%46تخفیف

مطالعه الگوی بیان ژن در گیاه نسبتا مقاوم سلطان مرکبات (Citrus grandis) آلوده به باکتری عامل میوه سبز مرکبات (Candidatus Liberibacter asiaticus)  در مرحله بروز علائم

تعداد92 صفحه در فایل word

مطالعه الگوی بیان ژن در گیاه نسبتا مقاوم سلطان مرکبات
(Citrus grandis)
آلوده به باکتری عامل میوه سبز مرکبات (Candidatus Liberibacter asiaticus)  در مرحله بروز علائم

كارشناسي ارشد بیوتکنولوژی

چکیده

بیماری ناشی از باکتری­های سخت کشت Candidatus Liberobacter asiaticus و Candidatus L. africanus در مرکبات که نشانه‌های آن موزائیک در برگ­ها، زردی شاخه‌ها، باقی ماندن لکه‌های سبز روی میوه و زوال درختان است، میوه سبز مرکبات نامیده می شود. این بیماری از جنوب شرقی آسیا، شبه قاره هند، آفریقای جنوبی و شبه جزیره عربستان گزارش شده است.  این بیماری در سال 1386 از جنوب ایران گزارش گردید. در حال حاضر استراتژی کارآمد برای کنترل این بیماری استفاده از گیاهان مقاوم به این پاتوژن­ها می­باشد. در اين بررسي برهمکنش میزبان- پاتوژن در گیاه نسبتا مقاوم سلطان مرکبات مایه زنی شده با عامل بیماری میوه سبز مرکبات  با استفاده از روش cDNA-AFLP مورد مطالعه قرار گرفت. مطالعه موجود بر روی چهار گیاه سلطان مرکبات که از طریق پیوند با عامل بیماری میوه سبز مرکبات مایه­زنی شده بود و دو گیاه سالم به عنوان شاهد، 4 ماه پس از آلودگی ، یعنی زمانیکه پاتوژن درگیاهان حساس از طریق روش­های مولکولی قابل ردیابی است، انجام شد. ترکیب آنزیمی MseI/EcoRI در مرحله برش آنزیمی و 10 ترکیب پرایمری برای تکثیر cDNA های هضم شده با آنزیم­های مذکور، استفاده شد.  در مجموع 25 قطعه از نسخه های ژنی موجود در برگ گیاهان سلطان مرکبات مورد مطالعه به دست آمد.  توالی 16 قطعه شبیه به نسخه های میزبان بود و 5 قطعه شباهت به توالی DNA باکتری داشت و 4 قطعه دیگر با توالی­های ثبت شده در بانک­های اطلاعاتی شباهتی نداشتند. بسیاری از ژن­های سلطان مرکبات که بررسی شدند در طی آلودگی بیانشان افزایش ­یافت مانند ژن­های دخیل در سنتز chorismate، glucosyltransferase، NADH dehydrogenase ، glycoside hydrolase، phosphoglycerate mutase ، bisphosphoglycerate، auxin efflux carrier-like ، auxin:hydrogen symporter، Vps51/Vps67 family (components of vesicular transporter)، methyltransferase. افزایش بیان این ژن­ها در ارتباط با واکنش­های مقاومت القایی در گیاه می باشد. بر عکس ژن­هایی که بیان آن­ها در سلول­های مایه­زنی شده  کاهش یافته بود، متعلق به پروتئین­های باکتری پاتوژن بود. این مطالعه اولین بررسی بر روی تغییرات بیان ژنهای سلطان مرکبات و Candidatus Leiberibacter asiaticus  است که در طی بیماری اتفاق می افتد. این نتایج می تواند به پیشرفت اطلاعات مولکولی مربوط به روند بیماری و شناسایی ژن­های دخیل در آن کمک نماید.

