مطالعه ی تغییرات ژنومی در کشت درون شیشه ای گندم نان با استفاده از نشانگرهای DNA

تعداد 103صفحه فایل word قابل ویرایش

Site: www.filenaab.ir

توضیحات

مطالعه ی تغییرات ژنومی در کشت درون شیشه ای گندم نان با استفاده از نشانگرهای DNA

چکیده

کلمات کلیدی: گندم نان، کالوس، کشت بافت، تنوع سوماکلونال، ISSR.

رشته اصلاح نباتات(M.Sc)

عنوان:

مطالعه ی تغییرات ژنومی در کشت درون شیشه ای گندم نان با استفاده از نشانگرهای DNA

فهرست مطالب

عنوان صفحه

چکیده ………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 1

فصل اول: مقدمه و کلیات ………………………………………………….. …………………………………………………………….2

1-1- مقدمه ……………………………………………………………………………………………………………………………………..3

1-2- مبدا گندم ………………………………………………………………………………………………………………………………. 6

1-3- سطح زیر کشت و میزان عملکرد گندم ………………………………………………………………………………………..7

1-4- کشت بافت ……………………………………………………………………………………………………………………………8

1-4-1- اهمیت کشت بافت گیاهی …………………………………………………………………………………………..9

1-4-2- کاربردهای کشت بافت گیاهی ……………………………………………………………………………………………….9

1-4-3- کشت جنین ……………………………………………………………………………………………………………………….9

1-4-3-1- جنبه های کاربردی کشت جنین ……………………………………………………………………………………… 11

1-4-3-2- کشت جنین بالغ …………………………………………………………………………………………………………….12

1-4-3-3- کشت جنین نابالغ ………………………………………………………………………………………………………… 13

1-4-4- القاء و باززایی از کالوس ……………………………………………………………………………………………………16

1-5- تنوع سوماکلونال …………………………………………………………………………………………………………………..19

1-5-1- تنوع سوماکلونال در کشت بافت گیاهی ……………………………………………………………………………….19

1-5-2- منشا و چگونگی ایجاد تنوع سوماکلونال ………………………………………………………………………………20

1-5-2-1- تغییرات ژنتیکی (وراثت پذیر) ………………………………………………………………………………………..20

1-5-2-1-1- تغییر در سطح پلوئیدی ……………………………………………………………………………………………21

1-5-2-1-2- تغییرات ساختمانی در DNA هسته ای ……………………………………………………………………….22

1-5-2-1-3- نوترتیبی شیمری ………………………………………………………………………………………………………..23

1-5-2-2- تغییرات اپی ژنتیکی (وراثت ناپذیر) ………………………………………………………………………………….23

1-5-3- کنترل تنوع سوماکلونال ……………………………………………………………………………………………………….24

1-5-4- کاربرد تنوع سوماکلونال در اصلاح نباتات ……………………………………………………………………………..26

1-6- اهمیت تعیین تنوع ژنتیکی در گندم …………………………………………………………………………………………..27

1-7- نشانگر و ویژگی های آن ………………………………………………………………………………………………………..28

1-7-1- انواع نشانگرهای ژنتیک ………………………………………………………………………………………………………29

1-7-2- نشانگرهای مورفولوژیک …………………………………………………………………………………………………….29

1-7-3- نشانگرهایمولکولی ……………………………………………………………………………………………………………..29

1-7-3-1- نشانگرهای پروتئینی ……………………………………………………………………………………………………….30

1-7-3-2- نشانگرهایDNA ………………………………………………………………………………………………………….31

1-7-3-2-1- مارکرهای DNA غیرمبتنی بر PCR ……………………………………………………………………………32

1-7-3-2-2- مارکرهای DNA مبتنی بر PCR ………………………………………………………………………………..32

1-8- اهداف مشخص تحقیق ……………………………………………………………………………………………………………35

فصل دوم: بررسی منابع ……………………………………………………………………………………………………………………36

2-1- بررسی مرور منابع ………………………………………………………………………………………………………………….37

فصل سوم: مواد وروشها …………………………………………………………………………………………………………………..45

3-1- محل و زمان اجرای آزمایش ……………………………………………………………………………………………………46

3-2- آزمایش اول …………………………………………………………………………………………………………………………..46

3-2-1- مواد گیاهی ………………………………………………………………………………………………………………………..46

3-2-2- محیط کشت ………………………………………………………………………………………………………………………46

3-2-3- دستورالعمل تهیه یک لیتر محیط کشت MSFull ………………………………………………………………….51

3-2-4- استریل کردن بذور ……………………………………………………………………………………………………………. 51

3-2-5- مرحله کالزایی ……………………………………………………………………………………………………………………52

3-2-6- مرحله واکشت کالوس ………………………………………………………………………………………………………..54

3-3- آزمایش دوم …………………………………………………………………………………………………………………………..54

3-3-1- بررسی تنوع سوماکلونال در گندم نان با استفاده از مارکر ISSR ………………………………………………54

3-3-2- مواد گیاهی ………………………………………………………………………………………………………………………..54

3-3-3- استخراج DNA ژنومی ………………………………………………………………………………………………………55

3-3-4- تهیه بافر TE …………………………………………………………………………………………………………………….56

3-3-5- تهیه بافر TBE (5x) …………………………………………………………………………………………………………56

3-3-5-1- تهیه بافر TBE(1x) ………………………………………………………………………………………………………57

3-3-6- تعیین کیفیت و کمیت DNA ژنومی استخراج شده ………………………………………………………………57

3-3-7- انجام واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) ………………………………………………………………………………57

3-3-8- چرخه حرارتی در دستگاه PCR …………………………………………………………………………………………58

3-3-9-الکتروفورز محصول PCR بر روی ژل آگارز …………………………………………………………………………60

3-3-10- توالی آغازگرهای مورد استفاده …………………………………………………………………………………………..60

3-3-11- تجزیه و تحلیل داده ها ……………………………………………………………………………………………………..61

3-3-11-1- امتیازدهی باندها …………………………………………………………………………………………………………..61

3-3-11-2- تجزیه خوشه ای ………………………………………………………………………………………………………….61

3-3-11-3 – شاخص های مولکولی …………………………………………………………………………………………………64

فصل چهارم: نتایج و بحث ……………………………………………………………………………………………………………….65

4-1- نتایج مربوط به بررسی الگوی باندی DNA ……………………………………………………………………………..66

4-2- بررسی محتوای اطلاعات چند شکل(PIC) ………………………………………………………………………………67

4-3- تشابه ژنتیکی …………………………………………………………………………………………………………………………71

4-4- توزیع فراوانی فاصله ژنتیکی ……………………………………………………………………………………………………74

4-5- تجزیه خوشه ای …………………………………………………………………………………………………………………….76

4-5-1- تجزیه خوشه ای براساس ضریب تشابه جاکارد……………………………………………………………………….76

4-5-2- تجزیه خوشه ای براساس ضریب تشابه دایس ………………………………………………………………………..78

4-6- نتایج حاصل از تجزیه به مختصات اصلی (PCO) …………………………………………………………………….79

4-7- نتیجه گیری …………………………………………………………………………………………………………………………..82

4-8- پیشنهادها …………………………………………………………………………………………………………………………….. 83

منابع ……………………………………………………………………………………………………………………………………………. 84