بررسی اثر فرمولاسیون نانو ذرات نقره، عصاره و اسانس گياه آويشن شيرازي در مهار برخی باكتری­هاي بیماریزای پوست شامل استافيلوكوكوس اورئوس مقاوم و حساس به متي­سيلين، استافيلوكوكوس اپيدرميديس، استرپتوکوکوس پیوژنز و سودوموناس آئروژينوزا

عنوان                                                    فهرست مطالب                                                         صفحه

خلاصه. 1

مقدمه. 2

فصل اول: کلیات

1-1- اهمیت موضوع وبیان مسئله. 6

1-2- اهداف.. 10

فصل دوم: مروری بر متون گذشته

2-1- کلیات گیاه شناسی.. 12

2-1-1- گیاهان دارویی.. 12

2-1-2-علت انتخاب علت انتخاب آویشن شیرازی جهت انجام تحقیق.. 13

2-1-3-تاریخچه گیاه آویشن شیرازی.. 14

2-1-4- مشخصات گیاه آویشن شیرازی (Zataria multiflora) 14

2-1-5- جایگاه آویشن شیرازی در عالم گیاهی.. 16

2-1-6- مشخصات جنس و گونهی گیاه. 17

2-1-7- محل رویش گیاه. 17

2-1-8- گیاهانی با اسامی و خصوصیات مشابه Zataria multiflora: 18

2-1-9- قسمت مورد استفاده گیاه آویشن شیرازی.. 18

2-1-10- ترکیب شیمیایی گیاه. 18

2-1-10-1- تیمول.. 20

2-1-10-2-کارواکرول (Carvacrol) 22

2-1-11- اثرات ضد میکروبی گیاه آویشن شیرازی.. 24

2-1-12- اثرات گیاه آویشن شیرازی بر سیستم ایمنی.. 26

2-1-13- اثرات ضد دردی گیاه آویشن شیرازی.. 26

2-1-14-اثرات گیاه آویشن شیرازی بر ناراحتیهای گوارشی.. 28

2-1-15- اثرات گیاه آویشن شیرازی بر دستگاه تنفسی.. 28

2-1-16- اثرات گیاه آویشن شیرازی بر سیستم قلبی- عروقی و عصبی.. 29

2-1-17- اثرات گیاه آویشن شیرازی بر دستگاه ادراری- تناسلی.. 29

2-1-18- اثرات گیاه آویشن شیرازی بر پوست و موارد استعمال خارجی.. 29

2-1-19-سایر موارد کاربرد گیاه آویشن شیرازی در طب سنتی.. 30

2-1-20- گیاه آویشن شیرازی در صنایع آرایشی و بهداشتی.. 30

2-1- 21- گیاه آویشن شیرازی در صنایع غذایی.. 30

2-1-22- داروهای ساخته شده از گیاه آویشن شیرازی.. 31

2-1-23- عوارض جانبی احتمالی گیاه آویشن شیرازی.. 31

2-2-  آشنایی با نانو. 32

2-2-1- تعریف نانو. 32

2-2-2- نانوتکنولوژی.. 33

2-2-3- تاریخچه نانوتکنولوژی.. 35

2-2-4-فلز نقره. 37

2-2-4-1-خصوصیات فیزیکی و شیمیایی آن.. 37

2-2-5- سنتز نانو ذرات نقره. 39

2-2-6- تاریخچه استفاده از نقره به عنوان عامل ضد میکروبی.. 41

2-2-7- دلایل استفاده از نانو ذرات نقره به عنوان عامل ضد میکروبی در این تحقیق.. 42

