دانلود پروژه:جداسازي انانتيومرهايN،N- بيس(فنيل-متيلن¬فسفينيک¬اسيد) و سنتز مشتقات جديدي از ارگانو- فسفينيک¬اسيدها و مطالعه¬ي رفتارهاي بيولوژيکيآن¬ها

جداولVII

پيوستVII

علائم اختصاريXI

فصل اول: مقدمه و تاريخچه

1-1-ترکيبات ارگانوفسفر1

• فسفينيك اسيدها2

1-2-1-مقدمه2

1-2-2-آمينوفسفينيك­اسيدها                              2

1-2-3-سنتز a-آمينوفسفينيك­اسيدها3

1-2-4-کاربردهاي سنتزيa-آمينوفسفينيك­اسيدها11

• بيس­فسفونيک­ها و استرهاي متناظر12

1-3-1-مقدمه12

1-3-2-بيس­فسفونات­هاي استخلاف­شده در موقعيتa13

1-3-3-سنتز بيس­فسفونات­هاي استخلاف­شده در موقعيت a15

1-3-4-سنتز بيس­فسفينيک­اسيدهاي مجاور19

• جداسازي­انانتيومرهاي فسفونيک- و فسفينيک­اسيدهاي استخلاف­شده در موقعيت a20

1-4-1-مقدمه20

1-4-2-مثال­هايي از جداسازي انانتيومرهاي فسفونيک- و فسفينيک­اسيدهاي استخلاف­شده در موقعيت a21

1-5-پروتئين24

1-5-1-مقدمه24

1-5-2- ساختار پروتئين­ها25

1-5-2-1-ساختار اول پروتئين­ها25

1-5-5-2-ساختار دوم پروتئين­ها26

1-5-2-3-ساختار سوم پروتئين­ها28

1-5-2-4-ساختار چهارم پروتئين­ها28

1-5-3-کارکردهاي پروتئين­ها29

1-5-4-آلبومين سرم30

1-5-5-مروري بر کارهاي انجام­شده در زمينه برهمکنش با آلبومين­سرم­گاوي33

• طيف­سنجي فلورسانس39

1-6-1-مقدمه39

1-6-2-خاموشي نشر فلورسانس43

1-6-2-1-نظريه خاموشي ديناميک43

1-6-2-2-نظريه خاموشي استاتيک44

1-6-3-انتقال انرژي48

1-6-4-مطالعه پارامترهاي ترموديناميکي51

1-6-5-طيف­بيني جذبي مرئي و فرابنفش51

1-6-6-طيف­سنجي سينکرونوس52

• کربامويل و تيوکربامويل­فسفينيک­اسيدها52

1-7-1-مقدمه52

1-7-2-سنتز کربامويل و تيوکربامويل­فسفينيک­اسيدها54

1-8-آنزيم­ها58

1-8-1-مقدمه58

1-8-2-کاربرد آنزيم­ها58

1-8-3-مهارکننده­هاي آنزيمي59

1-8-3-1-پارامتر IC5060

1-8-3-2-ضريب هيل60

1-8-4-بوتيريل­کولين­استراز و ساختار آن60

1-8-5-اهميت و کاربرد مهارکننده­هاي آنزيم بوتيريل­کولين­استراز61

1-8-6-روش­هاي سنجش فعاليت آنزيم62

1-8-7-مروري بر تحقيقات گذشته در زمينه­ مهارکننده­هاي بوتيريل­کولين­استراز63

فصلدوم: روش کار

2-1-کليات دستگاه­ها، تجهيزات و مواد شيميايي68

2-2-ساخت ليگاندهاي N،N– بيس(آريل­متيليدن­فسفينيک­اسيد)آمين­هاي 3a-d69

2-3-بررسي برهمکنش BSA با ليگاندهاي 3a-d با تيتراسيون فلورسانس69

2-3-1-تهيه بافر فسفات 05/0 مولار با pH برابر با 4/669

2-3-2-تهيه محلول مادر BSA70

2-3-4-تهيه محلول BSA براي تيتراسيون70

2-3-4-تهيه محلول­هاي ليگاند70

2-3-5-تيتراسيون فلورسانس محلول BSA توسط ليگاندهاي مورد مطالعه70

2-3-6- تيتراسيون فلورسانس سنکرونوس محلول BSA با ليگاندهاي مورد مطالعه71

2-3-7-بررسي­هاي ترموديناميکي71

2-3-8-بررسي­هاي انتقال انرژي از BSA به ليگاندها71

2-4-سنتز فرم آنتي N،N-بيس (آريل­متيليدن کربامويل- يا تيوکربامويل­فسفينيک­اسيد)آمين­ها71

