%31تخفیف

بررسی مولکولار و فنوتیپی (الگوی پلاسمیدی ) جدایه­های پروتئوس مقاوم به بتالاکتام جدا شده از عفونت­های مجاری ادراری درایلام

تعداد 73صفحه در فایل word

کارشناسی ارشد دررشته زیست شناسی( میکروبیولوژی)

بررسی مولکولار و فنوتیپی (الگوی پلاسمیدی ) جدایه­های پروتئوس مقاوم به بتالاکتام جدا شده از عفونت­های مجاری ادراری درایلام

چکیده

  مقدمه: پروتئوس یک پاتوژن فرصت طلب و یکی از علل اصلی عفونت ادراری در بیماران بستری شده  به دلیل استفاده از سوند و…می باشد.این باکتری به طور گسترده در خاک، آب، فاضلاب، مدفوع  وجود داشته و از طریق آلودگی­های بیمارستانی، تماس با سطوح آلوده و… منتقل می شود.

   اهداف: دراین بررسی الگوی فنوتیپی و مولکولی (انتقال پلاسمید)  مقاومت به آنتی بیوتیک های بتالاکتام و وجود ژن های TEM  bla و blaCTX-M در پروتئوس های جدا­ شده از UTI مورد بررسی قرار گرفت .

   موادوروش­ها: دراین بررسی 150نمونه از بیمارستان­ها و آزمایشگاه­های استان جمع آوری و  توسط آزمایش­های بیوشیمیایی ومیکروبیولوژی موردشناسایی قرار گرفتند. سپس نمونه­های پروتئوس جدا شده تحت آنتی بیوگرام ، ترانسفورماسیون و بررسی ژن­های  blaCTX-M و  TEM  bla قرار گرفتند.

   نتایج:  تعداد پروتئوس جدا شده شامل 18 مورد(12%) بوده واز این تعداد 9 مورد حاوی پلاسمید انتقال مقاومت بودندکه پس از ترانسفورماسیون مقاومت به آنتی بیوتیک­های آموکسی سیلین، آمپی سیلین، سفالوتین، نئومایسین، استرپتومایسین، کانامایسین، جنتامایسین، توبرامایسین، آمیکاسین توسط پلاسمید منتقل شد. نتایج بررسی مولکولی نشان داد که تعداد 11جدایه حاوی ژن­ TEM  blaو تعداد11جدایه حاوی ژن blaCTX-M بودند. این بررسی نشان داد که مقاومت به آنتی بیوتیک­های مختلف هم از طریق پلاسمید وهم از طریق سایر عوامل خارج کروموزومی و داخل کروموزومی صورت می گیرد.

  واژگان کلیدی: پروتئوس، بیماران عفونت ادراری وکلیوی، مقاومت آنتی بیوتیکی، ژن مقاوم به بتالاکتاماز

فهرست مطالب

 

عنوان

صفحه

1-1- مقدمه

2

1-2- اهمیت و ضرورت تحقیق

2

1-3- اهداف تحقیق

3

1-3-1- هدف کلی

3

1-3-2- اهداف جزیی

3

1-4- عفونت ادراری چیست؟

3

1-5- انتروباکتریاسه

5

1-5-1- روش‌هاي تشخيصي براي ايجاد افتراق بين باكتري‌هاي خانواده انتروباكترياسه

8

1-5-1-1- تخمير لاكتوز

8

1-5-1-2- محيط تريپل شوگر- آيرون آگار

8

1-5-1-3- آزمايش IMVIC

10

1-5-1-4- توليد اندول

10

1-5-1-5- متيل رد (MR)

