%53تخفیف

شناسایی مارکرهای مولکولی آپوپتوز Bcl2 وmiR92a در خون محیطی بیماران مبتلا به سرطان پستان

تعداد 108صفحه در فایل word

چکیده

مقدمه: سرطان پستان يكي از شايع ترين انواع سرطان است و جزء 5 سرطان شايع جهان مي باشد. همچنين در بين زنان ايراني رتبه دوم را دارد, امروزه غربالگری و درمان سرطان پستان با روشهای مولکولی لازم و ضروری است. در این مطالعه بیان بیومارکرهای bcl2 (B cell leukemia/lymphoma) و miR92a در خون بیماران مبتلا به سرطان پستان تحت بررسی و آنالیز قرار گرفت.پروتئین bcl2 یک پروتئین ضد آپوپتوز از خانواده ی bcl2 می باشد.miR92a  جزوه میکرو RNA ها می باشند. میکرو RNA ها, RNA هاى غيركدكننده  کوتاه  و تک رشته ای هستند که 22 نوکلئوتید طول دارند و در بیان ژن و همچنین سرطان نقش تنظیمی دارند. مواد و روشها: 40 نمونه خون بیمار مبتلا به سرطان پستان که از لحاظ پاتولوژی شناسایی شده بودند و 40 نمونه خون سالم به عنوان کنترل مورد بررسی قرار گرفتند. ژن bcl2 با روش RT-PCR و miR92a با روش real time RT-PCR بررسی شدند.در این آزمایش ارتباط بین بیان bcl2 و miR92a با خصوصیات پاتولوژیکی بیماران مانند حضور گیرنده های ER,PR,Her2 و p53 و وضعیت گره های لنفاوی مورد بررسی قرار گرفت. نتایج: افزایش بیان bcl2 ارتباط چشمگیری با ER+ (p=0.033) وضعیت گره های لنفاوی دارد(p=0.014) و با p53  و گیرنده ی Her2 و گیرنده ی PR+ رابطه ی معناداری ندارد. کاهش بیان mir92a با ER+ و افزایش بیان bcl2 رابطه ی معناداری داشت. (p=0.046 وp=0.05) بحث: یافته های ما نشان می دهد که miR92a می تواند در تعیین نوع درمان و bcl2 به عنوان یک بیومارکر پیش آگهی دهنده و تشخیصی ارزش زیادی در سرطان پستان داشته باشد.

کلمات کلیدی : mir92a , bcl2 , سرطان پستان

فهرست

عنوان                                                                                                                      صفحه

