مطالعهی ساختار، فعالیت چاپرونی و آلرژیزایی کازئینبتای قندی و غیر قندی

عنوان                                         صفحه

خلاصه­ی نتایج ……………………………. 90

 نتیجه­گیری نهایی………………………… 91

فهرست منابع و مآخذ………………………. 92

فهرست جداول

عنوان                                         صفحه

جدول1-1- ترکیبات سازنده شیر در جانوران مختلف بر حسب درصد 4

جدول1-2- برخی ویژگی­های پروتئین­های آب پنیر شیرگاو 6

جدول1-3- برخی از ویژگی­های کازئین­های شیرگاو….. 7

جدول3-1- رسم منحنی استاندار برادفورد با استفاده از کازئین­بتا

(1 میلی گرم بر میلی لیتر) به عنوان پروتئین استاندارد 29

جدول 3-2- مواد و مقادیر مورد نیاز برای تهیه 500 میلی لیتر بافر تانک…………………………………… 32

جدول3-3- مواد و مقادیر مورد نیاز برای تهیه 25 میلی لیتر بافر نمونه X2…………………………………….. 32

جدول4-1-1- محتوی ساختارهای دوم نمونه­های کازئین­بتای قندی و غیرقندی

 بر حسب درصد……………………………. 59

فهرست اشکال

عنوان                                         صفحه

شکل1-1-نمایی از ترکیبات موجود در شیر……….. 3

شکل1-2- پروتئین­های تشکیل دهنده شیرگاو………. 5

شکل1-3- نمایی از چگونه­گی تشکیل میسل کازئین شیر. 8

شکل 1-4- جهش جایگزینی پرولین67 وتبدیل آن به هیستیدین در کازئین­بتا A1……………………………………… 9

شکل1-5- نمایی از سیستم رنین- آنژیوتنسین به عنوان سیستم

مهم تنظیم کننده فشار خون…………………. 13

شکل1-6-نمایی از انواع اپی­توپ­های خطی و فضایی پروتئینی 17

شکل1-7- علائم حساسیت به شیرگاو…………….. 17

شکل1-8- آزمون خراش پوستی برای تعیین میزان حساسیت فرد به ماده­ی آلرژی­زا………………………………… 19

شکل 3-1- نمونه­ایی از نمودار استاندار برادفورد. 30

شکل 3-2- نمایی از ساختارشیمیایی ترکیب OPA….. 34

شکل 3-3- نمایی ازساختار شیمیایی فلورسامین….. 35

شکل 3-4- نمایی از ساختار شیمیایی ترکیب ANS…. 36

شکل 3-5- تولید ABTS رادیکال در حضور پتاسیم پرسولفات  37

شکل 3-6- نمونه­ایی از نمودار استاندارد ترولوکس. 46

شکل4-1-1- نمایی از SDS-PAGE احیایی (12درصد) مراحل خالص­سازی پروتئین

کازئین­بتا………………………………. 51

عنوان                                         صفحه

شکل4-1-2- نمایی از SDS-PAGE احیایی (12درصد) فرآیند خالص­سازی

پروتئین هموگلوبین A انسانی……………….. 52

شکل4-1-3- نتایج مطالعه­ی قندی شدن غیرآنزیمی پروتئین کازئین­بتا

با استفاده از آزمون OPA………………….. 53

شکل4-1-4- نتایج حاصل از قندی شدن غیرآنزیمی کازئین­بتا با استفاده

از آزمون فلورسامین………………………. 54

شکل4-1-5- نمای از SDS-PAGE احیایی (12درصد) که به منظور تایید

 قندی شدن پروتئین در این مطالعه استفاده شد…. 55

شکل 4-1-6- طیف نشری فلورسانس ذاتی کازئین­بتا­ی قندی و غیرقندی  56

شکل4-1-7- نمایی از نشر فلورسانس عارضی کازئین­های بتا ی قندی و غیرقندی

 که با استفاده از نشانگر فلورسانس ANS بررسی شد 57

شکل4-1-8- طیف دور فرابنفش (Far-Uv CD) کازئین­بتای قندی و غیرقندی 59

شکل4-1-9- مطالعه­ی فعالیت چاپرونی کازئین­های بتای قندی و غیرقندی

 با استفاده از هورمون انسولین به عنوان پروتئین هدف  61

شکل4-1-10- مطالعه­ی فعالیت چاپرونی کازئین­های بتای قندی و غیرقندی

 با استفاده از هموگلوبین به عنوان پروتئین هدف. 62

شکل4-1-11- نمایی از SDS-PAGE احیایی (15درصد) هضم کازئین­های بتای

 قندی و غیرقندی با آنزیم تریپسن…………… 63

شکل4-1-12- نمایی از SDS-PAGE احیایی (15درصد) هضم کازئین­های بتای

قندیو غیرقندی با آنزیم کیموتریپسن…………. 64

شکل4-1-13- مطالعه خاصیت آنتی­اکسیدان کازئین­بتای قندی و غیرقندی

 و پپتیدهای حاصل از هضم این پروتئین به وسیله­ی آنزیم تریپسین  66

عنوان                                         صفحه

شکل4-1-14- این شکل بیانگر ظرفیت آنتی­اکسیدانی معادل ترلوکس (TEAC)

