اندازه گیری ملامین در نمونه­های حقیقی شیر و شیرخشک با استفاده از میکرواستخراج مایع سه فازی با قطره آویزان و آنالیز آن با دستگاه HPLC و آشکارساز UV

فهرست جدول­ها…………………………………………………………………………………………………………………………….س

فهرست شکل­­ها……………………………………………………………………………………………………………………………..ص

فصل اول (مقدمه و تئوری)…………………………………………………………………………………………………………………1

1-1- مقدمه­ای بر جدا سازی و استخراج……………………………………………………………………………………………….1

1-2- میکرواستخراج با تک قطره………………………………………………………………………………………………………..2

1-2-1- انواع روش­های میکرواستخراج با قطره……………………………………………………………………………………..2

1-2-1-1- میکرواستخراج قطره تنها به صورت مستقیم……………………………………………………………………………2

1-2-1-2- میکرواستخراج قطره تنها در فضای فوقانی…………………………………………………………………………….3

1-2-1-3-  میکرواستخراج مایع- مایع- مایع…………………………………………………………………………………………4

1-2-1-4- میکرواستخراج با جریان پیوسته…………………………………………………………………………………………..6

1-3- میکرواستخراج قطره­ای آلی شناور تجمعی……………………………………………………………………………………7

1-3-1- اصول میکرواستخراج مایع-مایع پخشی براساس جامدسازی قطره آلی شناور…………………………………..8

1-3-2- ویژگی­های حلال استخراج­کننده و پخش­کننده…………………………………………………………………………9

1-3-3- نمونه های قابل استخراج مایع-مایع پخشی براساس جامد سازی قطره آلی شناور…………………………….10

1-4- میکرواستخراج فاز مایع با هالوفایبر…………………………………………………………………………………………….11

1-4-1- انواع روش­های میکرواستخراج مایع با فایبر توخالی…………………………………………………………………..11

1-5- میکرواستخراج مایع- مایع پخشی………………………………………………………………………………………………12

فصل دوم (مروری بر کارهای انجام شده)……………………………………………………………………………………………14

2-1- ملامین چیست؟……………………………………………………………………………………………………………………..14

2-1-1- اثرات سمی ملامین……………………………………………………………………………………………………………..15

2-1-2- مروری بر کارهای انجام شده در زمینه اندازه­گیری ملامین…………………………………………………………15

2-2-کتکول­آمین چیست؟……………………………………………………………………………………………………………….17

2-2-1- عمل مدولای غدد فوق کلیوی……………………………………………………………………………………………..17

2-2-2- مروری بر کارهای انجام شده در زمینه اندازه­گیری دو پامین، اپی­نفرین و نوراپی­نفرین…………………….17

فصل سوم (قسمت اول) بخش تجربی: استخراج ملامین………………………………………………………………………….20

3-1-1- لیست مواد مصرفی……………………………………………………………………………………………………………..20

3-1-2- تهیه محلول­های استاندارد…………………………………………………………………………………………………….21

3-1-3- سایر تجهیزات مورد نیاز………………………………………………………………………………………………………21

3-1-4- روش جداسازی آنالیز گونه­ها……………………………………………………………………………………………….22

3-1-5- استخراج ملامین با روش میکرواستخراج فاز مایع سه فازی با قطره آویزان……………………………………..23

