالیز داده های خروجی 21

1-2- تعیین طرح واره از نمونه های استخوان های کهنه 23

1-2-1- ساختار و انواع بافت استخوان 24

1-2-2-مشکلات تعیین طرح واره از نمونه های استخوانی کهنه 26

1-2-2-1- وجود تعداد اندک نسخه های DNA 26

1-2-2-2- تخریب و خرد شد گی DNA 27

1-2-2-3- مهارکننده ها 30

1-2-3-راه حل های موجود برای تعیین طرح واره ی aDNA 32

1-2-3-1- غلبه بر خرد شدگی DNA 32

1-2-3-1-1-کیت Minifiler 33

1-2-3-1-2-ترمیم DNA آسیب دیده 34

1-2-3-2- کاهش اثر مهار کننده ها و آلودگی ها 34

1-2-3-3-افزایش تعداد اندک نسخه های DNA 36

1-3- روش های تکثیر کل ژنوم (WGA) 38

1-3-1-PEP PCR 38

1-3-2- مزایای روش PEP PCR 39

1-3-3- بهینه سازی روش PEP PCR 40

1-4- اهداف و ضرورت های انجام تحقیق 41

1-4-1-اهداف 43

1-4-2- کاربردها 43

1-4-3- اهمیت ها و ضرورت ها 44

فصل دوم: مواد و روش ها 47

2-1- مواد و تجهیزات 48

2-1-1-مواد شیمیایی عمومی 48

2-1-2-مواد شیمیایی اختصاصی 49

2-1-3-کیت ها 49

2-1-4-لوازم و دستگاه های مورد نیاز 50

2-1-5-نرم افزارها 51

2-2-روش ها 52

2-2-1-جمع آوری نمونه ها 52

2-2-2-استخراج DNA از نمونه های خون 52

2-2-2-استخراج DNA از استخوان های کهنه 54

2-2-3- استخراج DNA از لکه ی خشک شده ی خون 58

2-2-4-تعیین کیفیت و کمیت نمونه های DNA 59

2-2-4-1- الکتروفورز بر روی ژل آگاروز 59

2-2-4-2- استفاده از طول موج های جذبی 61

2-2-4-3- Real-time PCR 62

2-2-5- تکثیر کل ژنوم با استفاده از روش PEP PCR 64

2-2-6- تکثیر اختصاصی با انجام واکنشPCR 66

2-2-7- تکثیر کل ژنوم با استفاده از روش KI-PEP PCR 69

2-2-8- تعیین طرح واره ی DNA با استفاده از کیت Identifiler 71

2-2-8-1- تکثیر STR ها ی کیت Identifiler با انجام واکنش PCR 71

2-2-8-2-آماده سازی محصول PCR برای ورود به دستگاه الکتروفورز 73

2-2-8-3-انجام الکتروفورز لوله ی موئین و آنالیز داده های خروجی 74

2-2-9- تکثیر DNA استخوان با استفاده از روش KI-PEP PCR 76

2-2-10- تعیین طرح واره ی DNA استخوان 77

2-2-10-1- تعیین طرح واره ی DNA با استفاده از کیت Minifiler 77

فصل سوم: یافته ها 79

3-1- مقدمه 80

3-2-به کار گیری روش تکثیر کل ژنوم در تکثیر تعداد اندک نسخه های DNA 81

3-2-1- بررسی کمی و کیفی DNA با استفاده از الکتروفورز بر روی ژل آگاروز 82

3-2-2- بررسی کمی و کیفی DNA با استفاده از طول موج های جذبی 83

3-2-3- یافته های حاصل از تکثیر کل ژنوم 84

3-3- مقایسه ی روش تکثیر کل ژنوم با روش افزایش تعداد چرخه های PCR 85

3-4- دستیابی به روش بهینهی PCR KI-PEP 85

3-5- ارزیابی کارایی روش KI-PEP PCR در تکثیر اختصاصی قطعات با طول های متفاوت 90

3-6- ارزیابی حساسیت روش KI-PEP PCR در تعیین طرح واره 93

3-7- بررسی نمونه های aDNA 94

3-7-1- ارزیابی کمی وکیفی با استفاده از طول موج های جذبی 94

3-7-2-ارزیابی کمی و کیفی با استفاده از Real-time PCR 97

3-7-3- به کارگیری روش KI-PEP در نمونه های aDNA 100

3-7-4-یافته های حاصل از تعیین طرح واره نمونه های aDNA 106

فصل چهارم: بحث 109

4-1-ابداع روش PCR KI-PEP 110

4-2- بررسی کارایی روش KI-PEP PCR 112

4-3- بررسی روش KI-PEP در تعیین طرح واره ی aDNA و ارزیابی نمونه های aDNA 115

4-4-معایب و محدودیت ها 123

4-5- ارزیابی کلی پژوهش 124

4-6-پیشنهادها 125

فهرست منابع 127

امتیاز 0 از 5 از 0 دیدگاه

قیمت اصلی 45,000 تومان بود.قیمت فعلی 21,000 تومان است.

تاریخ ایجاد آذر 9, 1399
تاریخ بروزرسانی اسفند 13, 1401
فروش 0
دیدگاه 0

شرایط استفاده از محصول

تمام محصولات به ازای پرداخت پروژه تنها قابل استفاده می باشند. این بدین معنی است که برای استفاده از یک یا چند محصول ، لازم به خرید آن محصول است.

مزایای خرید این محصول:

دسترسی به فایل به صورت همیشگی
پشتیبانی رایگان
پشتیبانی 24 ساعته محصول
بازگشت وجه در صورت عدم رضایت مشتری

مشاهده قوانین سایت