10

1-5-1-6- آزمايش وژزپروسكوئر

11

1-5-1-7- آزمايش مصرف سيترات

11

1-5-1-8- آزمايش مصرف استات

12

1-5-1-9- آزمايش اوره آز

12

1-6- پروتئوس

13

1-6-1- طبقه بندی وتکامل نژادی

13

1-6-2- جایگاه

14

1-6-3- جداسازی وشناسایی

14

1-6-4- فیزیولوژی

15

1-6-5- اکولوژی

16

1-6-6- اپیدمیولوژی

16

1-6-7- بیماریزایی

16

1-6-8- فاکتورهای بیماریزایی

16

1-6-8-1 اوره آز

17

1-6-8- 2 لیپوپلی ساکاریدخارج غشایی

17

1-6-8- 3 همولیزین

17

1-6-8- 4 فیمبریه

17

1-7 آنتی بیوتیک

18

1-7-1- ویژگی‌های آنتی بیوتیک

19

1-7-2- مقاومت آنتی بیوتیکی

19

1-7-3- مکانیسم­های ایجاد مقاومت

19

1-7-3- 1غیر فعال سازی داروها یا تعدیل کردن آنها

20

1-7-3-2 تغییر در جایگاه های هدف

20

1-7-3-3 تغییر در مسیر های متابولیکی

20

1-7-3-4 کاهش انباشتگی دارو

20

1-7-4- اساس مقاومت نسبت به آنتی بیوتیک ها

20

1-7-5- مقاومت ذاتی و اکتسابی

21

1-7-6-  انواع مقاومت های ژنتیکی در برابرآنتی بیوتیک ها

21

1-7-6-1- مقاومت کروموزومی

21

1-7-6-2- مقاومت پلاسمیدی

22

1-7-6-3- مقاومت ترانسپوزونی

22

1-8-1- فاکتورهای مؤثر در گسترش و انتشار مقاومت های آنتی بیوتیکی

22

1-8-2- انتقال ژن های مقاومت از یک باکتری به باکتری دیگر

23

1-8-2-1- کونژوگاسیون

23

1-8-2-2- ترانسداکشن

24

1-8-2-3- ترانسفورماسیون

25

1-8-2- 4 جهش در ژن های مقاومت

25

1-8-2- 5 افزایش فشار محیطی

25

فصل دوم: مروری برمطالعات انجام شده

27

2-1- مطالعات در خارج از کشور

27

2-2- مطالعات در ایران

29

فصل سوم: مواد وروش­ها

31

3-1مواد و وسایل مورد نیاز

32

3-1-1دستگاه­ها

32

3-1-2مواد مصرفی

33

3-1-3-مواد شیمیایی

34

3-1-4-محیط های باکتریولوژیک

35

3-1-5-آنتی بیوتیک ها

35

3-1-6-مارکرها

36

3-1-7-سویه های استاندارد

36

3-2- نمونه گیری وکشت ونگهداری

36

3-3-آزمایشات بیوشیمیایی

37

3-4- نگهداری و فریز کردن نمونه ها

40

3-5- تست دیسک دیفیوژن به منظورتعیین حساسیت به آنتی بیوتیک های منتخب

40

3-6-تست  MIC

41

3-6-1 MIC متد رقت در آگار(ADM)

41

3-7-استخراج پلاسمید با استفاده از کیت

43

3-8-نحوه استفاده ازکیت

43

3-9-روش انجام الکتروفورز

44

3-10-تهیه سلول های مستعد E.coli به روش کلرید کلسیم

44

3-11-ترانسفورماسیون

45

3-11-1روش انجام ترانسفورماسیون

46

3-12-استخراج DNA

47

3-13- PCR(واکنش زنجیره ای پلیمراز)

47

فصل چهارم: نتایج، بحث، پیشنهادات

49

4-1  نتایج نمونه گیری

50

4-2 نتایج تعداد نمونه های باکتریایی جداشده ازبیماران برحسب جنس

51

4-3 میزان سویه­های پروتئوس جداشده از بیماران برحسب جنس

52

4-4 میزان باکتری­های جداشده برحسب سن بیماران

53

4-5 نتایج آنتی بیوگرام به روش دیسک دیفیوژن

54

4-6 نتایج MIC

55

4-7 نتایج استخراج پلاسمید

58

4-8  نتایج ترانسفورماسیون

58

4-9 نتایج آنتی بیوگرام پس از انتقال پلاسمید

59

4-10 نتایج بررسی وجود ژن blaTEM  در سویه های پروتئوس

59

4-11 نتایج بررسی وجود ژن blaCTX-M  در سویه های پروتئوس

60

4-12 بحث

61

4-13 پیشنهادات

65

منابع

66

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

فهرست جداول

عنوان

صفحه

 جدول1-1 تست­های بیوشیمیایی گونه­های جنس پروتئوس

18

جدول3-1  طرز تهیه نیم مک فارلند

40

جدول 3-2  استاندارد آنتی بیوگرام  به روش دیسک دیفیوژن

41

جدول 3-3MIC  آنتی بیوتیک ها

42

جدول3-4 پرایمرها

48

جدول3-5  مواد موردنیاز برای آزمایش PCR

48

جدول 3-6  برنامه PCR

48

جدول4-1  توزیع فراوانی سویه­های باکتریایی جداشده از مراکز بیمارستانی

50

جدول4-2 توزیع نمونه ها برحسب جنس

51

جدول4-3 جنسیت نمونه­های مبتلا به پروتئوس

52

جدول 4-4 طیف سنی نمونه ها باوجود پروتئوس در ادرار

53

جدول 4-5 بررسی میزان گونه­های پروتئوس از بیماران تحت بررسی

54

جدول4-6 بررسی الگوی مقاومت دارویی پروتئوس به روش دیسک گذاری

54

جدول 4-7  نتایج آنتی بیوگرام ودیسک گذاری باکتری­های جداشده از عفونت ادراری برحسب درصد

55

جدول 4-8  نتایج MIC

56

جدول4-9  نتایج MIC برحسب درصد

57

فهرست تصاویر ونمودارها

عنوان

صفحه

تصویر1-1-شکل باکتری پروتئوس

14

تصویر1-2- چگونگی حرکت سوارمینگ پروتئوس

15

تصویر3-1 تست­های بیوشیمیایی

39

تصویر3-2 آنتی بیوگرام به روش دیسک گذاری

42

تصویر3-3  MIC به روش ADM

43

تصویر4-6 الکتروفورز پلاسمید استخراج شده

58

تصویر 4-2  :A مشاهده کلنی اشریشیاکلای حاوی پلاسمید بر روی محیط لوریا برتانی آگار حاوی آمپی سیلین

59

تصویر4-3  نتایج PCR

60

تصویر4-4 نتایج   PCR

60

نمودار4-1  میزان فراوانی باکتری­های جدا شده از عفونت ادراری

51

نمودار 4-2 توزیع نمونه ها برحسب جنس

52

نمودار 4-3 جنسیت نمونه­های مبتلا به پروتئوس

52

نمودار 4-4 درصد رنج سنی نمونه­های پروتئوس مثبت

53

1 دیدگاه برای بررسی مولکولار و فنوتیپی (الگوی پلاسمیدی ) جدایه­های پروتئوس مقاوم به بتالاکتام جدا شده از عفونت­های مجاری ادراری درایلام

  1. avirodin disponible en Méxicor

    How goes it, neat site you possess going here. ordina clavamel in Italia

دیدگاه خود را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *

قبلا حساب کاربری ایجاد کرده اید؟
گذرواژه خود را فراموش کرده اید؟
Loading...
enemad-logo