مطالعه نقش استیله شدن بر ساختار و ویژگی های آمیلوئیدی هورمون انسولین

توضیحات

مطالعه نقش استیله شدن بر ساختار و ویژگی های آمیلوئیدی هورمون انسولین

تعداد137صفحه در فایل word

واژگان کلیدی: آسپیرین، انسولین، استیلاسیون، ساختار، کشش سطحی، فیبر آمیلوئیدی.

فهرست مطالب

عنوان صفحه

فصل اول: مقدمه

1-1- هورمون انسولین ……………………. 2

1-1- 1- ساختار هورمون انسولین …………. 4

1-1-1-1- ساختار اول انسولین………….. 4

1-1-1-2- ساختار دوم انسولین………….. 5

1-1-1-3- ساختار سوم انسولین…………. 6

1-1-1-4- ساختار چهارم انسولین……….. 6

1-1-2- سنتز هورمون انسولین…………….. 8

1-1-3- ترشح هورمون انسولین……………. 9

1-1-4- اشکال مختلف هورمون انسولین ……… 10

1-1-5- عملکرد زیستی هورمون انسولین …….. 11

1-1-6- گیرنده هورمون انسولین…………… 13

1-2- بیماری دیابت قندی…………………. 15

1-2-1- دیابت نوع- I……………………. 15

1-2-1-1- دیابت آدیوپاتیک…………….. 16

1-2-2- دیابت نوع- II…………………… 16

1-2-3- دیابت حاملگی…………………… 17

1-2-4- عوارض بیماری دیابت …………….. 17

عنوان صفحه

1-3- آسپرین ………………………….. 19

1-3-1- ساز و کار عملکرد آسپرین ………… 21

1-4- تا خوردگی و تجمعات پروتئینی………… 22

1-4-1- تجمعات منظم پروتئینی: فیبر آمیلوئیدی 25

1-4-2- مراحل تشکیل فیبریل ها…………… 26

1-4-3- پدیده فیبریلاسیون هورمون انسولین….. 28

1-5- نقش چاپرون ها در جلوگیری از فرآیند توده ای شدن

و فیبریلاسیون پروتئین ها………………… 32

1-5-1- چاپرون های آلفا کریستالین و بتا کازئین 32

فصل دوم: مروری بر پژوهش های پیشین…………. 35

فصل سوم: مواد و روش های تحقیق

3-1- مواد مصرفی و رده ی سلولی…………… 40

3-1-1- مواد مصرفی…………………….. 40

3-1-2- رده ی سلولی……………………. 41

3-2- تهیه محلول ها…………………….. 41

3-2-1- تهیه محلول های مورد نیاز کشت سلول سرطانی 41

3-2-1-1- تهیه محلول MTT……………… 41

3-2-1-2- تهیه محلول تریپان بلو جهت رنگ آمیزی و شمارش

سلول های زنده و غیر زنده……………. 41

3-2-1-3- تهیه محلول SDS-DMF…………… 42

3-2-2- تهیه ی محلول های پروتئینی……….. 42

عنوان صفحه

3-2-2-1- تهیه ی محلول انسولین ……….. 42

3-2-2-2- تهیه محلول های بتاکازئین و آلفاکریستالین 43

3-2-3- تهیه ی محلول های مورد نیاز……… 43

3-2-3- 1- تهیه محلول بافر فسفات……… 43

3-2-3-2- تهیه ی محلول استوک ANS………. 44

3-2-3-3- تهیه ی محلول استوک تیوفلاوین T . 45

3-2-3-4- تهیه محلول استوک کنگورد……… 46

3-2-3-5- تهیه محلول OPA…………….. 47

3-2-3-6- تهیه محلول فلورسامین……….. 48

3-2-4- تهیه محلول های مورد نیاز ژل الکتروفورز 48

3-2-4-1- تهیه محلول آکریل آمید و بیس آکریل آمید 48

3-2-4-2- تهیه محلول 20 درصد SDS……… 48

3-2-4-3- تهیه محلول 10 درصد آمونیوم پرسولفات (APS) 49

3-2-4-4- تهیه محلول بافر تریس 5/1 مولار .. 49

3-2-4-5- تهیه محلول بافر تریس 5/0 مولار . 49

3-2-4-6- تهیه محلول بافر تانک……….. 50

3-2-4-7- تهیه بافر نمونه X2 ………… 50

3-2-4-8- تهیه محلول رنگ آمیزی کوماسی بلو 51

3-2-4-9- تهیه محلول رنگ زدای کوماسی بلو.. 51

3-3- روش های استفاده شده در این پژوهش……. 52

3-3-1- تخلیص آلفا کریستالین ………….. 52

3-4- روش های تحقیق…………………….. 53

3-4-1- فرآیند استیلاسیون هورمون انسولین پانکراس گاوی با آسپیرین……………………………………. 53

عنوان صفحه

3-4-2- الکتروفورز ژلی هورمون انسولین استیله و غیر استیله

به منظور بررسی میزان استیلاسیون و تشکیل توده های پروتئینی

با وزن مولکولی بالا…………………… 53

3-4-3- تعیین گروه های آمین آزاد/ غیر واکنش دهنده در هورمون انسولین……………………………… 54

3-4-4- مطالعه فلورسانس ذاتی هورمون انسولین در حضور آسپیرین……………………………………. 55

3-4-5- مطالعه فلورسانس عارضی هورمون انسولین در حضور آسپیرین……………………………………. 56

3-4-6- بررسی تشکیل فیبر آمیلوئیدی هورمون انسولین در حضور

آسپیرین با استفاده از آزمون فلورسانس تیوفلاوین T (ThT) و آزمون

اسپکتروسکوپی سنجش جذبی کنگورد…………. 57

3-4-7- بررسی توده ای شدن پروتئین انسولین استیله و غیر استیله ……………………………………. 58