%34تخفیف

   مطالعه بیان ژن  NAC69-1تحت تنش خشکی در گندم نان

تعداد94 صفحه در فایل word

 

کارشناسی ارشد مهندسی کشاورزی

گرایش اصلاح و نباتات

 

   مطالعه بیان ژن  NAC69-1تحت تنش خشکی در گندم نان

چکیده:

خشکی يکي از مهمترين تنش هاي محيطي محدود کننده توليدات کشاورزي بوده که سطح قابل توجهي از زمين هاي کشاورزي ايران را فرا گرفته است. شناخت مورفولوژیکی مقاومت به خشکی در بهبود مشکلات ایجاد شده تحت شرایط خشکی از اهمیت زیادی برخوردار می­باشد در حقیقت روابط ژنتیکی هر یک از این فرایندها و ارتباط دقیق آنها با میزان عملکرد دانه گیاه مهم و ناشناخته است. در اين راستا دو پژوهش به منظور بررسي خصوصیات مورفولوژیکی و بيان ژن NAC69-1 تحت تنش خشکی درسه  رقم گياه گندم نان (شیراز،مهدوی و روشن)صورت گرفت در پژوهش اول به منظور بررسی خصوصیات مورفولوژیکی مرتبط با تحمل به خشکی سه رقم گندم نان شامل روشن، شیراز و مهدوی با استفاده از آزمایش فاکتوریل در قالب طرح کاملا تصادفی با پنج تکرار مورد ارزیابی قرار گرفتند. خشکی  اثر معنی داری بر کلیه صفات مورد مطالعه (طول ساقه‌چه، تعداد برگ، طول برگ، عرض برگ، وزن تر اندام هوایی، وزن خشک اندام هوایی، تعداد ریشه‌چه، طول ریشه‌چه، وزن خشک ریشه‌چه، محتوی نسبی آب برگ) داشت و اثر متقابل خشکی ×  رقم برای تعداد ریشه‌چه و محتوی نسبی آب برگ معنی دار گردید بنابراین از نظر این صفات ارقام مختلف در سطوح آبياري مختلف روند متفاوتی را نشان دادند. آزمایش دوم به منظور بررسی الگوي بیان ژن NAC69-1 كه از جمله ژن‌های تنظیمی دخيل در پاسخ به تنش‌هاست انجام شد. در پايان مراحل اعمال تنش به صورت تصادفي از هر گلدان نمونه گيري از برگها صورت گرفت و برگها در ازت مايع منجمد و سپس در فريزر 80- نگه داري شدند. بعد از استخراجRNA و سنتز cDNA، بيان ژن NAC69-1 که يکي از ژنهاي مربوط به فاکتور رونويسي مي باشد در سه رقم گندم تحت شرايط تنش با استفاده از روش Real-time PCR مورد بررسي و مقايسه قرار گرفت. از ژن خانه دار ACTIN براي نرمال کردن داده ها استفاده شد.

کلمات کلیدی: تنش خشکی، گندم، خصوصيات مورفولوژيكي، Real-time PCR،
ژن1  NAC69-

 

فصل اول: کلیات مفاهیم

1- مقدمه…………………………………………………………………………………………………………………..2

فصل دوم: مروری بر منابع

2-بررسی منابع…………………………………………………………………………………………………………..9

2-1 مروری بر تحقیقات انجام شده………………………………………………………………………………10

2-2تحقیقات انجام شده در جهت شناسایی صفات فیزیولوژیک و مورفولوژیک مرتبط با تحمل به خشکی……………………………………………………………………………………………………………………10

فصل سوم: مواد و روشها

3-مواد و روش ها……………………………………………………………………………………………………..29

3-1 مواد گياهي ………………………………………………………………………………………………………30

3-1 -1کاشت مواد گیاهی…………………………………………………………………………………………30

3-1-2جزییات خاک و نحوه محاسبه ظرفیت زراعی……………………………………………………….30

3-1-3 تنک کردن گلدان ها………………………………………………………………………………………32

3-2اعمال تیمار تنش خشکی ……………………………………………………………………………………..32

3-3 طراحی آغازگر………………………………………………………………………………………………….32

3-4 استخراج RNA وسنتز cDNA……………………………………………………………………………..33

3-4-1 استخراج RNA……………………………………………………………………………………………..33

3-4-2مراحل استخراج RNA…………………………………………………………………………………….33

3-4-3بررسی کمی و کیفی RNA استخراج شده…………………………………………………………..34

3-4-4 تیمار RNA با آنزیم DNase1  و سنتز cDNA…………………………………………………….34

3-5  بررسی نسبی بیان ژن با روش  Real time PCR……………………………………………………..34

فصل چهارم: نتایج و بحث

4-1-تجزیه واریانس و مقایسه میانگین………………………………………………………………………….37

4-1-1 تجزیه واریانس………………………………………………………………………………………………37

4-1-2-مقایسه میانگین………………………………………………………………………………………………37

4-2-طول ساقه‌چه…………………………………………………………………………………………………….41

4-3-تعداد برگ………………………………………………………………………………………………………42

4-4-طول برگ……………………………………………………………………………………………………….44

4-5-عرض برگ……………………………………………………………………………………………………..45

4-6 وزن تر اندام هوایی……………………………………………………………………………………………..47

4-7-وزن خشک اندام هوایی……………………………………………………………………………………..48

4-8-تعداد ریشه‌چه…………………………………………………………………………………………………..50

4-9-طول ریشه‌چه……………………………………………………………………………………………………52

4-10-وزن خشک ریشه‌چه………………………………………………………………………………………..53

4-11- محتوی نسبی آب برگ……………………………………………………………………………………55

4-12- نتایج حاصل از مطالعات مولکولی.…………………………………………………………………….57

4-12-1- تعیین کیفیت و کمیت RNA  استخراج شده……………………………………………………57

4-12-2- نتیجه حاصل ازqPCR تحت تیمار  دما برای تعیین دمای مناسب ژنNAC69-1………….57

4-12-3- نتیجه حاصل ازqPCR تحت تیمار  دما برای تعیین دمای مناسب ژنَActin …………………58

