%31تخفیف

بررسی اثرات آپوپتوزی ترکیب نانوئی فارنسی فرولC بر روی سلول های سرطانی AGS

بررسی اثرات آپوپتوزی ترکیب نانوئی فارنسی فرولC بر روی سلول های سرطانی AGS

تعداد 97صفحه در فایل word

كارشناسي ارشد ( MSc) در رشته ژنتيك

بررسی اثرات آپوپتوزی ترکیب نانوئی فارنسی فرولC بر روی سلول های سرطانی AGS

واژه های کليدی: ژن هایBax وBcl2 ، آپوپتوز، سزکوئیترپن کومارین، فارنسی فرولC

چکيده

مقدمه و هدف: آپوپتوز، مرگ برنامهریزی شده سلولی میباشد که در رشد و نمّو و هموستازی موجودات زنده نقش اساسی ایفاء میکند. اختلال در این فرآیند مهّم سلولی میتواند منجر به بروز تومورهای سرطانی گردد. بدین منظور القاء آپوپتوز در سلول های سرطانی میتواند راهکار مناسبی در جهت از بین بردن آنها تلقّی شود. سزکوئیترپن ها یکی از متابولیت های ثانویهی گیاهی میباشند که به طور فراوان در گیاهان جنس Ferula از تیرهی Apiaceae یافت میشوند. از جمله مشتقّات کومارین ها، سزکوئیترپن کومارینها هستند که در طبّ سنتّی برای درمان بسیاری از بیماری ها از جمله سرطان استفاده میشوند. فارنسی فرولC از گروه سزکوئیترپن کومارین ها است که از ریشهی گیاه Ferula szowitziana استخراج شده و دارای خاصیّت ضدّ توموری، ضدّ رگ زایی و ضدّ باکتریایی است. هدف از تحقیق حاضر بررسی اثر آپوپتوزی ترکیب نانوئی فارنسی فرولC در مقایسه با فارنسی فرولC آزاد روی سلول های سرطانی معده (Gastric Adenocarcinoma, AGS) میباشد. بدین منظور، خاصیّت آپوپتوزی این ترکیب گیاهی از طریق بررسی بیان ژن های Bcl2/Bax با استفاده از تکنیکRT- PCR نیمه کمّی مورد مطالعه قرار گرفت.

روش ها: به منظور بررسی سمیّت ترکیب دندروزومی فارنسی فرولC در مقایسه با فرم آزاد آن روی سلول های AGS، ابتدا سلول های AGS تهیّه و کشت داده شدند. سپس تحت تأثیر فارنسی فرولC و ترکیب نانوئی آن در دوزهای مناسب قرار گرفتند و با استفاده از تست MTT میزان سمیّت آنها به صورت IC₅₀ ارزیابی گردید. در مرحلهی بعد، تعداد مناسبی از سلول های AGS با دوز به دست آمده برای IC₅₀، تحت تیمار قرار گرفته و در نهایت از نمونه های تیمار شده و نشده، RNA استخراج و بیان ژن هایBcl2/Bax و β2m به عنوان کنترل داخلی با استفاده از RT-PCR نیمه کمّی مورد بررسی قرار گرفت.

یافته ها: داده های به دست آمده نشان داد که فارنسی فرولC دندروزمی در مقایسه با فرم آزاد آن به طور معنیداری تکثیر سلول های AGS را به صورت وابسته به دوز و زمان مهار میکند .(P<0.01) آنالیز نتایج به دست آمده از RT-PCR نیمه کمّی، معنیدار بودن افزایش بیان Bax و کاهش بیان Bcl2 را در سلول های تیمار شده، نشان میدهد (P<0.05).

نتیجه گیری: در مجموع یافته های این تحقیق حاکی از پتانسیل بالقوّه داروئی بالای فارنسی فرولC دندروزومی است که میتواند به عنوان کاندید دارویی مهم در کنار سایر روش های درمانی، برای درمان سرطان به کار برده شود. از جمله مزایای ضدّ سرطانی این ترکیب گیاهی این است که میتواند مستقیماً مسیر آپوپتوزی را فعّال کند.