کازئین­بتای قندی و غیرقندی و پپتیدهای حاصل از هضم 2 و 4 ساعته­ی آن­ها

 با آنزیم تریپسین می­باشد…………………. 67

شکل4-1-15- مطالعه خاصیت آنتی­اکسیدان کازئین­بتای قندی و غیرقندی

و پپتیدهای حاصل از هضم این پروتئین به وسیله­ی آنزیم کیموتریپسین………………………………………. 69

شکل4-1-16- این شکل بیانگر ظرفیت آنتی­اکسیدانی معادل ترلوکس (TEAC)

کازئین­بتای قندی و غیرقندی و پپتیدهای حاصل از هضم 2 و 4 ساعته­ی آن­ها

با آنزیم کیموتریپسین می­باشد………………. 70

شکل4-1-17- نتایج آزمون مهار آنزیم ACE به وسیله­ی کازئین­های بتای

 قندی و غیرقندی و پپتیدهای حاصل از هضم آن­ها به وسیله­ی

دو آنزیم تریپسین و کیموتریپسین……………. 71

شکل4-1-18- نتایج بررسی میزان آلرژی­زایی کازئین­بتای قندی و غیرقندی

و پپتیدهای حاصل از هضم 4 ساعته­ی آن­ها به وسیله­ی دو آنزیم تریپسین

 و کیموتریپسین………………………….. 74

شکل4-1-19- مقایسه­ی میزان آلرژی­زایی کازئین­های بتای قندی و غیرقندی

 با پپتیدهای حاصل از هضم آنزیمی آن­ها با دو آنزیم تریپسین و کیموتریپسین…………………………….. 75

شکل4-2-1- نمای از SDS-PAGE احیایی (12درصد) که به منظور تایید

قندی شدن غیرآنزیمی پروتئین در این مطالعه استفاده شد 78

شکل4-2-2- نتایج مطالعه­ی قندی شدن غیرآنزیمی پروتئین کازئین­بتا با استفاده

از آزمون OPA……………………………. 79

شکل4-2-3- ژل SDS-PAGE احیایی (15درصد) هضم کازئین­های قندی

 و غیرقندی شیرگاو به وسیله­ی آنزیم تریپسین….. 80

عنوان                                         صفحه

شکل4-2-4- نمایی از SDS-PAGE احیایی (15درصد) هضم کازئین­های قندی

 و غیرقندی شیرگاو با آنزیم کیموتریپسن……… 81

شکل4-2-5- مطالعه خاصیت آنتی­اکسیدان کازئین­های قندی و غیرقندی شیرگاو

 و پپتیدهای حاصل از هضم این پروتئین به وسیله­ی آنزیم تریپسین  82

شکل4-2-6- مطالعه خاصیت آنتی­اکسیدان کازئین­های قندی و غیرقندی شیرگاو

 و پپتیدهای حاصل از هضم این پروتئین به وسیله­ی آنزیم کیموتریپسین………………………………………. 83

شکل 4-2-7- در این شکل معادل ترولوکس (TEAC) کازئین قندی و غیرقندی شیرگاو

 و پپتیدهای حاصل از هضم 2 و4 ساعته با آنزیم تریپسین آمده است 84

شکل 4-2-8- در این شکل معادل ترولوکس (TEAC) کازئین­های قندی و غیرقندی

 شیرگاو و پپتیدهای حاصل از هضم 2 و4 ساعته با آنزیم کیموتریپسین آمده است……………………………….. 85

شکل4-2-9- نتایج آزمون سنجش آلرژی کازئین­های قندی و غیرقندی شیرگاو

 و پپتیدهای حاصل از هضم آنزیمی آن­ها……….. 87

شکل4-2-10- مقایسه­ی میزان آلرژی­زایی کازئین­های قندی و غیرقندی شیرگاو

با پپتید­های حاصل از هضم آنزیمی آن­ها با دو آنزیم تریپسین و کیموتریپسین…………………………….. 88

جدول اختصارات

نام کامل	نام اختصاری
Angiotensin Converting Enzyme	ACE
2,2-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid)	ABTS
8- aniline-1-naphthalenesulfonic acid	ANS
Ammunium persulfate	APS
Bovine serum albumin	BSA
Circular dichroism	CD
Ethylenediaminetetraacetic acid	EDTA
N-3-2-furylacrylolyl-phenylalanylglycylglycin	FAPGG
Intrinsically unstructured protein	IUP
O- phthaladehyde	OPA
Trolox Equivalent Antioxidant Capacity	TEAC