3-1-6- آماده سازی نمونه­های حقیقی……………………………………………………………………………………………….23

فصل سوم (قسمت دوم) بحث و نتایج: استخراج ملامین………………………………………………………………………….24

3-2-1- جداسازی ملامین……………………………………………………………………………………………………………….24

3-2-1-1- انتخاب نوع حلال آلی…………………………………………………………………………………………………….25

3-2-1-2- تاثیر حجم حلال­های آلی…………………………………………………………………………………………………27

3-2-1-3- تاثیر حجم فاز آبی پذیرنده……………………………………………………………………………………………….28

3-2-1-4- تاثیر pH فاز آبی دهنده و پذیرنده…………………………………………………………………………………….29

3-2-1-5- تاثیر سرعت هم زدن نمونه……………………………………………………………………………………………….30

3-2-1-6- تاثیر زمان استخراج…………………………………………………………………………………………………………32

3-2-2- ارزیابی آماری داده­های تجزیه ای ………………………………………………………………………………………..33

3-2-2-1- منحنی کالبیراسیون و گسترده خطی……………………………………………………………………………………34

3-2-2-2- حد تشخیص و حد کمی………………………………………………………………………………………………….36

3-2-2-3- فاکتور غنی سازی…………………………………………………………………………………………………………..37

3-2-2-4- بررسی دقت و صحت……………………………………………………………………………………………………..38

3-2-2-5- اندازه گیری ملامین در نمونه­های حقیقی…………………………………………………………………………….39

3-2-3- مقایسه روش میکرواستخراج فاز مایع سه فازی با قطره آویزان در اندازه­گیری ملامین با روش­های دیگر…………………………………………………………………………………………………………………………………………….43

3-2-4- نتیجه­گیری………………………………………………………………………………………………………………………..44

فصل چهارم (قسمت اول) بخش تجربی: استخراج کتکول­آمین……………………………………………………………….45

4-1-1- لیست مواد مصرفی……………………………………………………………………………………………………………..45

4-1-2- تهیه محلول های استاندارد……………………………………………………………………………………………………46

4-1-3- سایر تجهیزات مورد نیاز………………………………………………………………………………………………………46

4-1-4- روش جداسازی و آنالیز مواد………………………………………………………………………………………………..46

4-1-5- استخراج کتکول­آمین­ها با روش میکرواستخراج مایع-مایع پخشی براساس جامد سازی قطره آلی شناور……………………………………………………………………………………………………………………………………………47

4-1-6-آماده سازی نمونه­های حقیقی………………………………………………………………………………………………..49

فصل چهارم (قسمت دوم) بحث و نتایج: استخراج کتکول­آمین­ها…………………………………………………………….50

4-2-1- جداسازی کتکول­آمین­ها……………………………………………………………………………………………………..50

4-2-1-1- انتخاب نوع حلال پاشنده………………………………………………………………………………………………….51

4-2-1-2- تاثیر حجم حلال پاشنده…………………………………………………………………………………………………..52

4-2-1-3- انتخاب نوع حلال استخراجی……………………………………………………………………………………………53

4-2-1-4- انتخاب حجم حلال استخراجی………………………………………………………………………………………….55

4-3-1-5- بررسی تاثیر نمک…………………………………………………………………………………………………………..56

4-3-1-6- بررسی تاثیر pH فاز آبی………………………………………………………………………………………………….57

4-3-1-7- بررسی اثر زمان استخراج…………………………………………………………………………………………………59

4-2-2- ارزیابی آماری داده­های تجزیه­ای………………………………………………………………………………………….59

4-2-2-1- منحنی کالبیراسیون و گسترده خطی……………………………………………………………………………………59

4-2-2-2- حد تشخیص………………………………………………………………………………………………………………….62

4-2-3- اندازه گیری کتکول­آمین­ها در نمونه­های حقیقی………………………………………………………………………63

4-2-4- مقایسه روش میکرواستخراج مایع-مایع پخشی براساس جامد سازی قطره آلی شناور با روش­های دیگر…………………………………………………………………………………………………………………………………………… 67

4-2-5- نتیجه­گیری………………………………………………………………………………………………………………………..68

جدول1- مروری بر کارهای انجام شده در زمینه اندازه گیری ملامین………………………………………………16

جدول2- مروری بر کارهای انجام شده در زمینه اندازه­گیری کتکول­آمین­ها…………………………………………..19

جدول3- لیست مواد مصرف شده در استخراج و جداسازی ملامین………………………………………………………….20

جدول4- خواص فیزیکی حلال های آلی جدول استفاده شده در استخراج ملامین………………………………………21

جدول5-  تاثیر نوع حلال آلی بر میزان استخراج ملامین…………………………………………………………………………26

جدول6-  تاثیر حجم حلال آلی بر میزان استخراج ملامین………………………………………………………………………27

جدول 7- تاثیر حجم فاز پذیرنده بر میزان استخراج ملامین …………………………………………………………………….28