دسته: زیست شناسی, علوم تجربی برچسب: آپوپتوز, سزکوئیترپن کومارین, فارنسی فرولC, واژه های کليدی: ژن هایBax وBcl2

توضیحات
نظرات (0)

فصل اول: بررسی منابع

1-1- آپوپتوز……………………………………………………………………………………………………………………………………………….2

1-1-1- مسیر خارجی یا مسیر القاء شده توسط گیرنده های مرگ… 3

1-1-2- مسیر داخلی یا مسیر میتوکندریایی.. 4

1-1-3- مسیر وابسته به پرفورین و گرانزیم.. 5

1-2- پروتئن های خانوادهی Bcl2……………………………………………………………………………………………………………6

1-2-1- پروتئین های آنتی آپوپتوزی (pro-Survival Family ) 7

1-2-2- پروتئین های پرو آپوپتوزی Bcl2. 7

1-2-2-1- پروتئین های عملگر (Effector proteins The Bax Family or) 7

1-2-2-2- BH3-only proteins……………. 8

1-3- پروتئن های خانوادهی Bcl2 و تومورزایی………………………………………………………………………………………..9

1-4- آپوپتوز و راهبردهای جدید برای درمان سرطان…………………………………………………………………………….9

1-5- سرطان……………………………………………………………………………………………………………………………………………11

1-5-1- مراحل ایجاد سرطان.. 12

1-5-2- انواع سرطان……… 13

1-5-3- روش های مختلف درمان سرطان.. 15

1-5-3-1- روش های متداول درمان سرطان.. 15

1-5-3-2- روش های نوین درمان سرطان.. 15

1-6- طبّ سنّتی و اهمیّت گیاهان دارویی…………………………………………………………………………………………….16

1-7- کومارین ها………………………………………………………………………………………………………………………………………17

1-7-1- اهمیت کومارین ها و فعالیّت بیولوژیکی آنها…………………………………………………………………………..19

1-8- گیاه شناسی Ferula szovitsiana………………………………………………………………………………………………22

1-8-1- معرفی گیاه و جایگاه آن در تقسیمات گیاهی.. 22

1-8-2- ویژگی های خانوادهی چتریان (تیره جعفری) 23

1-8-3- جنس فرولا………. 23

1-8-4- فیتوشیمی جنس فرولا. 24

1-9- موانع بر سر راه استفاده از ترکیبات گیاهی در قالب دارو………………………………………………………….25

1-9-1- حامل های دارویی.. 26

1-9-1-1- لیپوزوم ها…………………… 26

1-9-1-2- میسل های پلیمری……… 27

1-9-1-3- امولسیون ها……………….. 28

1-9-1-4- میکروسفرها ……………… 28

1-9-1-5- دندریمرها…………………… 28

1-9-1-6- دندروزوم ها………………… 29

1-10- پیش فرض ها و اهداف………………………………………………………………………………………………………………30

فصل دوّم : مواد و روش‏ها

2 -1-کشت سلولی………………………………………………………………………………………………………………………………….33

2-1-1- تهيهی محيط کشت RPMI 1640. ….34

2-1-2- تهيهی بافر فسفات سالين (PBS) ..36

2-2- کشت و تکثیر سلول های AGS………………………………………………………………………………………………….36

2-2-1- یخ زدایی سلول‌ها 37

2-2-2- تعویض محیط کشت سلولی.. 37

2-2-3- پاساژ سلول ها….. 38

2-2-4- انجماد سلول ها…. 39

2-3- تهیه فرمولاسیون دندروزومی کومارین؛ نانو فارنسی فرول C(NFC)…………………………………………40

2-3-1- تهیه کومارین دندروزومی با غلظت µΜ500. 41

2-4-آزمون MTT…………………………………………………………………………………………………………………………………….41

2-4-1- سنجش درصد سلول های سالم قبل از انتقال به پلیت های محيط کشت با استفاده از رنگ آميزی Trypan blue ……………………………………………………………………………………………………………………………..44

2-5- بررسی بیان ژن های Bcl2 و Bax در سلول های تیمار شده و بدون تیمار……………………………….46