چکیده 1

فصل اول: مقدمه

1-1- سرطان. 3

1-1-2- تقسيم بندي سرطان. 4

1-2- سرطان پستان. 5

1-2-1- اپیدمیولوژی و آمار سرطان پستان. 6

1-3- رويان شناسي پستان. 7

1-3-1- آناتومي پستان. 9

1-3-2- آناتومي ميکروسکوپي پستان بالغ.. 9

1-3-3- خون رساني.. 10

1-3-4- عروق لنفاتيک…. 10

1-3-5- جريان لنف…. 10

1-4- مرحله بندی سرطان پستان. 11

1-4-1- مرحله صفر (کارسینومای درجا) 11

1-4-1-1- کارسینوم پستان نوع مجرایی درجا (DCIS ) 111

1-4-1-2- کارسینوم پستان نوع لوبولار درجا (LCIS ) 12

1-4-2- مرحله یک…. 12

1-4-2-1- مرحله یک  A… 12

1-4-2-2- مرحله یک  B.. 12

1-4-3- مرحله دو. 12

1-4-3-1- مرحله دو A… 13

1-4-3-2- مرحله دو B.. 13

1-4-4- مرحله سه. 1313

1-4-4-1- مرحله سه  A… 13

1-4-4-2- مرحله سهB.. 133

1-4-4-3- مرحله سه  C.. 14

1-4-5- مرحله چهار. 144

1-4-6- کارسینوم مجاری تهاجمی(IDC) 15

1-4-7- کارسینوم غده ای مهاجم (ILC) 15

1-4-8- کارسینوم پستان التهابی(IBC) 155

1-4-9- سرطان پستان عود کرده 155

1-5- عوامل خطرساز سرطان پستان. 16

1-6- شناسایی و تشخیص سرطان پستان. 166

1-6-1- شرح حال و معاینه بالینی.. 17

1-6-2- سونوگرافی.. 177

1-6-3- ماموگرافی.. 177

1-6-4- ام آرآی ( MRI) 188

1-6-5- آزمایش خون. 188

1-6-6- بیوپسی )نمونه برداری بافتی) 19

1-7-انواع روش های درمانی برای مبتلایان به سرطان پستان. 19

1-7-1-جراحی.. 19

1-7-2-رادیوتراپی.. 19

1-7-3- شیمی درمانی.. 19

1-7-4- هورمون درمانی.. 20

1-7-5- درمان هدفمند. 20

1-8- عوامل موثر بر پیش آگهی)احتمال بهبود( و انتخاب درمان. 20

1-8-1- وضعیت گره های لنفاوی.. 21

1-8-2- آزمایش بررسی گیرنده استروژن و پروژسترون. 21

1-8-3- آزمایش بررسی گیرنده   HER2/neu. 22

1-9- آپوپتوز 23

1-10- پروتئین های خانواده bcl2. 23

1-11-MicroRNA… 24

1-11-1- بيوژنز miRNA ها و نحوه مهار ترجمه. 25

1-11-2- شناسايى مولكول هاي هدف  miRNA… 26

1-11-3- miRNA و سرطان. 27

1-11-4- miRNA ابزارى براى شناسايى وتشخيص سرطان. 28

1-11-5- miRNA و درمان سرطان. 28

1-12- miR92a. 29

فصل دوم: تاریخچه

2-1-miR92a. 33

2-2- bcl2. 34

فصل سوم: مواد و روش ها

3-1- نمونه گيري.. 38

3-2- مواد، کيت ها و دستگاه هاي مورد نياز. 39

3-2-1- مواد و کیت ها 40

3-2-2- دستگاه هاي مورد نياز. 40

3-3- واکنش زنجیره پلیمراز ( PCR) 41

3-4- واکنش زنجيره پليمراز نسخه برداری معکوس(RT-PCR) 42

3-4-1- استخراجRNA… 42

3-4-2- مواد و وسایل مورد نیاز جهت استخراج RNA ی تام از خون. 42

3-4-3- روش انجام استخراج RNA42

3-4-3-1- همگن کردن. 43

3-4-3-2- فاز جداسازي.. 43

3-4-3-3- رسوب RNA 43

3-4-3-4- شستشوی RNA… 43

3-4-3-5- دوباره حل کردن RNA… 44

3-4-4- تعیین مقدار و بررسی کیفیت  RNAاستخراج شده 44

3-4-5- DNA ی مکمل (cDNA) 44

3-4-5-1- مواد و وسایل لازم برای ساخت DNA ی مکمل.. 44

3-4-5-2- روش کار ساخت cDNA… 45

3-4-6- RT-PCR.. 45

3-4-6-1- مواد و وسایل لازم. 46

3-4-6-2- روش انجام RT-PCR با پرايمر  GAPDH… 46

3-4-7- واکنش RT-PCR با پرایمر ژن bcl2. 47

3-5- الکتروفورز. 48

3-5-1-تهيه ژل آگارز. 48

3-6-Real-time PCR.. 48

3-6-1- استخراج RNA… 51

3-6-2- مواد و وسایل لازم جهت استخراج RNA… 51

3-6-3- روش استخراج RNA ی تام. 51

