عنوان جداسازیDNA آپتامر/ آپتامرها از کتابخانه آپتامري با استفاده از پروسه ي Cell.SELEX جهت شناسایی نیسریا مننژیتیدیس

تعداد155 صفحه در فایل word

هموفیلوس آنفلوانزا سروتیپ b یکی از عوامل ایجاد کننده سندروم مننژیت حاد باکتریایی است که شامل عفونت باکتریایی و التهاب سیستم عصبی مرکزی است. این سندروم می­تواند طی چند ساعت تا چند روز موجب مرگ بیمار شود. طبق مطالعات آماری میزان مرگ ومیر ناشی از هموفیلوس آنفلوانزا سروتیپ b  % 6-3 از مبتلایان می­باشد. در سال­های اخیر حس­گرهای زیستی به عنوان روشی حساس ،کم هزینه و سریع به طور گسترده برای شناسایی میکروارگانیسم ها استفاده می­شود. یکی از روش های معتبر برای توسعه حس­گرها، آپتامرها می­باشند. آپتامرها نوعی توالی کوتاه اولیگونوکلئوتیدی) DNA یا  RNA)تک رشته­ای هستند که با روش تکامل سیستماتیک کل سلول از لیگاندها به وسیله غنی سازی نمایی، توالی­هایی با تمایل اتصالی بالابه مولکول هدف انتخاب می­شوند.

در این مطالعه از روش انتخاب سلولی برای دست یافتن به آپتامر/آپتامرهایی با تمایل بالا به هموفیلوس آنفولانزای سروتیپb استفاده شده است. بدین منظور آپتامرها از طریق آنزیم لامبدا اگزونوکلئاز تک رشته و سپس آماده فرآیند انتخاب شدند. سپس توالی های غیر اتصالی شسته شده و توالی های اتصالی از طریق مواجهه با سایر باکتری­های مسبب مننژیت محدود گشتند. این عمل موجب غنی سازی توالی­های اتصالی به هموفیلوس آنفلوانزای زیرگروه b گردید. توالی های انتخاب شده از طریق PCR تکثیر و برای انتخاب بعدی آماده شدند. با کاهش زمان انکوباسیون با سلول هدف و افزایش حجم شستشو شرایط انتخاب سخت تر شد.

بعد از 7 دوره انتخاب میزان تمایل اتصال توالی های آپتامری به باکتری هموفیلوس آنفلوانزا سروتیپb با روش فلوسایتومتری مورد بررسی قرار گرفت. آپتامرهای به دست آمده با بیشترین تمایل اتصال کلون شدند و از میان 68 کلون به دست آمده 4 آپتامر تعیین توالی شدند. میزان ثابت تفکیک (Kd) برای آپتامرهای کلون های A45 و B11 با بالاترین تمایل، به میزان 47.10 و 28.46پیکومول محاسبه گردید. قابل توجه است که آپتامرهای این دو کلون هیچ گونه تمایلی نسبت به سایر باکتری­ها و مخصوصا نسبت به 7 باکتری مسبب مننژیت نداشتند. تمایل متمایز این آپتامرها فقط نسبت به گونه­های هموفیلوس آنفلوانزا  دارند.

با توجه به داده های به دست آمده در این تحقیق به نظر می­رسد توالی­های آپتامری به دست آمده می­تواند در تشخیص سریع و زود هنگام بیماری هموفیلوس آنفلوانزا  نقش مؤثری ایفا نمایند.

واژه­های کلیدی: آپتامر، انتخاب سلولی، لامبدا اگزونوکلئاز، مننژیت، هموفیلوس آنفولانزا