بررسی اثر هورمون هيدروکورتيزون بر آسيب های کلاستوژنيک کروموزومی القايی در رده سلولی L929 با استفاده از آزمون ميکرونوکلئوس در سلول های دو هسته ای

فهرست مطالب

عنوان                                                                                                                                             صفحه

چکیده 1

فصل اول: کلیات تحقیق. 2

1 مقدمه. 2

1-1استرس… 3

1-1-1پاسخ بدن به عوامل استرس زا 5

1-1-2هورمون های استرس… 7

1-2 گلوکوکورتیکوئیدها 8

1-2-1 انواع گلوکوکورتیکوئیدها 8

1-2-2 ویژگی های مهم گلوکوکورتیکوئیدها 9

1-2-3 گیرنده های گلوکوکورتیکوئیدی.. 9

1-2-4 عملکرد گلوکوکورتیکوئیدها 10

1-2-5 ریتم شبانه روزی ترشح کورتیزول. 10

1-3 هیدروکورتیزون. 11

1-4 سیتوکالازینB.. 12

1-5 روش های بررسی آسیب های کروموزومی.. 13

1-5-1تکنیکcomet 13

1-5-2 آزمونTUNEL.. 14

1-5-3 تکنیک دورگه سازی درجای فلئورسنت… 14

1-5-4 تکنیک دورگه سازی ژنومی مقایسه ای.. 14

1-5-5 تکنیک میکرونوکلئوس… 15

1-6 ارتباط استرس و سرطان. 18

1-7 ناهنجاری های کروموزومی و سرطان. 19

1-8 پرتوها 21

1-9 ارتباط پرتو یونیزان با ناپایداری کروموزومی.. 22

فصل دوم:‌ مروری بر تحقیقات انجام شده 25

فصل سوم: مواد و روش‌ها. 31

3-1مواد مورد استفاده 31

3-2وسایل مورد استفاده 32

3-3 اصول اولیه در کشت… 32

3-4 کشت سلول. 33

3-4-1 شرایط نگهداری سلول ها 33

3-4-2 ذوب کردن سلولهای فریزشده 33

3-4-3 محیط کشت مورد استفاده 33

3-4-4 تعویض محیط کشت… 33

3-4-5 پاساژ سلول ها 34

3-5 تهیه محلول های مورد نیاز. 34

3-5-1 هیدروکورتیزون. 34

3-5-2 سیتوکالازینB.. 34

3-5-3 آماده سازی فیکساتور. 35

3-5-4 تهیه اتانول70%. 35

3-5-5 آماده سازی لام ها 35

3-5-6 رنگ گیمسا و رنگ آمیزی سلول ها 35

3-5-7 مراحل انجام کار. 35

3-6 برداشت سلول ها 36

3-7 شمارش سلول ها و بررسی صدمات کروموزومی با روش میکرونوکلئوس… 37

3-8 آنالیز آماری داده ها 37

فصل چهارم:‌ نتایج و بحث… 38

4-1 مشاهده میکرونوکلئوس های ایجاد شده با میکروسکوپ.. 38

4-2 نتایج حاصل از محاسبه میانگین درصد میکرونوکلئوس و شاخص تقسیم درگروه های کنترل وتیمار. 39

4-3 نتایج حاصل از مقایسه درصد میکرونوکلئوس وشاخص تقسیم غلظت های مختلف هیدر وکورتیزون با کنترل. 40

4-4 نتایج حاصل ازمقایسه درصد میکرونوکلئوس وشاخص تقسیم گروه های اشعه و کنترل با غلظت ‌های مختلف هیدروکورتیزون-اشعه  41

4-5 نتایج حاصل از مقایسه گروه کنترل و اشعه با غلظتµg/ml 100 هیدروکورتیزون وغلظت µg/ml 100هیدروکورتیزون همراه با اشعه  42

فصل پنجم:‌ نتیجه‌گیری. 44

5-1 بحث… 44

5-2 تفسیر. 46

5-3 نتیجه گیری.. 53

5-4 پیشنهادات.. 54

منابع. 55

پیوست‌ها… 67

فهرست شکل ها

عنوان شکل                                                                                           صفحه

شکل‏1‑1ارتباط متقابل سیستم های ایمنی، عصبی واندوکرین………………………………………………………………….. 6

شکل‏1‑2شکل شماتیکی از محورآدرنال-هپییوفیز-هیپوتالاموس(HPA)……………………………………………………… 8