3-6-3-1- گام اول: پروتئین زدایی و هموژنیزاسیون. 51

3-6-3-2- گام دوم: جداسازی فازها 52

3-6-3-3- گام سوم: رسوبدهی RNA.. 52

3-6-3-4- گام چهارم: شستشو و محلول سازی RNA… 52

3-6-4- حذف آلودگی احتمالی DNA (تیمار با DNAse) 52

3-6-4-1- مواد لازم برای تیمار RNA با DNAse I. 53

3-6-4-2- روش کار. 53

3-7- سنجش بیان microRNA… 53

3-7-1- افزودن دم پلی A توسط آنزیم PolyA polymerase. 54

3-7-2- سنتز رشته ی اول cDNA… 54

3-7-3- روش کار Real-Time PCR.. 55

3-7-4-تایید نهایی محصولات real-time PCR.. 56

3-8- روش Ct مقایسه ای (∆∆Ct) 56

3-9- کارایی پرایمر. 57

فصل چهارم: نتایج و بحث

4-1- نتایج حاصل از RT-PCR ژن bcl2 در خون. 60

4-1-1- نتايج حاصل از ژل الکتروفورز محصول RT-PCR ژن bcl2. 60

4-2- نتایج حاصل از Real time PCR برای ژن miR92a. 60

4-2-1- تعیین نسبت ژنی در نمونه های کنترل و آزمایش…. 61

4-2-1-1- منحنی تکثیر. 62

4-2-1-2- منحنی ذوب… 62

4-2-2- محاسبه Ct مقایسه ای (∆∆Ct) 64

4-3- آزمون  Tنمونه های مستقل.. 65

4-3-1- بررسي حجم نمونه به تفکيک سن.. 66

4-3-2- بررسي نمونه ها به تفکيک نوع تومور. 66

4-3-3- بررسي نمونه ها به تفکيک مراحل سرطان پستان. 67

4-3-4- بررسی نمونه ها به تفکیک Stage سرطان. 67

4-3-5- بررسی نمونه ها به تفکیک سایز تومور. 68

4-3-6- بررسی فراوانی گیرنده های ER و PRو HER2/nue. 68

4-3-7- بررسی فراوانی p53 و node position. 69

4-4- نتايج حاصل از SPSS بیومارکر bcl2. 69

4-4-1- آیا ارتباط معنی داری میان بیانbcl2  درنمونه خون بیماران مبتلا به سرطان پستان نسبت به میانگین نوع تومور وجود دارد؟  69

4-4-2- آيا ارتباط معني داري ميان بيان بیومارکر bcl2 در نمونه خون بیماران مبتلا به سرطان پستان نسبت به میانگین سن بیماران وجود دارد؟. 70

4-4-3- آیا ارتباط معنی داری میان بیان بیومارکر bcl2 در نمونه خون بیماران مبتلا به سرطان پستان نسبت به وضعیت غدد لنفاوی( Nod position )وجود دارد؟. 71

4-4-4- آيا ارتباط معني داري ميان بيان بیومارکر bcl2 و در نمونه خون بیماران مبتلا به سرطان پستان نسبت به+ P53بیماران وجود دارد؟  72

4-4-5- آيا ارتباط معني داري ميان بيان بیومارکر bcl2 و در نمونه خون بیماران مبتلا به سرطان پستان نسبت به Her2و+, PR+ PRبیماران وجود دارد؟. 73

4-5- نتايج حاصل از SPSS بیومارکر miR92a. 73

4-5-1-آیا بین بیان مثبت و بیان منفی(Her2/+ و Her2/- )متغیر مستقل HER2، با لحاظ سطوح افزایش miR92a رابطه معناداری وجود دارد؟. 74

4-5-2- آیا بین بیان و عدم بیان (PR- و PR+ ) متغیر مستقل PR، از لحاظ سطوح افزایش miR92a رابطه معناداری وجود دارد؟  75

4-5-3- آیا بین بیان و عدم بیان (P53- و P53+ ) متغیر مستقل P53، از لحاظ سطوح افزایش miR92a رابطه معناداری وجود دارد؟  76

4-5-4- آیا بین بیان و عدم بیان (ER+ و (ER- متغیر مستقل ER، از لحاظ سطوح افزایش miR92a رابطه معناداری وجود دارد؟  77

4-5-5- آیا بین بیان و عدم بیان (N+ و (N- متغیر مستقل Nod position، از لحاظ سطوح افزایش miR92a رابطه معناداری وجود دارد؟  78

4-5-6- آیا بین بیان و عدم بیان bcl2 , متغیر مستقل bcl2، از لحاظ سطوح افزایش miR92a رابطه معناداری وجود دارد؟  79

4-5-7- سن آیا بین سن در دو گروه 30-45 و 45-80 , متغیر مستقل سن، از لحاظ سطوح افزایش miR92a رابطه معناداری وجود دارد؟  80

