شناسایی وکلون کردن اپی¬توپ¬های خطی آنتی¬ژن P14-3-3 انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس در وکتور pEGFP-N1 و بررسی بیان آن در سلول¬های CHO

تعداد91صفحه در فایل word

کیست هیداتیک یا کیست کبدی یکی از بیماری­های مشترک بین انسان و دام است که در اثر آلودگی با لارو انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس (Echinococcous granulosus) ایجاد می­شود و در اکثر نواحی معتدله جهان مثل کشور ایران که صنعت دامپروری رایج است درحال افزایش می­باشد. با توجه به عدم وجود درمان قطعی برای این بیماری ،قطعا پیش­گیری از شیوع این بیماری امری لازم و حیاتی بوده که از طریق بهترین راه پیش­گیری یعنی واکسیناسیون انجام خواهد شد هر چند واکسن نوترکیب EG95 از سال 1995 توانسته در گوسفندانی که با گونه G1 آلوده شده­اند ایمنی در حد 95 درصد را ایجاد کند اما با توجه به تنوع موجود در سروتیپ­های این انگل(G1-G10) و نقش مهم ایمنی سلولی Th1 در درمان و کنترل آن و با در نظر گرفتن این نکته که این نوع واکسن­ها هم ایمنی سلولی و هم همورال را تحریک می­کنند و ایمنی همورال سبب تضعیف Th1 و کاهش ترشح اینترفرون گاما می­شود کارآمد نبوده و امروزه نسل جدیدی از واکسن­ها تحت عنوان واکسن­های ژنی با توجه به توانایی بالای آنها در تحریک ایمنی سلولی در مبارزه با بیماریهای انگلی بیشتر مطرح می­باشد. لذا در این پروژه به منظور طراحی و ساخت یک DNA واکسن موثر علیه کیست هیداتیک با حداقل ساختار ممکن و حداکثر قدرت تحریک ایمنی از توالی کدکننده اپی­توپ­های خطی آنتی­ژن P14-3-3 که ایمونوژن­تر می­باشد و در اکثر مراحل زندگی انگل و سروتیپ­های متعدد با ساختار حفاظت­شده وجود داشته و واکسن نوترکیب آن نیز پاسخ ایمنی چشمگیری را علیه کیست هیداتیک نشان داده، جهت کلونینگ در وکتور بیانی pEGFP-N1 به جای توالی کدکننده آنتی­ژن موردنظر استفاده شد؛ که بررسی بیان آن در سلول­های یوکاریوتی  CHOحاکی از بیان پروتئین موردنظر به همراه پروتئین سبز فلورسنت در این سلول­ها بوده ونتایج امیدبخشی را جهت استفاده از این سازه­ی نوترکیب برای واکسیناسیون حیوانات مدل در آزمایشگاه و بررسی پاسخ ایمنی در آن­ها نشان می­دهد.

کلمات کلیدی: کیست هیداتیک، P14-3-3، DNA واکسن و کلونینگ