2-4-1-سنتز فرم آنتي N،N– بيس(آريل­متيليدن­فسفينيک­اسيد)آمين­هاي 3a-d71

2-4-2-سنتز حالت آنتي N،N– بيس (آريل­متيليدن کربامويل- يا تيوکربامويل­فسفينيک­اسيد) آمين­ها72

2-4-2-1-سنتز حالت آنتي N،N– بيس] فنيل­متيليدن­(­فنيل­کربامويل­فسفينيک­اسيد)­[آمين­5a72

2-5-بررسي اثرات مهارشدگي بوتيريل­کولين­استراز توسط کربامويل- و تيوکربامويل­فسفينيک­اسيدهاي سنتزشده77

2-5-1-تهيه محلول­ها77

2-5-2-تعيين اثر مهارکنندگي مشتقات کربامويل- و تيوکربامويل­فسفينيک­اسيدهاي سنتزشده بر روي فعاليت آنزيم بوتيريل­کولين­استراز سرم اسب78

2-6-جداسازي انانتيومرهاي (R,R)-  و (S,S)- N،N– بيس(فنيل­متيلن­فسفينيک­اسيد)آمين78

2-6-1-تهيه مخلوط راسميک (R,R)-  و (S,S)- N،N– بيس(فنيل­متيلن­فسفينيک­اسيد)آمين78

2-6-2-تهيه نمک دياسترومري (-)- کينينيوم (R,R)- N،N– بيس(فنيل­متيلن­فسفينات)78

2-6-3-تهيه نمک دياسترومري (-)- کينينيوم (S,S)- N،N– بيس(فنيل­متيلن­فسفينات)آمين80

2-6-4-تهيه (R,R)- N،N– بيس(فنيل­متيليدن­فسفينيک­اسيد)81

2-6-5- تهيه (S,S)- N،N– بيس(فنيل­متيليدن­فسفينيک­اسيد)81

2-7-سنتز هيدروکسي­متيلن بيس­فسفينيک­اسيدها82

2-7-1- تهيه­ي نمک آمونيوم­هيپوفسفيت82

2-7-2-سنتز هيدروکسي­متيلن بيس­فسفينيک­اسيدها82

2-7-2-1 سنتز هيدروکسي­فنيل­متيلن بيس­فسفينيک­اسيد82

فصل سوم: نتايج و بحث

3-1-مقدمه86

3-2-مطالعه برهمکنش بين N،N-بيس(فسفينومتيل)آمين­ها با آلبومين­سرم­گاوي87

3-2-1- ساخت N،N-بيس(فسفينومتيل)آمين­ها و جداسازي دياسترومرها87

3-2-2- برهمکنش N،N– بيس(فسفينومتيل)آمين­ها با آلبومين­سرم­گاوي88

3-2-2-1-تيتراسيون فلورسانس پروتئين BSA با ليگاندهاي 3a-d90

3-2-2-1-1نظريه خاموشي فلورسانس و محاسبه ثابت استرن-ولمر92

3-2-2-1-2-محاسبه ثابت اتصال و تعداد جايگاه­هاي اتصال BSA و ليگاندهاي 3a-d94

3-2-2-1-3 محاسبه و بررسي پارامترهاي ترموديناميکي در بررسي برهمکنش ليگاندهاي 3a-d با BSA96

3-2-2-2-بررسي انتقال انرژي در برهمکنش ليگاندهاي 3a-d با BSA100

3-2-2-3-بررسي طيف­سنجي فلورسانس سينکرونوس در برهمکنش ليگاندهاي 3a-d با BSA102

3-3-جداسازي انانتيومرهاي (R,R)- و (S,S)- N،N– بيس(فنيل­متيليدن­فسفينيک­اسيد)آمين106

3-3-1-مقدمه106

3-3-2-جداسازي انانتيومرهاي (R,R)- و (S,S)- N،N-بيس(فنيل­متيليدن­فسفينيک­اسيد)آمين­ها با استفاده از تشکيل نمک­هاي دياسترومري128

3-4- سنتز مشتقات جديدي از کربامويل- و تيوکربامويل­فسفينيک­ اسيدها و بررسي اثرات بازدارندگي آن­ها روي آنزيم بوتيريل­کولين­استراز118