فصل پنجم: نتیجه گیری

5-1- بحث… 82

5-2- نتیجه گیری.. 87

5-3- پیشنهادات… 88

منابع و ماخذ. 90

خلاصه انگلیسی.. 97

فهرست جدول ها

عنوان جدول                                                                                                          صفحه

جدول4-1- سایز ژن bcl2 و کنترل داخلی GAPDH… 600

جدول 4-2- سایز محصول PCR ژنهای 5sr و miR92a. 611

جدول 4-3- فراوانی انواع تومور در پاتولوژی بیماران مورد مطالعه. 69

جدول 4-4- جدول t-test و مقایسه  bcl2با میانگین سن بیماران. 700

جدول 4-5- جدول t-test و مقایسه bcl2 با وضعیت گره های لنفاوی بیماران. 711

جدول 4-6- جدول t-test و مقایسه بیان bcl2 با میانگین حضور پروتئین p53. 711

جدول 4-7- جدول t-test و مقایسه بیان bcl2 با ER+,PR+, Her2 بیماران. 722

جدول 4-8- دسته بندی کل اطلاعات آماری به دست آمده ژن bcl2. 722

جدول 4-9- فرکانس و میانگین Her2/neu+ و- Her2/neu. 733

جدول 4-10- نتایج آزمون t-test برای miR92a و Her2+/- 733

جدول 4-11- فرکانس و میانگین(PR- و PR+ ) 744

جدول 4-12- نتایج آزمون t-test برای miR92a و PR-/+.. 754

جدول 4-13- فرکانس و میانگین p53+ و p53- 755

جدول 4-14- نتایج آزمون t-test برای miR92a و p53+/- 766

جدول 4-15- فرکانس و میانگینER+ و   PR- 777

جدول 4-16- نتایج آزمون t-test برای miR92a و ER+/- 777

جدول4-17- فرکانس و میانگین  Nod position+/- 78

جدول 4-18- نتایج آزمون t-test برای miR92a و N+/- 78

جدول 4-19- فرکانس و میانگینbcl2. 79

جدول 4-20- نتایج آزمون t-test برای miR92a و بیان bcl2. 79

جدول 4-21- فرکانس و میانگین سن.. 80

جدول 4-22- نتایج آزمون t-test برای miR92a و میانگین سن.. 80

فهرست شکل ها

عنوان شکل                                                                                                                                   صفحه                                                   

شکل (1-1) ساختمان تشریحی پستان سالم. 9

شکل (1-2) سلولهای آلوئولی.. Error! Bookmark not defined.4

شکل(1-3) مراحل سرطان پستان. 26

شکل (1-4) مراحل بيوژنز.miRNA   30

شکل (1-5) جایگاه miR92a روی chr17, توالی بالغ miR92a، ساختار سنجاق سری miR92a. Error! Bookmark not defined.

شکل (3-1) نمایی کلی از روش های SYBR Green (راست) و TaqMan (چپ) در روش SYBR Green. 50

شکل(4-1)تصوير حاصل از الکتروفورز نمونه خون بیمارbcl2 و GAPDH… 60

شکل (4-2) آنالیز ژل الکتروفورزمربوط به .real -time. 61

فهرست نمودارها

عنوان نمودار                                                                                                             صفحه

نمودار منحنی (4-1) منحنی های تکثیر (الف) و ذوب(ب). 63

نمودار منحنی (4-2) منحنی های تکثیر (الف) و ذوب (ب). 64

نمودار(4-3) توزيع فراوانی سني.. 66

نمودار (4-4) توزیع فراواني نوع تومور. 66

نمودار (4-5) توزیع فراوانی درجه سرطان. 67

نمودار (4-6) توزیع فراوانی Stage بیماران مورد مطالعه. 67

نمودار(4-7) توزیع فراوانی اندازه تومور. 68

نمودار(4-8) توزیع فراوانی ER و PR و HER2/nue. 68

نمودار(4-9) توزیع فراوانی P53 و N… 69

قبلا حساب کاربری ایجاد کرده اید؟
گذرواژه خود را فراموش کرده اید؟
Loading...
enemad-logo