2-2-8- اثرات زیستی یون نقره (Ag+)، کلرید نقره (AgCl) و نانو ذرات نقره (Ag°) 43

2-2-9- مکانیسم عمل ضد میکروبی نقره و نانو ذرات نقره. 44

2-2-9-1- جذب یونهای آزاد نقره. 45

2-2-9-2- ایجاد گونههای اکسیژن فعال.. 46

2-2-9-3- آسیب مستقیم به غشاء سلولی.. 47

2-2-10- اثرات نانو ذرات نقره بر باکتریها 48

2-2-11- اثرات ضد ویروسی نانو ذرات نقره. 49

2-2-12- اثرات ضد قارچی نانو ذرات نقره. 50

2-2-13- کاربرد نقره در صنایع با تکیه بر خاصیت ضد میکروبی آن.. 50

2-2-14- عوارض جانبی احتمالی نانو ذرات نقره. 51

2-2-15- کاربرد نقره و نانونقره در پزشکی.. 51

2-2-16- نانو ذرات نقره و گیاهان.. 51

2-3- کلیات میکروب شناسی.. 52

باکتریهای مورد بررسی در این تحقیق شامل: 52

2-3-1- علت استفاده از این باکتریها در این تحقیق.. 53

2-3-2- استافیلوکوکوس اورئوس مقاوم و حساس به متی سیلین و استافیلوکوکوس اپیدرمیدیس…. 54

2-3-2-1- شکل (Morphology) 54

2-3-2-2- ساختمان سلولی.. 54

2-3-2-3- خواص کشت (Culture properties) 55

2-3-2-4- خواص بیوشیمیایی (Biochemical properties) 56

2-3-2-5- مقاومت دارویی.. 56

2-3-2-6- بیماریزایی استافیلوکوکوس اورئوس… 57

2-3-2-7- بیماریزایی استافیلوکوکوس اورئوس مقاوم به متیسیلین (MRSA) 58

2-3-2-8- بیماریزایی استافیلوکوکوس اپیدرمیدیس…. 60

2-3-1-9- درمان.. 60

2-3-3- استرپتوکوکوس پیوژنز. 61

2-3-3-1- شکل (Morphology) 61

2-3-3-2- ساختمان سلولی.. 62

2-3-3-3- خواص کشت (Culture properties) 63

2-3-3-4- خواص بیوشیمیایی (Biochemical properties) 63

2-3-3-5- بیماریزایی استرپتوکوکوس پیوژنز. 63

2-3-3-6- درمان.. 64

2-3-4- سودوموناس آئروژینوزا 65

2-3-4-1- شکل (Morphology) 65

2-3-4-2- خواص کشت (Culture properties) 65

2-3-4-3- خواص بیوشیمیایی (Biochemical properties) 66

2-3-4-4- مقاومت… 66

2-3-4-5- بیماریزای سودوموناس آئروژینوزا 67

2-3-4-6- درمان.. 68

فصل سوم: مواد و روش­ها

3-1- روش های آماده سازی عصاره و اسانس گیاه. 69

3-1-1-  تهیه گیاه. 70

3-1-2- عصاره گیری.. 70

3-1-2-1- مواد و وسایل مورد نیاز. 70

3-1-2-2- روش انجام کار. 71

3-1-3- اسانس گیری.. 71

3-1-3-1- مواد و وسایل مورد نیاز. 72

3-1-3-2- روش انجام کار. 72

3-2- آزمونهای میکروبی.. 73

3-2-1- باکتریهای مورد مطالعه. 73

3-2-2- مواد و وسایل مورد نیاز. 74

3-2-3- استریل کردن مواد و وسایل.. 76

3-2-4- محیط های کشت… 76

3-2-4-1- محیط کشت مولر هینتون آگار. 76

3-2-4-2- محیط کشت مولر هینتون براث.. 77

3-2-5- سرم فیزیولوژی.. 78

3-2-6- روش تهیه استاندارد نیم مک فارلند. 78

3-2-6-1- مواد و وسایل مورد نیاز. 78

3-2-6-2- روش کار. 78

3-2-7- سوسپانسیون میکروبی.. 79

3-2-8- آماده سازی کشتهای میکروبی.. 79

3-2-9- آماده سازی عصاره متانولی با غلظتهای مختلف… 80

3-2-10- آماده سازی اسانس با غلظتهای مختلف… 80

3-2-11- مشخصات محلول کلوئیدی نانو ذرات نقره. 80

3-2-12- آماده سازی محلول نانو ذرات نقره با غلظتهای مختلف… 81

3-2-13- بررسی اثر ضد میکروبی عصاره و اسانس و نانو ذرات نقره به روش انتشار چاهک… 81