2-5-1- تیمار سلول ها با فارنسی فرول C دندروزومی.. 46

2-5-2- استخراج RNAی کل از سلول های تیمار شده و بدون تیمار 47

2-5-3- بررسي كمّي و كيفي RNAي استخراج شده 51

2-5-3-1- اسپكتروفتومتري UV با استفاده از دستگاه Pico-drop. 51

2-5-3-2- الكتروفورز ژل آگارز…… 52

2-6- واكنش رونويسي معكوس………………………………………………………………………………………………………………55

2-7- واكنش PCR………………………………………………………………………………………………………………………………….58

2-7-1- طراحي پرايمر…… 58

2-7-2- واكنش PCR برای تکثیر cDNA ژن های Bax، Bcl2 و β2m.. 62

2-8- بررسی بیان ژن به صورت نیمه کمّی…………………………………………………………………………………………….66

2-9- آنالیز آماری…………………………………………………………………………………………………………………………………….66

فصل سوّم: نتایج و بحث

3-1- نتایج بررسی سمّی…………………………………………………………………………………………………………………………69

3-1-1- دندروزوم باعث افزایش محلولیّت و سمیّت فارنسی فرول C میگردد. 69

3-2- نتایج بررسی تغییرات بیان ژن های Bcl2 و Bax………………………………………………………………………71

3-2-1- نمونه های مورد مطالعه. 71

3-2-2- تعیین کیفیّت و کمیّت RNAی استخراج شده 71

3-2-3- تعیین تعداد چرخه های مناسب در PCR برای تکثیر ژن ها 72

3-2-4- تعیین دمای مناسب اتصال پرایمرها برای ژن های Bcl2، Bax و β2m.. 72

3-2-5- نحوهی بررسی بیان ژن های Bcl2 و Bax در نمونه های تیمار شده و نشده با فارنسی فرولC دندروزومی………………………………………………………………………………………………………………………………………………….73

3-2-5- نتایج حاصل از آنالیز آماری داده های RT- PCR.. 74

3-3- بحث………………………………………………………………………………………………………………………………………………..76

3-3-1- سرطان و طبّ سنّتی.. 76

فصل اول: بررسی منابع

شکل 1-1- مورفولوژی آپوپتوز……………………………………………………………………………………………………………………3

شکل 1-2- مسیر خارجی و داخلی آپوپتوز………………………………………………………………………………………………..5

شکل 1-3- مسیر وابسته به پرفورین و گرانزیم………………………………………………………………………………………….6

شکل 1-4- پروتئین های خانوادهی Bcl2………………………………………………………………………………………………….9

شکل 1-5- کومارین………………………………………………………………………………………………………………………………….17

شکل 1-6- مشتقات کومارینی………………………………………………………………………………………………………………….25

شکل ا-7- لیپوزوم……………………………………………………………………………………………………………………………………..27

شکل 1-8- میسل های دارویی…………………………………………………………………………………………………………………27

شکل 1-9- دندریمر و منومر آن………………………………………………………………………………………………………………29

فصل دوم: مواد و روش ها

شکل 2-1- سلول های AGS………………………………………………………………………………………………………………….34

شکل 2-2- منحنی استاندارد خطی………………………………………………………………………………………………………..42

شکل 2-3- کنترل های لازم در تست MTT………………………………………………………………………………………….43

شکل 2-4- هموسایتومر…………………………………………………………………………………………………………………………..45

فصل سوم: نتایج و بحث

شکل 3-1- مورفولوژی سلول های AGS قبل و بعد از تیمار………………………………………………………………..69

شکل 3-2- تأثیر فارنسی فرولC دندروزومی و آزاد روی تعداد سلول های AGS زنده در 24 ساعت………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..70

شکل 3-3- تأثیر فارنسی فرول C دندروزومی و آزاد روی تعداد سلول های AGS زنده در 48 ساعت……………………………………………………………………………………………………………………………………………………….70

شکل 3-4- تأثیر فارنسی فرول C دندروزومی روی تعداد سلول های AGS زنده در 24و 48 ساعت………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..71

شکل 3-5-RNA های استخراجی که در ژل آگارز 1% لود شده است………………………………………………..72

شکل 3-6- بررسی الکتروفورز بیان ژن Bcl2………………………………………………………………………………………….73

شکل 3-7- بررسی الکتروفورز بیان ژن Bax………………………………………………………………………………………….73

شکل 3-8- مقایسهی سطح بیان ژن Bcl2 در نمونه های تیمار و بدون تیمار و بازهی زمانی 24 و 48 ساعت……………………………………………………………………………………………………………………………………….74

شکل 3-9- مقایسهی سطح بیان ژن Bax در نمونه های تیمار و بدون تیمار و بازهی زمانی 24 و 48 ساعت………………………………………………………………………………………………………………………………………75

دیدگاهها

هیچ دیدگاهی برای این محصول نوشته نشده است.

اولین نفری باشید که دیدگاهی را ارسال می کنید برای “بررسی اثرات آپوپتوزی ترکیب نانوئی فارنسی فرولC بر روی سلول های سرطانی AGS”

امتیاز 0 از 5 از 0 دیدگاه

قیمت اصلی: 36,000 تومان بود.قیمت فعلی: 25,000 تومان.

تاریخ ایجاد بهمن 11, 1399
تاریخ بروزرسانی اسفند 13, 1401
فروش 1
دیدگاه 0

شرایط استفاده از محصول

تمام محصولات به ازای پرداخت پروژه تنها قابل استفاده می باشند. این بدین معنی است که برای استفاده از یک یا چند محصول ، لازم به خرید آن محصول است.

مزایای خرید این محصول:

دسترسی به فایل به صورت همیشگی
پشتیبانی رایگان
پشتیبانی 24 ساعته محصول
بازگشت وجه در صورت عدم رضایت مشتری

مشاهده قوانین سایت