جدول8-  تاثیر pH  فاز آبی دهنده و پذیرنده بر میزان استخراج ملامین……………………………………………………30

جدول9- تاثیر سرعت هم زدن بر میزان استخراج ملامین………………………………………………………………………..31

جدول10- تاثیر زمان بر میزان استخراج ملامین…………………………………………………………………………………….32

جدول11- شرایط بهینه به دست آمده از میکرواستخراج فاز مایع سه فازی با قطره آویزان…………………………….33

جدول12- داده های بدست آمده از رسم منحنی کالیبراسیون محلول­های استاندارد…………………………………….34

جدول13- داده­های به­دست آمده از رسم منحنی کالیبراسیون برای نمونه شیر خشک و شیر………………………….35

جدول 14- ارقام با معنی به دست آمده از منحنی کالیبراسیون محلول های استاندارد برای ملامین به روش میکرواستخراج    مایع سه فازی با قطره آویزان……………………………………………………………………………………..36

جدول15- ارقام شایستگی به­دست آمده از منحنی کالیبراسیون نمونه­های حقیقی برای ملامین به روش میکرواستخراج مایع سه فازی با قطره آویزان………………………………………………………………………………………..37

جدول16- داده های به دست آمده برای محاسبه فاکتور غنی سازی………………………………………………………….37

جدول17- بررسی دقت و صحت روش میکرواستخراج مایع سه فازی با قطره آویزان در اندازه­گیری ملامین………………………………………………………………………………………………………………………………………….38

جدول18- میزان بازیابی ملامین در نمونه­های شیرخشک و شیر……………………………………………………………….40

جدول19-  مقایسه روش­های متفاوتی برای تعیین ملامین در نمونه های شیرخشک و شیر……………………………..43

جدول20- ليست مواد مصرف شده در استخراج و جداسازي  کتکول آمین ها…………………………………………..44

جدول21 – خواص فيزيکي حلال استخراجی در روش استخراج مايع ـ مايع پخشی بر اساس جامد سازی قطره  آلی شناور……………………………………………………………………………………………………………………………………..44

جدول22 – تاثير نوع حلال هاي پاشنده بر کارايي استخراج کتکول­آمین ها……………………………………………….50

جدول23- تاثیر حجم حلال پاشنده در استخراج کتکول­آمین­ها ……………………………………………………………..51

جدول24- تاثير نوع حلال استخرا جی بر کارايي استخراج  کتکول آمین ها………………………………………………53

جدول25- تاثیر حجم حلال استخراجی………………………………………………………………………………………………..54

جدول26- تاثیر نمک بر کارایی استخراج کتکول­آمین­ها…………………………………………………………………………55

جدول 27- تاثیر pH فاز آبی بر کارایی استخراج کتکول­آمین­ها………………………………………………………………57

جدول28- شرايط بهينه به دست آمده از استخراج مايع- مايع پخشی بر اساس جامدسازی قطره آلی شناور………58

جدول29- داده­های به­دست آمده از رسم منحنی کالیبراسیون نمونه­های استاندارد برای دوپامین، اپی­نفرین و نوراپی­نفرین ……………………………………………………………………………………………………………………………………………..59

جدول30 – ارقام با معنی به­دست آمده از منحنی کالیبراسیون برای نمونه­های حقیقی پلاسما و ادرار………………….60

جدول 31- ارقام با معنی به دست آمده از منحنی کالیبراسیون محلول های استاندارد برای کتکول آمین ها………..61

جدول32- میزان بازیابی کتکول آمین ها در ادرار وپلاسما……………………………………………………………………….62

جدول33- مقایسه روش­های متفاوت برای تعیین کتکول­آمین­ها………………………………………………………………65

شکل1- میکرواستخراج مایع- مایع- مایع……………………………………………………………………………………………..4

شکل2-a ) میکرواستخراج قطره به صورت مستقیمb ) میکرواستخراج قطره در فضای فوقانی c) میکرواستخراج مایع- مایع- مایع………………………………………………………………………………………………………………………………..5