3-2-14- تهیه شاهد مثبت… 82

3-2-15- تهیه شاهد منفی.. 82

3-2-16- آماده سازی ترکیب نانو ذرات نقره و عصاره و اسانس آویشن شیرازی.. 82

3-2-17- بررسی حداقل غلظت مهار کنندگی رشد (MIC) به روش رقیق سازی در میکروپلیت… 83

3-2-18- بررسی حداقل غلظت کشنده باکتری (MBC) 85

فصل چهارم: نتایج

4-1- نتایج اثرات ضد باکتریایی عصاره، اسانس و نانو ذرات نقره. 90

4-2-نتایج اثرات ضد باکتریایی ترکیب عصاره و اسانس گیاه آویشن شیرازی و نانو ذرات نقره. 102

4-3- نتایج آزمون نتایج آزمون Check board microtiter 114

4-4- آنالیز آماری.. 115

فصل پنجم: بحث و پیشنهادات

5-1- بحث و نتیجه گیری.. 117

5-2- پیشنهادات.. 126

منابع.. 127

خلاصه انگلیسی.. 136

عنوان                                                    فهرست جداول                                                         صفحه

جدول 2-1- جنسهای مهم تیره نعناع………………………………………………………………………………… 16

جدول2-2- ترکیبات شیمیایی گیاه آویشن شیرازی………………………………………………………………. 23

جدول2-3- پیشوندهای استاندارد بین المللی……………………………………………………………………….. 32

جدول2-4- برخی از خصوصیات فیزیکی و شیمیایی فلز نقره…………………………………………………… 39

جدول 3-1- غلظت عصاره، اسانس و نانو ذرات نقره در چاهک های میکروپلیت…………………………….. 84

جدول4-1- نتایج  قطر هاله عدم رشد عصاره آویشن شیرازی بر روی 5 باکتری مورد آزمایش………….. 91

جدول4-2- نتایج قطر هاله عدم رشد اسانس آویشن شیرازی بر روی 5 باکتری مورد آزمایش………….. 92

جدول4-3- نتایج میانگین قطر هاله عدم رشد(میلیمتر) نانو ذرات نقره بر روی 5 باکتری مورد آزمایش.. 93

جدول4-4- نتایج MIC عصاره، اسانس و نانو ذرات نقره به تنهایی در 5 باکتری مورد آزمایش………….. 94

جدول4-5- نتایج MBC عصاره، اسانس و نانو ذرات نقره به تنهایی در 5 باکتری مورد آزمایش…………. 94

جدول 4-6- نتایج میانگین قطر هاله عدم رشد شاهد مثبت آنتی­بیوتیک Vancomycin 25(mg/ml) برای باکتریهای گرم مثبت…………………………………………………………………………………………………………………………. 95

جدول 4-7- نتایج میانگین قطر هاله عدم رشد شاهد مثبت آنتی­بیوتیکGentamycin 20 (mg/ml) برای باکتری گرم منفی………………………………………………………………………………………………………………………………… 95

جدول 4-8- نتایج میانگین قطر هاله عدم رشد (میلیمتر) ترکیب عصاره و نانو ذرات نقره در 5 باکتری 103

جدول4-9- نتایج میانگین قطر هاله عدم رشد(میلیمتر) ترکیب اسانس و نانو ذرات نقره در 5 باکتری…..104

جدول 4-10- فعالیت ضد باکتریایی نانو ذرات نقره در ترکیب با اسانس آویشن شیرازی……………….. 114

جدول 4-11- فعالیت ضد باکتریایی نانو ذرات نقره در ترکیب با عصاره آویشن شیرازی………………… 115

عنوان                                                 فهرست نمودار‌ها                                                         صفحه

نمودار 4-1- مقایسه قطر هاله عدم رشد در غلظتهای مختلف عصاره آویشن شیرازی بر روی 5 باکتری مورد آزمایش 96

نمودار 4-2- مقایسه قطر هاله عدم رشد در غلظتهای مختلف اسانس آویشن شیرازی بر روی 5 باکتری مورد آزمایش            97

نمودار 4-3-مقایسه قطر هاله عدم رشد نانو ذرات نقره بر روی 5 باکتری مورد آزمایش………………………….. 98

نمودار4-4-مقایسه کمترین غلظت نانوmin(n) کمترین غلظت عصاره گیاه  min(p)و ترکیب آنها(mix)…….. 105

نمودار4-5-مقایسه کمترین غلظت نانوmin(n) کمترین غلظت اسانس گیاه min(p)و ترکیب آنها(mix)…….. 105

