تأثیر پروژسترون بر میزان وقوع آپوپتوز در بلاستوسیست حاصل از تحریک تخمک گذاری موش

            فهرست مطالب

فصل اول: مقدمه و مروری بر مطالعات گذشته ………………………………………………………………………. 1

• مقدمه ………………………………………………………………………………………………………………………………………… 2

• ساختمان و بیوسنتز پروژسترون …………………………………………………………………………………. 3

• گیرنده های پروژسترون ……………………………………………………………………………………………… 4

• 3- 1. گیرنده های پروژسترون در آندومتر ………………………………………………………………………… 4

• 3- 2. بیان رسپتور پروژسترون روی جنین ……………………………………………………………………… 4

• نقشهای پروژسترون …………………………………………………………………………………………………….. 5

• 4- 1. نقشهای پروژسترون در سیستم تولید مثل …………………………………………………………….. 5

• 4- 2. نقشهای پروژسترون در سیستم عصبی …………………………………………………………………… 6

• 4- 3. نقشهای پروژسترون در سایر سیستمها …………………………………………………………………. 6

• 4- 4. نقش پروژسترون در لانه گزینی جنین ………………………………………………………………….. 7

• 4- 5. پیشینة مطالعات انجام شده در مورد تأثیر پروژسترون بر تکوین جنین  ………………………..  8

• تحریک تخمک گذاری ………………………………………………………………………………………………. 10

• 5- 1. PMSG ……………………………………………………………………………………………………………….. 12

• 5- 2. hCG ………………………………………………………………………………………………………………….. 12

• 5- 3. پیشینة مطالعاتی درمورد تأثیر تحریک تخمک گذاری بر تکوین جنین ……………………… 13

• مرگ آپوپتوزی در مرحلة قبل از لانه گزینی ……………………………………………………………………14

• 6-1. القای آپوپتوز …………………………………………………………………………………………………………….17

• 6- 2. کاسپازها ………………………………………………………………………………………………………………….18

• 6- 3. پروتئینهای BCL-2 …………………………………………………………………………………………………19

• 6- 4. گیرنده های مرگ ( Death Receptors) ……………………………………………………………20

• 6- 5. پیشینة مطالعات انجام شده در مورد وقوع آپوپتوز در مرحلة قبل از لانه گزینی …………20