3-4-1- مقدمه118

3-4-2-سنتز کربامويل- و تيوکربامويل­فسفينيک­اسيدهاي متقارن119

3-4-3-بررسي اثرات بازدارندگي کربامويل-  و تيوکربامويل­فسفينيک اسيدهاي متقارن سنتز­شده با آنزيم بوتيريل­کولين­استراز131

3-4-3-1-محاسبه مقادير IC50 و ضريب هيل برايبازدارندگي کربامويل-  و تيوکربامويل­فسفينيک­اسيدهاي متقارن سنتز­شده با آنزيم بوتيريل­کولين­استراز131

3-5- سنتز هيدروکسي­متيلن­ بيس(فسفينيک­اسيد)ها به­عنوان مشتقاتي از فسفينيک­اسيدهاي مجاور137

3-5-1- مقدمه137

3-5-2-سنتز هيدروکسي­متيلن­ بيس(فسفينيک­اسيد)ها138

3-6-خلاصه و تحقيقات آينده151

فهرست جداول

جدول 3-1- مقادير به­دست آمده ثابت استرن- ولمر و همچنين ثابت خاموشي دومولکولي از نمودارهاي استرن- ولمر                             93

جدول 3-2- مقادير به­دست آمده ثابت اتصال و همچنين تعداد موقعيت­هاي اتصال از نمودارهاي لگاريتمي در دماهاي 15، 20، 25 و 30 درجه سانتي­گراد96

جدول 3-3-پارامترهاي ترموديناميکي براي برهمکنش BSA با ليگاندهاي 3a-d98جدول 3-4- ارتباط پارامترهاي ترموديناميکي با نوع برهمکنش بين ليگاند و ماکرومولکول99

جدول 3-5- پارامترهاي انتقال انرژي بين 3a-d و BSA                 102     جدول 3-6- مقادير بازده و چرخش نوري ويژه براي انانتيومرهايN،N– بيس(فنيل­متيليدن­فسفينيک­اسيد)آمين117

جدول 3-7-سنتز تعدادي از مشتقات کربامويل-  و تيوکربامويل­فسفينيک­اسيدها از واکنش آمينوفسفينيک­اسيدهاي مربوطه با ايزوسيانات­ها و ايزوتيوسيانات­ها126

جدول 3-8- مقادير بازدارندگي مشتقات کربامويل- و تيوکربامويل­فسفينيک­اسيد133

جدول 3-9- مقادير بازدارندگي مشتقات کربامويل- و تيوکربامويل­فسفينيک­اسيد133

جدول 3-10- مقادير IC50 و ضريب هيل براي بازدارندگي کربامويل و تيوکربامويل­فسفينيک­اسيدهاي سنتزشده بر روي آنزيم بوتيريل­کولين­­استراز134

جدول 3-11-نتايج حاصل از واکنش اسيدهاليدها با آمونيوم­هيپوفسفيت درحضور هگزامتيل­دي­سيلازان   142

پيوست

اثرات خاموشی ترکیبات 3a-d بر نشر فلورسانس BSA با غلظت 4 میکرومولار در دماهای الف)15 ب)20 ج)25 و د)30 درجه سانتي­گراد در بافر فسفات با 4/6pH= و طول موج تحريک 280 نانومتر          158-155

اثر خاموشي3a بر نشر فلورسانس BSA با غلظت 4 ميکرومولار در دماهاي الف)15 ب)20 ج)25 و د)30 درجه سانتي­گراد در بافر فسفات با 4/6pH= و طول موج تحريک 280 نانومتر

اثر خاموشي3b بر نشر فلورسانس BSA با غلظت 4 ميکرومولار در دماهاي الف)15 ب)20 ج)25 و د)30 درجه سانتي­گراد در بافر فسفات با 4/6pH= و طول موج تحريک 280 نانومتر

اثر خاموشي3c بر نشر فلورسانس BSA با غلظت 4 ميکرومولار در دماهاي الف)15 ب)20 ج)25 و د)30 درجه سانتي­گراد در بافر فسفات با 4/6pH= و طول موج تحريک 280 نانومتر

اثر خاموشي3d بر نشر فلورسانس BSA با غلظت 4 ميکرومولار در دماهاي الف)15 ب)20 ج)25 و د)30 درجه سانتي­گراد در بافر فسفات با 4/6pH= و طول موج تحريک 280 نانومتر