فهرست مطالب

چکیده 11

فصل اول: بررسی منابع 14

1- 1- تاریخچه و اهمیت مرکبات 15

1-2-گیاه شناسی 16

1-2-1 -گونه پوملو ( Citrus grandis L.Osb. ) 16

1-3- بیماری­های مرکبات 17

1-4 – تاریخچه بیماری میوه سبز مرکبات 17

1-5 –  عامل بيماري 18

1-6- انتقال 20

1-7 – واکنش ارقام مختلف به بیماری 22

1-8-  علائم بیماری 23

1-9 – وضعیت بیماری میوه سبز مرکبات در ایران 25

1-10- اهمیت اقتصادی بیماری 26

1-11 – دامنه میزبانی 26

1-12- ژنوم پاتوژن 27

1-13-  ردیابی پاتوژن 27

1-13 -1- بررسي­هاي سرولوژيكي 27

1-13 -2- ردیابی با میکروسکوپ الکترونی 30

1-13 -3- ردیابی مولکولی 30

هشت

1-14 – چرخه زندگی 30

1-15-  راه­های کنترل بیماری 31

1-16- برهمکنش پاتوژن ومیزبان 31

1-16-1- مقاومت در میزبان و بیماری­زایی در پاتوژن 35

1-17- روش­های بررسی الگوی بیان ژن 36

1-17-1 – cDNA-AFLP 37

فصل دوم: مواد وروش­ها .. ……………………………………………………………………………………………………………….  .. 39

2-1- تهيه نهال سلطان مرکبات 40

2-2-  تهيه پيوندك آلوده به بيماري میوه سبز مرکبات و پیوند نمونه های سالم با پیوندک آلوده 41

2-3-  نمونه برداری از گیاهان سالم و آلوده جهت انجام cDNA-AFLP 41

2-4 – جداسازي RNA كل از گياه 41

2-5 –  سنتز cDNA 43

2-5-1 – سنتز رشته اول cDNA 43

2-5-2 – سنتز رشته دوم cDNA 43

2-6 – روش cDNA-AFLP 44

2-6-1- هضم آنزیمی cDNA 44

2-6-2 –  AFLP 44

2-7 – الكتروفورزفراورده­هایcDNA-AFLP  درژل پلی آکريل‌آميد 47

2-8 – آنالیزتوالی‌ ها 48

فصل سوم: نتایج وبحث 49

3-1 – مایه زنی نهال­های سلطان مرکبات 49

نه

3-2-  جداسازي RNA كل از گياه 50

3-3 cDNA-AFLP- 52

3-4 –  بحث 58

3-4-1- رونوشت  مشابه به ژن ناقل های اکسینی 59

3-4-2 – رونوشت شبیه بهchorismate synthase 61

3-4-3- رونوشت شبیه به ژن NADH dehydrogenase 64

3-4-4 – رونوشت  شبیه به ژن UDP-Glucosyltransferase 65

3-4-5- رونوشت  شبیه به ATP synthase 67

3-4-6 – رونوشت  شبیه به glycoside hydrolase 68

3-4-7- رونوشت­های شبیه به ژن های ریبوزومی 69

3-4-8- رونوشت  شبیه به methyltransferase 70

3-4-9- رونوشت  مربوط به ژن های دخیل در سنتز Phosphoglycerate mutase 71

3-4-10- رونوشت­های مربوط به پاتوژن 72

3-4-11- رونوشت  شبیه به پروتئین BI-1 73

3-4-12-  رونوشت  شبیه به Vps51/Vps67 family 75

3-4-13- رونوشت­های با عملکرد نامعلوم 76

3-5- نتیجه گیری 76

3-6- پیشنهادات 77

منابع 78

ده

فهرست شکل­ها

شكل 1-1- اندام­هاي شبه باكتريائي در آوندهاي آبكش درخت پرتقال 21

شکل 1-2-  برگ های Citrus grandis آلوده به بیماری میوه سبز مرکبات 24

شکل 1-3-  برگ های Citrus grandis آلوده به بیماری میوه سبز مرکبات در مرحله بروز علائم 24

شکل 1-4-  برآمدگی ورنگ پریدگی برگ ها ی Citrus grandis آلوده به بیماری میوه سبز مرکبات 25

شکل 3-2 – الگوی الکتروفورز نمونه­های RNA استخراج شده از سلطان مرکبات بر روی ژل (2/1%)آگارز 48

شکل 3-4 – الگوی الکتروفورزی cDNA سنتز شده سلطان مرکبات بر روی ژل (2/1%)آگارز 50

شکل 3- 5- نتایج حاصل از الکتروفورزcDNA-AFLP با ترکیب پرایمری ETAT-MCT 51

شکل 3-6- نتایج حاصل از الکتروفورزcDNA-AFLP با ترکیب پرایمری ETAT-MCAG 52

.65 ………………………………………………………………………………………………………………………………………… shikimateمسیر شکل 3-7-

یازده

فهرست جدول ونمودارها

جدول 2-1- توالي رشته رفت و برگشت آداپتورها 43

جدول 2-2- توالي آغازگرهاي E و M 43

جدول2-1- توالي جفت آغازگرهاي واكنش انتخابي 43

جدول3-1-  نتایج حاصل از نانودراپ جهت بررسی کمی نمونه های RNA 49

جدول 3-2-  همولوژی TDFs با توالی­های شناسایی شده در پایگاه داده NCBI 53

نمودار 3-1- از تعداد 25 قطعه ارسال شده برای توالی یابی 56

قبلا حساب کاربری ایجاد کرده اید؟
گذرواژه خود را فراموش کرده اید؟
Loading...
enemad-logo