• ضرورت انجام تحقیق حاضر……………………………………………………………………………………………………….23

• اهداف تحقیق حاضر……………………………………………………………………………………………………….23

     1- 9. سوالات تحقیق حاضر ………………………………………………………………………………………………………………. 23

• فرضیه ها و پیش فرض های تحقیق حاضر ………………………………………………………………… 24

فصل دوم: مواد و روشها …………………………………………………………………………………………….. 25

• گروههای مورد مطالعه ………………………………………………………………………………………………. 26

2- 2.  تحریک تخمدان و تهیة موش حامله  ………………………………………………………………………….  27

     2- 3. خونگیری از موش ……………………………………………………………………………………………………….  27

2- 4.  محیط کشت  …………………………………………………………………………………………………………….  28

2- 5.  قطره گذاری  ……………………………………………………………………………………………………………   28

     2- 6.  برداشت جنین و فلاش کردن شاخهای رحمی  …………………………………………………………..   28

     2- 7.  رنگ آمیزی تانل ( TUNEL assay )  ……………………………………………………………………….  29

     2-7- 1. مواد و روشها  …………………………………………………………………………………………………………. 30

     2-7-2. روش انجام کار  ……………………………………………………………………………………………………….  30

     2- 8. Real Time RT-PCR ………………………………………………………………………………………………  31

     2- 8- 1.  RNA Extraction ( استخراج RNA )  ……………………………………………………………….  33

     2- 8-1-1.   Homogenization  ( همسان سازی ) …………………………………………………………  34

     2-8-1-2. RNA Extraction  …………………………………………………………………………………………… 34

     2-8-1-3. RNA Precipitation  (رسوب گذاری RNA ) ………………………………………………………… 35

     2-8-1-4. خواندن RNA استخراج شده ……………………………………………………………………………….  35

     2-8-2. DNase treatment ( تیمار RNA با آنزیم DNase -1 ) …………………………………….  36

     2-8-3. cDNA  Synthesis ( ساخت cDNA ) …………………………………………………………………  36

     2-8-4. PCR واکنش زنجیرة پلیمراز …………………………………………………………………………………….  37

     2-9.   آنالیز آماری  ……………………………………………………………………………………………………………….  40

 فصل سوم : نتایج  ………………………………………………………………………………………………………………………………..  41

• 1 اندازه گیری سطح سرمی پروژسترون …………………………………………………………………………………… 43

3- 2 رنگ آمیزی تانل  ……………………………………………………………………………………………………………………..  43

     3-2- 1 گروه کنترل  …………………………………………………………………………………………………………………………  44

     3-2- 2 گروه تحت تیمار پروژسترون  ………………………………………………………………………………………………  44

     3-2- 3 گروه تحریک تخمک گذاری شده  ………………………………………………………………………………………  44

     3-2- 4 گروه تحریک تخمک گذاری شده و تحت تیمار پروژسترون  …………………………………………….  44

     3- 3 نتایج مطالعات مولکولی  …………………………………………………………………………………………………………..  45

     3-3- 1 میانگین میزان بیان ژنها در گروههای مورد مطالعه ……………………………………………………………  45

     3-3-1- 1 بیان ژن  Bax …………………………………………………………………………………………………………………  45

     3-3-1-2 بیان ژن   Bcl-2……………………………………………………………………………………………………………….. 45

     3-3-1-3 بیان ژن  P53 ………………………………………………………………………………………………………………….  46

     3-3-1-4 بیان ژن  Fas …………………………………………………………………………………………………………………..  46

     3-3-1-5  بیان ژن Fas ligand  …………………………………………………………………………………………………..  46

     3-3-1-6  بیان ژن PGR-A  …………………………………………………………………………………………………………..  47

     3-3-1-7 بیان ژن PGR-B  …………………………………………………………………………………………………………….  47

     3-3- 2 مقایسة میزان بیان ژنها در گروههای مختلف  ……………………………………………………………………  47

     3-3-2-1 ژن   Bax…………………………………………………………………………………………………………………………..  48

     3-3-2-2 ژن Bcl-2  ……………………………………………………………………………………………………………………….  48

     3-3-2-3 بیان ژن  P53 ………………………………………………………………………………………………………………….  48

     3-3-2-4 ژن Fas  ……………………………………………………………………………………………………………………………  49

     3-3-2-5 ژن Fas ligand ………………………………………………………………………………………………………………  49

     3-3-2-6 ژن PGR-A  …………………………………………………………………………………………………………………….  49

     3-3-2-7 ژن PGR-B ………………………………………………………………………………………………………………………  49

فصل چهارم: بحث، نتيجه‌گيري و پيشنهادها ……………………………………………………………………  59

    4- 1 بررسی سطح هورمونها ……………………………………………………………………………………………………………….. 60

    4-2 میزان وقوع آپوپتوز در گروهها …………………………………………………………………………………………………….  60

    4-3 بررسی بیان ژنهای پروآپوپتوتیک و آنتی آپوپتوتیک  …………………………………………………………………. 62

   4-3-1 ژن Bax  ………………………………………………………………………………………………………………………………….  63

   4-3-2 ژن Bcl-2 ………………………………………………………………………………………………………………………………….. 63

   4-3-3 ژن P53 …………………………………………………………………………………………………………………………………….. 64

   4-3-4 ژن Fas  …………………………………………………………………………………………………………………………………….. 65

   4-3-5 ژن ligand  Fas ……………………………………………………………………………………………………………………..  65

   4-3-6 ژن PGR-A و PGR-B  ……………………………………………………………………………………………………………  65

  4 -4 نتیجه گیری  ……………………………………………………………………………………………………………………………….   67

   4-5  پیشنهادها ………………………………………………………………………………………………………………………………………  67

  فهرست منابع …………………………………………………………………………………………………………………………………………   68

  چکیده انگلیسی ………………………………………………………………………………………………………………………………………  81

فهرست جداول

جدول 1-1 سه گروه شناخته شدة کاسپازها  …………………………………………………………………………………………    51

جدول 3-1 سطح سرمی پروژسترون در گروههای مورد مطالعه ……………………………………………………………    52

جدول 3-2 شاخص آپوپتوتیک در گروههای مورد مطالعه  …………………………………………………………………….   53

جدول 3-3 میانگین بیان ژنها در مقایسه با ژن رفرنسactin  β  …………………………………………………………   54

فهرست شكل‌ها

شکل 3-1. بلاستوسیست رنگ آمیزی شده به روش تانل در گروه کنترل …………………………………….   55

شکل 3-2. بلاستوسیست رنگ آمیزی شده به روش تانل در گروه تحت تیمار پروژسترون …………..   56

شکل 3-3. بلاستوسیست رنگ آمیزی شده به روش تانل در گروه تحریک تخمک گذاری ……………   57

شکل 3-4.  بلاستوسیست رنگ آمیزی شده به روش تانل در گروه تحریک تخمک گذاری شدة تحت تیمار پروژسترون ………………………………………………………………………………………………………………………  58