طیف های ¹H NMR،NMR ¹³Cو ³¹P NMR مشتقات هیدروکسی­متیلن بیس(فسفینیک­اسید)ها در حلال D₂O                                                                                          172-159

طيف ³¹P NMR ترکيب هيدروکسي­فنيل­متيلن بيس(فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O

طيف ¹H NMR ترکيب هيدروکسي­فنيل­متيلن بيس(فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O

طيف ¹³C NMR ترکيب هيدروکسي­فنيل­متيلن بيس(فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O

طيف ³¹P NMR ترکيب هيدروکسي(2- کلرو­فنيل)­متيلن بيس(فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O

طيف ¹H NMR ترکيب هيدروکسي(2- کلرو­فنيل)­متيلن بيس(فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O

طيف ¹³C NMR ترکيب هيدروکسي(2- کلرو­فنيل)­متيلن بيس(فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O

طيف ³¹P NMR ترکيب 1- هيدروکسي- 2- ­فنيل­اتان-1،1- بيس(فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O

طيف ¹H NMR ترکيب 1- هيدروکسي- 2- ­فنيل­اتان-1،1- بيس(فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O

طيف ¹³C NMR ترکيب 1- هيدروکسي- 2- ­فنيل­اتان-1،1- بيس(فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O

طيف ³¹P NMR ترکيب هيدروکسي(2- فلوئورو­فنيل)­متيلن بيس(فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O

طيف ¹H NMR ترکيب هيدروکسي(2- فلوئورو­فنيل)­متيلن بيس(فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O

طيف ¹H NMR بزرگنمايي­شده­ي ترکيب هيدروکسي(2- فلوئورو­فنيل)­متيلن بيس(فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O

طيف ¹³C NMR ترکيب هيدروکسي(2- فلوئورو­فنيل)­متيلن بيس(فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O

طيف ³¹P NMR ترکيب 1- هيدروکسي­بوتان-1،1- بيس(فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O

طيف ¹H NMR ترکيب 1- هيدروکسي­بوتان-1،1- بيس(فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O

طيف ¹³C NMR ترکيب 1- هيدروکسي­بوتان-1،1- بيس(فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O

طيف HH-COSY ترکيب هيدروکسي(2- کلرو­فنيل)­متيلن بيس(فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O

طيف HSQC ترکيب هيدروکسي(2- کلرو­فنيل)­متيلن بيس(فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O

طيف HH-COSY ترکيب هيدروکسي(2- فلوئورو­فنيل)­متيلن بيس(فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O

طيف HH-COSY بزرگنمايي­شده ترکيب هيدروکسي(2- فلوئورو­فنيل)­متيلن بيس(فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O

طيف HSQC ترکيب هيدروکسي(2- فلوئورو­فنيل)­متيلن بيس(فسفينيک­اسيد) در حلال D₂O

طيف HSQC بزرگنمايي­شده ترکيب هيدروکسي(2- فلوئورو­فنيل)­متيلن بيس(فسفينيک­اسيد) در حلال D₂O

طیف های ¹H NMR،NMR ¹³Cو ³¹P NMR مشتقات کربامویل- و تیوکربامویل­فسفینیک­اسیدها در حلال D₂O/OD^–                                                                                     185-173

طيف³¹P NMRترکيب آزان­دي­ايل بيس(فنيل­متيلن) بيس((فنيل­کربامويل) فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O/OD^–

طيف¹H NMRترکيب آزان­دي­ايل بيس(فنيل­متيلن) بيس((فنيل­کربامويل) فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O/OD^–

طيف¹³C NMRترکيب آزان­دي­ايل بيس(فنيل­متيلن) بيس((فنيل­کربامويل) فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O/OD^–

طيف³¹P NMRترکيب آزان­دي­ايل بيس((4- فلوئوروفنيل­)متيلن) بيس((فنيل­کربامويل) فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O/OD^–

طيف¹H NMRترکيب آزان­دي­ايل بيس((4- فلوئوروفنيل­)متيلن) بيس((فنيل­کربامويل) فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O/OD^–

طيف¹³C NMRترکيب آزان­دي­ايل بيس((4- فلوئوروفنيل­)متيلن) بيس((فنيل­کربامويل) فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O/OD^–

طيف³¹P NMRترکيب آزان­دي­ايل بيس((4- متوکسي­فنيل­)متيلن) بيس((فنيل­کربامويل) فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O/OD^–