نمودار4-6-مقایسه کمترین غلظت نانوmin(n) غلظت متوسط عصاره گیاهmed (p)و ترکیب آنهاmix))……… 106

نمودار4-7-مقایسه کمترین غلظت نانوmin(n)، غلظت متوسط اسانس گیاهmed (p)و ترکیب آنهاmix))……. 106

نمودار4-8-مقایسه کمترین غلظت نانوmin(n)،بیشترین غلظت عصاره گیاهmax(p)و ترکیب آنهاmix))…….. 107

نمودار4-9-مقایسه کمترین غلظت نانوmin(n)،بیشترین غلظت اسانس گیاهmax(p)و ترکیب آنهاmix))……. 107

نمودار4-10-مقایسه غلظت متوسط نانوmed(n)،کمترین غلظت عصاره گیاهmin(p)و ترکیب آنهاmix))…….. 108

نمودار4-11-مقایسه غلظت متوسط نانوmed(n) کمترین غلظت اسانس گیاهmin(p)و ترکیب آنهاmix))……. 108

نمودار4-12-مقایسه غلظت متوسط نانوmed(n) غلظت متوسط عصاره گیاهmed(p)و ترکیب آنهاmix))……. 109

نمودار4-13-مقایسه غلظت متوسط نانوmed(n) غلظت متوسط اسانس گیاهmed(p)و ترکیب آنهاmix))……. 109

نمودار4-14-مقایسه غلظت متوسط نانوmed(n) بیشترین غلظت عصاره گیاهmax(p)و ترکیب آنهاmix))…… 110

نمودار4-15-مقایسه غلظت متوسط نانوmed(n) بیشترین غلظت اسانس گیاهmax(p)و ترکیب آنهاmix))….. 110

نمودار4-16-مقایسه بیشترین غلظت نانوmax(n)،کمترین غلظت عصاره گیاهmin(p)و ترکیب آنهاmix))…… 111

نمودار4-17-مقایسه بیشترین غلظت نانوmax(n) کمترین غلظت اسانس گیاهmin(p)و ترکیب آنهاmix))….. 111

نمودار4-18-مقایسه بیشترین غلظت نانوmax(n)،غلظت متوسط عصاره گیاهmed(p)و ترکیب آنهاmix))…… 112

نمودار4-19-مقایسه بیشترین غلظت نانوmax(n) غلظت متوسط اسانس گیاهmed(p)و ترکیب آنهاmix))….. 112

نمودار4-20-مقایسه بیشترین غلظت نانوmax(n)،بیشترین غلظت عصاره گیاهmax(p) ترکیب آنهاmix))…… 113

نمودار4-21-مقایسه بیشترین غلظت نانوmax(n)،بیشترین غلظت اسانس گیاهmax(p) ترکیب آنهاmix))….. 113

عنوان                                                    فهرست اشکال                                                         صفحه

شکل 2-1-تیمول (2-isopropyl -5- methyl phenol)……………………………………………………………. 21

شکل 2-2- کارواکرول (5-isopropyl -2- methylphenol)……………………………………………………….. 22

شکل2-3-محدوده علم نانوفناوری……………………………………………………………………………………… 33

شکل2-4- محصولات وابسته به فناوری نانو در زیر شاخه‌های مختلف علوم………………………………….. 33

شکل2-5- جام لیکورگوس متعلق به چهار قرن قبل از میلاد……………………………………………………. 36

شکل2-6- برهمکنشهای نانو ذرات با باکتری مدل گرم منفی E. coli بر اساس مکانیسم ایجاد گودال….. 49

شکل 3-1- تصویر میکروسکوپ الکترونی از نانو ذرات نقره محصول نانو لوتوس پاسارگاد………………….. 81

شکل4-1- تصاویر قطر هاله عدم رشد عصاره آویشن شیرازی در 5 باکتری مورد آزمایش………………… 99

شکل4-2- تصاویر قطر هاله عدم رشد اسانس آویشن شیرازی در 5 باکتری مورد آزمایش……………… 100

شکل4-3- تصاویر قطر هاله عدم رشد نانو ذرات نقره در 5 باکتری مورد آزمایش…………………………. 101

شکل4-4- تصاویر قطر هاله عدم رشد شاهد مثبت و شاهد منفی در 5 باکتری مورد آزمایش………….. 101