4-12-4 نتايج حاصل از Real time PCR و تجزيه واريانس…………………………………………..  58

فصل پنجم: منابع

5-منابع……………………………………………………………………………………………………………………65

 

 

 

 

 

فهرست جداول

جدول4- 1- تجزیه واریانس صفات مورد مطالعه………………………………………………………………….. 38

جدول4- 2- مقایسه میانگین صفات ارقام با استفاده از آزمون چند دامنه‌ای دانکن در سطح احتمال 5%……………………………………………………………………………………………………………………. 39

جدول4- 3- مقایسه میانگین صفات در سطوح آبياري مختلف با استفاده از آزمون چنددامنه‌ای دا‌نکن در سطح احتمال 5%………………………………………………………………………………………………………….40

جدول 4-4- جدول تجزيه واريانس صفات مولكولي …………………………………………………………….60

فهرست نمودارها

نمودار4-1-مقایسه طول ساقه‌چه رقم‌های شیراز روشن مهدوی………………………………………….41

نمودار 4-2 مقایسه سطوح تنش خشکی برای طول ساقه‌چه……………………………………………… 42

نمودار 4-3-تعداد برگ رقم‌های شیراز روشن مهدوی…………………………………………………….43  نمودار4-4 مقایسه سطوح تنش خشکی برای تعداد برگ…………………………………………………43

نمودار 4-5مقایسه طول  برگ رقم‌های شیراز روشن مهدوی…………………………………………….43

نمودار4-6 مقایسه سطوح تنش خشکی برای طول برگ…………………………………………………..45

نمودار4-7 مقایسه عرض برگ رقم‌های شیراز روشن مهدوی……………………………………………46

نمودار4-8 مقایسه سطوح تنش خشکی برای عرض برگ…………………………………………………46

نمودار 4-9 مقایسه وزن تر اندام هوایی رقم‌های شیراز روشن مهدوی…………………………………47

نمودار4-10 مقایسه سطوح تنش خشکی برای وزن تر اندام هوایی……………………………………..48

نمودار4-11مقایسه وزن خشک اندام هوایی رقم‌های شیراز روشن مهدوی…………………………..49

نمودار4 -12  مقایسه سطوح تنش خشکی برای وزن خشک اندام هوایی……………………………..49

نمودار4-13 مقایسه تعداد ریشه‌چه رقم‌های شیراز روشن مهدوی……………………………………….50

نمودار4-14مقایسه سطوح تنش خشکی برای تعداد ریشه‌چه……………………………………………..51

نمودار4-15 بررسی روند تغییرات  تعداد ریشه‌چه سه رقم روشن مهدوی و شیراز در سطوح مختلف خشکی………………………………………………………………………………………………………..51

نمودار4-16 مقایسه طول ریشه‌چه رقم‌های شیراز روشن مهدوی………………………………………..52

نمودار4-17 مقایسه سطوح تنش خشکی برای طول ریشه‌چه……………………………………………..53

نمودار4-18 مقایسه وزن خشک ریشه‌چه ریشه‌چه رقم‌های شیراز روشن مهدوی…………………..54

نمودار 4-19 مقایسه سطوح تنش خشکی برای وزن خشک ریشه‌چه…………………………………..54

نمودار4-20 مقایسه محتوی نسبی اب برگ رقم‌های شیراز روشن مهدوی……………………………55

نمودار4-21  مقایسه سطوح تنش خشکی برای محتوی نسبی اب برگ………………………………..56

نمودار4-22   بررسی روند تغییرات  محتوی نسبی اب برگ سه رقم روشن مهدوی و شیراز در سطوح مختلف خشکی………………………………………………………………………………………………56

فهرست اشكال

شکل4-1-  RNA استخراج شده از برگ گندم……………………………………………………………..57

شكل 4-2- نتیجه حاصل ازqPCR تحت تیمار  دما برای تعیین دمای مناسب ژنNAC69-1……….57

شكل4-3- نتیجه حاصل ازqPCR تحت تیمار  دما برای تعیین دمای مناسب ژنَActin ……………….58

شكل 4-4- نتيجه شماره 1 حاصل از Real time PCR …………………………………………………..58

شكل 4-5- نتيجه شماره 2 حاصل از Real time PCR …………………………………………………..59

شكل 4-6- نتيجه شماره 3 حاصل از Real time PCR …………………………………………………. 59

شكل 4-7- نتيجه شماره 4 حاصل از Real time PCR …………………………………………………..60

قبلا حساب کاربری ایجاد کرده اید؟
گذرواژه خود را فراموش کرده اید؟
Loading...
enemad-logo