طيف¹H NMRترکيب آزان­دي­ايل بيس((4- متوکسي­فنيل­)متيلن) بيس((فنيل­کربامويل) فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O/OD^–

طيف¹³C NMRترکيب آزان­دي­ايل بيس((4- متوکسي­فنيل­)متيلن) بيس((فنيل­کربامويل) فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O/OD^–

طيف³¹P NMRترکيب آزان­دي­ايل بيس((4- متيل­فنيل­)متيلن) بيس((فنيل­کربامويل) فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O/OD^–

طيف¹H NMRترکيب آزان­دي­ايل بيس((4- متيل­فنيل­)متيلن) بيس((فنيل­کربامويل) فسفينيک­اسيد) در حلال D₂O/OD^–

طيف¹³C NMRترکيب آزان­دي­ايل بيس((4- متيل­فنيل­)متيلن) بيس((فنيل­کربامويل) فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O/OD^–

طيف³¹P NMRترکيب آزان­دي­ايل بيس((4- متوکسي­فنيل­)متيلن) بيس((سيکلوهگزيل­کربامويل) فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O/OD^–

طيف¹H NMRترکيب آزان­دي­ايل بيس((4- متوکسي­فنيل­)متيلن) بيس((سيکلوهگزيل­کربامويل) فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O/OD^–

طيف¹³C NMRترکيب آزان­دي­ايل بيس((4- متوکسي­فنيل­)متيلن) بيس((سيکلوهگزيل­کربامويل) فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O/OD^–

طيف³¹P NMRترکيب آزان­دي­ايل بيس((4- فلوئوروفنيل­)متيلن) بيس((فنيل­کرباموتيويل) فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O/OD^–

طيف¹H NMRترکيب آزان­دي­ايل بيس((4- فلوئوروفنيل­)متيلن) بيس((فنيل­کرباموتيويل) فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O/OD^–

طيف¹³C NMRترکيب آزان­دي­ايل بيس((4- فلوئوروفنيل­)متيلن) بيس((فنيل­کرباموتيويل) فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O/OD^–

طيف³¹P NMRترکيب آزان­دي­ايل بيس(فنيل­متيلن) بيس((پارا-توليل­کرباموتيويل) فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O/OD^–

طيف¹H NMRترکيب آزان­دي­ايل بيس(فنيل­متيلن) بيس((پارا-توليل­کرباموتيويل) فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O/OD^–

طيف¹³C NMRترکيب آزان­دي­ايل بيس(فنيل­متيلن) بيس((پارا-توليل­کرباموتيويل) فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O/OD^–

طيف³¹P NMRترکيب آزان­دي­ايل بيس((4- متوکسي­فنيل­)متيلن) بيس((فنيل­کرباموتيويل) فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O/OD^–

طيف¹H NMRترکيب آزان­دي­ايل بيس((4- متوکسي­فنيل­)متيلن) بيس((فنيل­کرباموتيويل) فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O/OD^–

طيف¹H NMRترکيب آزان­دي­ايل بيس((4- متوکسي­فنيل­)متيلن) بيس((فنيل­کرباموتيويل) فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O/OD^–

طيف³¹P NMRترکيب آزان­دي­ايل بيس(فنيل­متيلن) بيس(((4- نيتروفنيل)­کرباموتيويل) فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O/OD^–

طيف¹H NMRترکيب آزان­دي­ايل بيس(فنيل­متيلن) بيس(((4- نيتروفنيل)­کرباموتيويل) فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O/OD^–

طيف¹³C NMRترکيب آزان­دي­ايل بيس(فنيل­متيلن) بيس(((4- نيتروفنيل)­کرباموتيويل) فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O/OD^–

طيف³¹P NMRترکيب آزان­دي­ايل بيس(پارا- توليل­متيلن) بيس(((4- نيتروفنيل)­کرباموتيويل) فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O/OD^–

طيف¹H NMRترکيب آزان­دي­ايل بيس(پارا- توليل­متيلن) بيس(((4- نيتروفنيل)­کرباموتيويل) فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O/OD^–

طيف¹³C NMRترکيب آزان­دي­ايل بيس(پارا- توليل­متيلن) بيس(((4- نيتروفنيل)­کرباموتيويل) فسفينيک­اسيد) در حلالD₂O/OD^–

داده­هاي مربوط به پرتوافکني اشعه­ي ايکس براي نمکR,R)-3a-Quinine)