شکل‏1‑3 نمونه ای از ریتم شبانه روزی سطوح کورتیزول در سرم…………………………………………………………… 11

شکل‏1‑4 ساختار هیدروکورتیزون………………………………………………………………………………………………. 12

شکل‏1‑5 ساختارسیتوکالازینB………………………………………………………………………………………………….. 12

شکل‏1‑6(a)دو میکرونوکلئوس که منشاء یکی قطعه کروموزومی بدون سانترومر و دیگری کروموزوم کاملی است که در آنافاز جامانده است. (b) تشکیل پل بین هسته ای از یک کروموزوم دو سانترومری و میکرونوکلئوسی که ا ز یک قطعه کروموزومی بدون سانترومرایجاد شده است.    16

شکل‏1‑7 سلول های دوهسته ای دارای ساختارهایی مشابه میکرونوکلئوس………………………………………………… 18

شکل‏1‑8 اختلالات کروموزومی ناشی از تابش اشعه………………………………………………………………………….. 24

شکل‏4‑1سلول هایL929 پس از تیمار با اشعه و سیتوکالازینB  ورنگ آمیزی گیمسا……………………………………. 38

شکل‏4‑2 مقایسه درصد میکرونوکلئوس و شاخص تقسیم بین سه دوز مختلف هیدروکورتیزون و کنترل……………….. 40

شکل‏4‑ 3 مقایسه درصد میکرونوکلئوس ایجاد شده و شاخص تقسیم در سه غلظت مختلف هیدروکورتیزون- اشعه با گروه کنترل و اشعه.    42

شکل‏4‑4 مقایسه درصد میکرونوکلئوس ایجاد شده و شاخص تقسیم در گروه های کنترل، تیمار هیدروکورتیزون، تیمار اشعه و تیمار هیدروکورتیزون-اشعه…………………………………………………………………………………………………………… 43

فهرست جدول ها

عنوان جدول                                                                                                                    صفحه

جدول 1: تعداد سلول های شمارش شده در گروه کنترل……………………………………………………………………………..67

 جدول2: تعداد سلول های شمارش شده در گروه تیمار هیدروکورتیزون با غلظتµg/ml25…………………………..67

جدول3: تعداد سلول های شمارش شده در گروه تیمار هیدروکورتیزون با غلظت µg/ml50…………………………..68

جدول4: تعداد سلول های شمارش شده در گروه تیمار هیدروکورتیزون با غلظت µg/ml100…………………………68

جدول5: تعداد سلول های شمارش شده در گروه کنترل……………………………………………………………………………….69

جدول6: تعداد سلول های شمارش شده در گروه تیمار اشعه………………………………………………………………………..69

جدول7: تعداد سلول های شمارش شده در گروه µg/ml25 هیدروکورتیزون –اشعه………………………………………70

جدول8: تعداد سلول های شمارش شده در گروه µg/ml50هیدروکورتیزون –اشعه……………………………………….70

جدول9: تعداد سلول های شمارش شده در گروه µg/ml100هیدروکورتیزون –اشعه……………………………………..71

جدول10: نتایج تحلیل آماری حاصل از مقایسه درصد میکرونوکلئوس بین غلظت های مختلف هیدروکورتیزون با کنترل…………………………………………………………………………………………………………………………………………………….71

جدول11: نتایج تحلیل آماری حاصل از درصد شاخص تقسیم بین گروه های تیمار شده با هیدروکرتیزون و کنترل……………………………………………………………………………………………………………………………………………………73

جدول12: نتایج تحلیل آماری حاصل از مقایسه درصد میکرونوکلئوس بین غلظت های مختلف هیدروکورتیزون-اشعه با گروه های کنترل و اشعه………………………………………………………………………………………………………………..75

جدول13: نتایج تحلیل آماری حاصل از مقایسه درصد شاخص تقسیم بین غلظت های مختلف هیدروکورتیزون-اشعه با گروه های کنترل و اشعه………………………………………………………………………………………………………………..77

جدول 14: نتایج حاصل از مقایسه درصد میکرونوکلئوس گروه کنترل و اشعه با غلظت µg/ml 100 هیدروکورتیزون و غلظت  µg/ml 100هیدروکورتیزون همراه با اشعه…………………………………………………………..79

جدول15: نتایج حاصل از مقایسه درصد شاخص تقسیم گروه کنترل و اشعه با غلظت µg/ml 100 هیدروکورتیزون و غلظت  µg/ml 100هیدروکورتیزون همراه با اشعه………………………………………………………………………………….81