شکل3- میکرواستخراج با جریان پیوسته………………………………………………………………………………………………..6

شکل4- میکرواستخراج با هالوفایبرa) دوفازی b) سه فازی……………….. ……………………………………………………11

شکل5- ساختار ملامین……………………………………………………………………………………………………………………..14

شکل6- ساختارکتکول­آمین­ها…………………………………………………………………………………………………………….17

شکل7-کروماتوگرام ملامین………………………………………………………………………………………………………………24

شکل8- تاثیر نوع حلال آلی بر کارایی استخراج ملامین………………………………………………………………………….26

شکل9- تاثیر حجم حلال آلی بر کارایی استخراج ملامین……………………………………………………………………….27

شکل10- تاثیر حجم فاز پذیرنده بر کارایی استخراج ملامین……………………………………………………………………29

شکل11- تاثیرpH فاز دهنده و پذیرنده بر کارایی استخراج ملامین…………………………………………………………. 30

شکل12- تاثیر سرعت هم زدن بر کارایی استخراج ملامین……..   …………………………………………………………….31

شکل13- تاثیر زمان بر کارایی استخراج ملامین…………………………………………………………………………………….33

شکل14- منحنی کالیبراسیون به­دست آمده از محلول­های استاندارد ملامین………………………………………………..34

شکل15- منحنی کالیبراسیون به­دست آمده برای شیرخشک و شیر……………………………………………………………35

شکل16-کروماتوگرام ملامین در شیر پس از استخراج باروش میکرواستخراج مایع سه فازی با قطره……………….40

شکل17-کروماتوگرام نمونه شیر حاوی 5 میکروگرم بر لیترملامین پس از استخراج باروش میکرواستخراج مایع سه                 فاز قطره…………………………………………………………………………………………………………………………………………41

شکل18-کروماتوگرام ملامین در شیر خشک پس از استخراج باروش میکرواستخراج مایع سه فازی با قطره…….41

شکل19-کروماتوگرام نمونه شیرخشک حاوی 2 میکروگرم بر لیترملامین پس از استخراج باروش میکرواستخراج                مایع سه فازی با قطره………………………………………………………………………………………………………………………..42

شکل20- مراحل مختلف میکرواستخراج مایع-مایع پخشی بر اساس جامد سازی قطره آلی شناور…………………..47

شکل21-کروماتوگرام کتکول­آمین­ها…………………………………………………………………………………………………49

شکل22- تاثیر حجم حلال پاشنده بر کارایی استخراج کتکول­آمین­ها……………………………………………………….52

شکل23- تاثیر نوع حلال استخراجی بر کارایی استخراج کتکول­آمین­ها…………………………………………………….53

شکل24- تاثیر حجم حلال استخراجی بر کارایی استخراج کتکول­آمین­ها………………………………………………….55

شکل25- تاثیر مقدار نمک  بر کارایی استخراج کتکول­آمین­ها………………………………………………………………..56

شکل26- تاثیرpH  فاز آبی  بر کارایی استخراج کتکول­آمین­ها………………………………………………………………..57

شکل27- منحنی کالیبراسیون به­دست آمده برای اپی­نفرین، دوپامین و نوراپی­نفرین……………………………………..59

شکل28-کروماتوگرام کتکول­آمین­ها در ادرار پس از استخراج با روش  میکرواستخراج مایع-مایع پخشی براساس             جامد سازی قطره آلی شناور……………………………………………………………………………………………………………..63

شکل29-کروماتوگرام نمونه ادرار حاوی(2)میلی­گرم بر لیتر پس از استخراج با روش  میکرو استخراج مایع-مایع               پخشی بر اساس جامد سازی قطره آلی شناور………………………………………………………………………………………..63

شکل30-کروماتوگرام کتکول­آمین­ها در خون پس از استخراج با روش  میکرواستخراج مایع-مایع پخشی براساس             جامد سازی قطره آلی شناور……………………………………………………………………………………………………………..64

شکل31-کروماتوگرام نمونه خون حاوی 2 میلی­گرم بر لیتر پس از استخراج با روش  میکرو استخراج مایع-مایع                 پخشی بر اساس جامد سازی قطره آلی شناور……………………………………………………………………………………….64