دانلود پروژه:ساخت داربست الکتروریسی‏شده‏ی پلی‏کاپرولاکتون حاوی میکروذرات کیتوسان بارگذاری‏شده با دگزامتازون برای تمایز استخوانی سلول‏های بنیادی مزانشیمی

فهرست مطالب

عنوان                                                                                         صفحه

فصل اول

مروری بر ادبیات موضوع

1-1 مقدمه. 2

1-2 مهندسی بافت استخوان.. 4

1-2-1 سلول.. 4

1-2-2 محرک‏های مولکولی… 7

1-2-3 داربست…. 10

1-2-4 رویکردهای مهندسی بافت…. 16

1-3 مروری بر کاربرد نانوالیاف در دارورسانی… 17

1-3-1 سامانه‏های نانولیفی انتقال دارو تهیه شده به روش الکتروریسی آمیخته. 18

1-3-2 سامانه‏های نانولیفی انتقال دارو تهیه شده به روش الکتروریسی تعلیقی… 21

1-3-3 سامانه‏های نانولیفی انتقال دارو تهیه شده به روش الکتروریسی هم­محور. 23

1-3-4 سامانه‏های ترکیبی با میکرو و نانوذرات… 25

1-4 مروری بر پژوهش‏های صورت گرفته بر روی انتقال دگزامتازون از نانوالیاف الکتروریسی‏شده 28

1-5 اهداف پژوهش….. 32

فصل دوم

مواد و روش‏ها

2-1 مقدمه. 35

2-2 مواد مورد استفاده. 35

2-3 تجهیزات مورد استفاده. 36

2-4 روش‏ها 37

2-4-1 توسعه و اعتبارسنجی روش کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا.. 37

2-4-2 اعتبار سنجی روش…. 38

2-4-3 تهیه نانوذرات کیتوسان.. 41

2-4-4 بهینه‏سازی نانوذرات کیتوسان.. 42

2-4-5 تعیین اندازه نانوذرات… 42

2-4-6 تعیین بازدهی تولید نانوذرات… 43

2-4-7 شکل‏شناسی نانوذرات… 44

2-4-8 بارگذاری دگزامتازون در نانوذرات… 44

2-4-9 بررسی رهایش دگزامتازون از نانوذرات کیتوسان.. 44

2-4-10 تهیه میکروذرات کیتوسان.. 45

2-4-11 شکل‏شناسی و اندازه‏ی ذرات… 46

2-4-12 اندازه­گیری میزان دگزامتازون بارگذاری شده در ذرات کیتوسان.. 46

2-4-13 تهیه الیاف… 47

2-4-14 شکل‏شناسی و اندازه الیاف… 47

2-4-15 بررسی توزیع ذرات درون الیاف… 48

2-4-16 بررسی میزان آب‏دوستی داربست‏ها 49

2-4-17 مطالعه میزان رهایش دارو از سامانه. 50

2-4-18 مطالعات سلولی… 50

فصل سوم

نتایج و بحث

3-1 مقدمه. 55

3-2 توسعه و اعتبارسنجی روش کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا.. 55

3-2-1 رسم منحنی استاندارد. 57

3-3 بهینه‏سازی غلظت‏ها در فرایند تهیه نانوذرات کیتوسان.. 61

3-4 مطالعه ویژگی نانوذرات در شرایط بهینه. 66

3-5 بارگذاری دگزامتازون در نانوذرات کیتوسان.. 67

3-5-1 بررسی اثر مقدار دارو. 67

3-6 رهایش دگزامتازون از نانوذرات کیتوسان.. 68

3-7 شکل‏شناسی و اندازه‏ی میکروذرات… 70

3-8 شکل‌شناسی و اندازه الیاف داربست‌ها 71

3-9 تاثیر حضور میکروذرات کیتوسان بر آب دوستی الیاف… 75

3-10 بررسی رهایش دگزامتازون از الیاف… 76

3-10-1 اثر حضور میکروذرات کیتوسان بر رهایش….. 76

3-10-2 اثر میزان داروی موجود در ذرات بر رهایش….. 78

3-11 نتایج مطالعات سلولی… 81

3-11-1 تکثیر سلولی… 81

3-11-2 شکل‏شناسی و توزیع سلولی بر روی داربست‏ها 82

3-11-3 شیمی ماده‏ی زمینه‏ای تشکیل شده. 83

3-11-4 فعالیت آلکالین فسفاتازی… 84

فصل چهارم. 87

نتیجه‏گیری و پیشنهادها 87

4-1……………………………………………………………………………………………. نتیجه­گیری… 88

4-1……………………………………………………………… پیشنهادها برای پژوهش‏های آتی… 89

مراجع. 90

فهرست جدول‏ها

عنوان                                                                                                 صفحه

جدول 1-1 برخی روش‏های ساخت داربست در مهندسی بافت………………………………………………………….15

جدول 1-2 عوامل تاثیر گذار بر فرایند الکتروریسی…………………………………………………………………………….18

جدول 1-3 برخی پژوهش‏های صورت گرفته در زمینه انتقال دگزامتازون از سامانه‏های نانولیفی…….30

جدول 2-1 مواد مورد استفاده در پژوهش……………………………………………………………………………………………34

جدول 2-2 تجهیزات مورد استفاده در پژوهش……………………………………………………………………………………36

جدول 2-3 متغیر‌ها و سطوح مربوطه در طراحی آزمایش برای بهینه‌سازی……………………………………….41

جدول 2-4 طراحی آزمایش برای بهینه سازی نانوذرات کیتوسان………………………………………………………42

جدول 2-5 گروه‏های مورد بررسی در این پژوهش………………………………………………………………………………50

جدول 3-1 نتایج آزمون صحت درون روزی…………………………………………………………………………………………57

جدول 3-2 نتایج آزمون صحت بین روزی……………………………………………………………………………………………57

جدول3-3 نتایج آزمون دقت…………………………………………………………………………………………………………………58

جدول 3-4 جدول طراحی آزمایش………………………………………………………………………………………………………59

جدول 3-5  تجزیه و تحلیل واریانس (ANOVA) مدل مربوط به اندازه نانوذرات ………………………….60.

