تعیین برخی خصوصیات بیوشیمیایی آنزیم بتا گلوکاناز جدا شده از با کتری گرمادوست بومی Cohnella sp. A01

تعداد151صفحه در فایل word

آنزیم­های بتاگلوکاناز غیرسلولیتیک ازجمله آنزیم­های هیدرولیز کننده­ی  دیواره­ی سلولی قارچ­ها و مخمر می­باشد که توسط برخی گیاهان و قارچ­های همزیست با گیاه، در هنگام حمله­ی قارچ­های پاتوژن به گیاه، ساخته و ترشح می­شوند و یکی از خطوط دفاعی این گیاهان محصوب می­شوند. هدف از این پژوهش، بررسی خصوصیات بیوشیمیایی آنزیم بتاگلوکاناز، از باکتری گرمادوست بومی Cohnella A01 بود که در راستای این هدف، همسانه­سازی ژن بتاگلوکاناز و بیان آن در باکتریE. coli  انجام شد. بنابراین در این مطالعه، ژن بتاگلوکاناز باکتری Cohnella sp. A01 در حامل بیانی pET 26 b (+) همسانه‌سازی گردید و بیان پروتئینی آن، در باکتری اشریشیاکولی BL21­(DE3) صورت گرفت و با الکتروفورز SDS-PAGE بیان پروتئین بررسی شد. خالص­سازی آنزیم با استفاده از ستون نیکل سفارزNi-NTA  صورت گرفت. دو پلی­ساکارید پوستالان و لامینارین جهت سنجش فعالیت آنزیم، انتخاب شد. برای تعیین خصوصیات بیوشیمیایی، آنزیم در معرض دما و  pHهای مختلف و همچنین دترجنت­ها و یون­های فلزی قرار داده شد. در این مطالعه ژن بتا1،6­گلوکاناز با موفقیت در باکتری E.Coli  همسانه­سازی و بیان شد. پروتئین بیان شده با 639 اسید آمینه تشابه زیادی را به گلیکوزیل­هیدرولاز­های خانواده 30  (GH30)نشان داد.  آنزیم با وزن ملکولی  kDa64، دارای راندمان خالص­سازی 46 درصد بود. آنزیم فعالیت ویژه­ی U/mg 71/8 بر روی لامینارین وU/mg 47/5 بر روی پوستالان را نشان داد. این آنزیم به عنوان یک بتا­1،6گلوکاناز شناخته شد. دما و pH بهینه برای این آنزیم به ترتیب 50 درجه­سانتی­گراد و 8 می­باشد. آنزیم دارای پایداری مناسب در دماهای بالا بوده و در pH­های 7 تا 9 بهترین پایداری داشته و در pH های بازی و اسیدی، فعالیت خود را بطور کامل از دست نمی­دهد. هیچ کدام از یون­های فلزی و مواد شیمیایی مورد مطالعه، فعال کننده­ی این آنزیم نبوده و اوره، SDS و یون فلز مس بیشترین مهار را بر روی آنزیم داشتند.

کلمات کلیدی: بتاگلوکاناز، Cohnella A01، خصوصیات بیوشیمیایی، اشرشیا­کلی