%31تخفیف
تعيين اپيتوپهاي توكسين بتا كلستريديوم پرفرنژنس با استفاده از تکنيکهاي مولكولي
تعداد 122صفحه در فایل word
کارشناسي ارشد رشتهی زیست فناوری ميکروبي
تعيين اپيتوپهاي توكسين بتا كلستريديوم پرفرنژنس با استفاده از تکنيکهاي مولكولي
چکيده
در بعضي موارد پاسخهاي القا شده توسط ايمونوژن طبیعی بهينه نميباشد و قرار گرفتن چند اپيتوپ کنار هم پاسخ ايمني را به طور قابل توجهي افزايش ميدهند. هدف از اين پروژه نيز تهيه قطعه مشخصي از توکسين بتا داراي تمرکز اپيتوپي با توان آنتيژني مناسب ميباشد. کلستريديوم پرفرنژنس تیپ Bو C ترشحکننده توکسين بتا بوده که باعث ايجاد آنتريت نکروتيک در انسان و دام ميشود. مرگ و مير در افراد مبتلا به اين بيماري به بيش از 50 درصد ميرسد. بنابراين پيشگيري و تشخيص هر دو لازمه مقابله با اين بيماري است. براي دستيابي به اجزاي موثرتر جهت ايمنيزايي ابتدا با کمک ابزارهاي بيوانفورماتيک بر اساس ساختار دوم، پرايمرهاي مختلف از ژن توکسين بتا طراحي و قطعات مختلف بوسيله PCR تهيه گرديد. ناحيهاي از توکسين بتا که داراي بيشترين آنتيژنيسيته بوده و با بقيه قطعات همپوشاني دارد جهت کلونينگ انتخاب گرديد. این قطعه در PTZ57RT کلون و سپس در pET21a(+) ساب کلون گردید. اين ناقل در E. coli BL21(DE3) ترانسفورم شد. بيان پروتئين نوتركيب با استفاده از 100 ميلي مولار IPTG القا و پروتئين نوترکيب توسط دات بلات، وسترن بلات و الايزا با آنتيسرم خرگوشي توکسين طبیعی مورد ارزيابي قرار گرفت. مقايسه کمي حساسيت آنتيژن نوترکيب با آنتيژن طبیعی بتا از طريق واکنش متقاطع الايزا با آنتيباديهاي همولوگي و غيرهمولوگي بررسي گردید. بررسي نتايج بيان پروتئين نوترکيب با تکنيکهاي ايمونوشيميايي نشان داد که پروتئين نوترکيب به صورت اختصاصي با آنتيبادي ضد توکسين طبیعی وارد واکنش شده و داراي آنتيژنيسيته مناسب ميباشد. نتايج واکنش متقاطع نيز نشان داد که آنتيژن طبیعی بتا با آنتيبادي غيرهمولوگي واکنش بسيار قوي دارند. بنابراين آنتيبادي اختصاصی ضد آنتیژن نوترکيب ميتواند جايگزين بسيار مناسب آنتيبادي ضد توکسين طبیعی باشد و در طراحي کيتهاي تشخيصي جهت تشخيص کلينيکي بيماري آنتريت نکروتيک کاربرد داشته باشد. از طرف ديگر از طريق شناسايي مناطق اپيتوپي توکسينهاي ديگر کلستريديوم پرفرنژنس و اتصال آنها به هم، ميتوان واکسنهايي را بر عليه ترکيبي از اپيتوپها طراحي کرد و با حداقل هزينه سرعت ايمني زايي را بالا برد.
واژگان کليدي: کلستريديوم پرفرنژنس، آنتيژن طبیعی بتا، آنتيژن نوترکيب، اپيتوپ.
اولین کسی باشید که دیدگاهی می نویسد “تعيين اپيتوپهاي توكسين بتا كلستريديوم پرفرنژنس با استفاده از تکنيکهاي مولكولي ” لغو پاسخ
نقد و بررسیها
هنوز بررسیای ثبت نشده است.