جدول 3-6 تجزیه و تحلیل واریانس (ANOVA) مدل مربوط به بازدهی تهیه نانوذرات………………….61.

جدول 3-7 پیش بینی و تایید پاسخ ها در شرایط بهینه…………………………………………………………………….63

جدول 3-8 خلاصه­ی نتایج بررسی مشخصه­سازی میکروذرات کیتوسان………………………………………….68.

جدول 3-9 نتایج پیش آزمایش‏ها برای انتخاب ولتاژ بهینه میکروذرات کیتوسان……………………………..69.

جدول 3-10 مشخصات کلی داربست‏های تهیه شده………………………………………………………………………….70

جدول 3-11 برازش داده‏های رهایش با مدل کورسمیر- پپاس…………………………………………………………..77

فهرست شکل‏ها

عنوان                                                                                            صفحه

شکل 1-1  اثر دگزامتاوزون بر رونویسی Runx2…………………………………………………………………………………10

شکل 1-2 طرح کلی از یک دستگاه الکتروریسی…………………………………………………………………………………15

شکل 1-3 طرح کلی‏ از روش الکتروریسی هم محور……………………………………………………………………………23

شکل 1-4 الیاف PLGA و نانوذرات هیدروکسی آپاتیت برای رهایش دارو…………………………………………27

شکل 1-5 طرح کلی توزیع دگزامتازون در الیاف دانه‏دار و دوگانه‏دوست PEOT/PBT……………………..31

شکل 2-1 طرح کلی فرایند کروماتوگرافی…………………………………………………………………………………………..39

شکل 2-2 طرح کلی دستگاه خشک­کن پاششی و سازوکار آن……………………………………………………………46

شکل 2-3 طرح کلی فرایند تولید الیاف بارگذاری شده با دگزامتازون………………………………………………..47

شکل 2-4 مفهوم تصویری زاویه تماس………………………………………………………………………………………………..49

شکل 3-1 گزارشی از قله‏های جذبی HPLC……………………………………………………………………………………….56

شکل 3-2  نمونه­ی منحنی­های HPLC دگزامتازون ………………………………………………………………………….56

شکل 3-3 کروماتوگرام سه­بعدی HPLC  داروی دگزامتازون …………………………………………………………….57

شکل­ 3-4 نمودار استاندارد دگزامتازون در روش HPLC……………………………………………………………………57

شکل 3-5 نمودار سه­بعدی مدل مربوط به اندازه ذرات………………………………………………………………………..64

شکل 3-6 نمودار سه­بعدی مدل مربوط به بازدهی تهیه نانوذرات……………………………………………………….65

شکل 3-7 تصویر FESEM مربوط به نانوذرات در شرایط بهینه­ی متغیرها………………………………………..66

شکل 3-8 توزیع  اندازه (الف) و  بار سطحی (ب) نانوذرات در شرایط بهینه………………………………………66

شکل 3-9 تاثیر نسبت جرمی Dex/CS بر روی بارگذاری دگزامتازون در نانوذرات کیتوسان……………67

شکل 3-10 پتانسیل زتای دگزامتازون در pH 7/4 ……………………………………………………………………………68

شکل 3-11 نمودار رهایش دگزامتازون از نانوذرات کیتوسان………………………………………………………………69

شکل 3-12 پتانسیل زتا دگزامتازون در pH 4/7…………………………………………………………………………………69

شکل 3-13 تصاویر میکروسکوپ الکترونی روبشی میکروذرات……………………………………………………………70

شکل 3-14 تصویر میکروسکوپ الکترونی روبشی الیاف ناپیوسته PCL/CSMS……………………………….72

شکل 3-15 تصاویر SEM الیاف الکتروریسی شده‏………………………………………………………………………………73

شکل 3-16تصویر فلوئورسنت الیاف پلی‏کاپرولاکتون حاوی ذرات کیتوسان نشان‏دار شده………………..74

شکل 3-17 تصاویر مربوط به آزمون زاویه تماس الیاف……………………………………………………………………….75

شکل 3-18  نمودار رهایش دگزامتازون از الیاف PCL+Dex و PCL/CSMS+Dex…………………………76

شکل3-19  نمودار رهایش دگزامتازون از الیاف در ساعات اولیه…………………………………………………………77

شکل3-20 روند رهایش دگزامتازون از الیاف PCL/CSMS+Dex در دو غلظت………………………………..79

شکل 3-21 روند رهایش دگزامتازون از الیاف در دو غلظت در ساعات اولیه………………………………………79

شکل 3-22 بررسی فعالیت سوخت‏وسازی سلول‏های MSC بر روی داربست‏ها…………………………………81

شکل 3-23 تصاویر SEM سلول‏های کشت داده شده بر روی داربست‏ها………………………………………….82

شکل 3-24 طیف EDS مربوط به رسوب تشکیل شده بر روی داربست …………………………….83

شکل 3-25 درصد وزنی کلسیم و فسفر در سطح داربست‏ها‏………………………………………………………………83

شکل 3-26 میزان فعالیت آلکالین فسفاتازی سلول‏‏ها…………………………………………………………………………85