%46تخفیف

تحلیل بیان ژنهای PAL1، JAR1 و JAZ1در گياه آرابيدوپسيس در پاسخ بهآلودگی باکتریPseudomonas syringaepv. syringae

تعداد131 صفحه در فایل word

کارشناسی ارشد در رشتهی

بیوتکنولوژی کشاورزی

تحلیل بیان ژنهای PAL1، JAR1 و *JAZ1***در گياه آرابيدوپسيس در پاسخ بهآلودگی باکتریPseudomonas syringaepv. syringae**

به منظور بررسی نحوهی بروز پاسخهای دفاعی گیاه حین همکنش ناسازگار با یک بیمارگر دارای رفتار بیوتروفی،با افشاندن سوسپانسیونی با غلظت یکسان و مشخص از سه جدایهی متفاوت باکتریPss طی بازههای زمانی 0، 6، 12، 24 و 48 ساعت بر روی اندام برگی گیاه آرابیدوپسیس و در قالب یک طرح کامل تصادفی در سه تکرارنحوهی بروز پاسخهای دفاعی این گیاه درسطح ملکولی به صورت بررسی میزان تغییرات بیان ژنهای JAR1وJAZ1درگیر در مسیر پیامرسانی جاسمونیک اسید و همچنین ژنPAL1دخیل در مسیر سالیسیلیک اسید با استفاده از دستگاه Real Time PCR مورد بررسی قرار گرفت. نتایج نشان داد که در اکثر موارد برای هر سه جدایه در ساعات ابتدایی تیمار، سطح بیان ژنهای JAR1وJAZ1کاهش معنیداری نسبت به شاهد داشتدر حالی که در شرایط مشابه و در حالتی متضاد بیان ژن PAL1 افزایش معنیداری نسبت به شاهد داشت. طبق نتایج این پژوهش تقریبا در اکثر موارد برای هرسه جدایه الگوی بیان یکسان اما میزان بیان متفاوت میباشد، به طوری که بیشترین بیان معنیدار نسبت به شاهد و سایر زمانها مربوط به ژن PAL1 در زمان شش ساعت و کمترین بیان مربوط به ژنهای JAR1وJAZ1در همین زمان میباشد. تحریک و تغییرات بیان ژنها در ساعات اولیه تیمار در بالاترین و بیشترین میزان خود قرار دارد و در ساعات پایانی تیمار آهنگ کندتری در پیش میگیرد وتقریبا در تمامی موارد سیگنال سالیسیلیک اسیدیک اثر زود گذر آنتاگونیستی و بازدارنده روی جاسمونیک اسید دارد.این نتایج حاکی از آن است که فعال شدن مسیرSA در برابر این بیمارگر باعث سرکوب مسیرJA شدهو متعاقب آن باعث شروع و ایجاد مقاومت درگیاه آرابیدوپسیس علیهاین بیمارگرمیگردد.

واژههای کلیدی:مسیرهای پیامرسانی، اثر آنتاگونیستی، جاسمونیک اسید، سالیسیلیک اسید، JAR1، JAZ1، PAL1،Pseudomonas syringae pv. syringae

دسته: فنی و مهندسی, کشاورزی و منابع طبیعی برچسب: JAR1, JAZ1, PAL1, Pseudomonas syringae pv. syringae, اثر آنتاگونیستی, جاسمونیک اسید, سالیسیلیک اسید, واژههای کلیدی:مسیرهای پیامرسانی

توضیحات

فهرست مطالب

عنوان……………………………………………………………………………………صفحه

1- مقدمه.. 2

1-1- اهدافموردپژوهش.. 5

2- مروریبرپژوهشهایپیشین.. 7

2-1- گیاهآرابیدوپسیسوچراییانتخابآن.. 7

2-2-باکتریPseudomonas syringae pv. syringae. 8

2-3-دفاعدرگیاهاندرسطحمولکولی.. 14

2-3-1-ایمنیذاتیگیاهان.. 14

2-3-2- مقاومتمیزبانیوغیرمیزبانی.. 17

2-3-3- مقاومتمیزبانیدربرابرمقاومتغیرمیزبانی.. 18

2-3-4- هورمونهایگیاهی.. 20

2-4- مقاومتسیستمیکاکتسابی(SAR) 30

2-5- ژنهایموردبررسیدرپژوهش.. 32

2-5-1-ژنPAL1. 32

2-5-2- ژنJAR1. 34

2-5-3- ژن(JAZ1) Jasmonate ZIM-domain1. 34

2-6-تکنیکReal Time PCR.. 38

2-6-1-اصولکلیحاکمبرتکنیک.. 38

2-6-2- توضیحیبرساختcDNA.. 40

2-6-3-qRT- PCR.. 40

2-6-4- مراحلPCR.. 41

2-6-5- ارزیابیکمیواکنشباموادمختلفدرqRT-PCR.. 41

2-6-6- بهینهطولآمپلیکون.. 45

2-6-7- ارزیابیکمیqRT-PCR.. 45

3- موادوروشها.. 50

3-1- تهیهباکتریPss. 50

3-2- جدایههایمورداستفادهدراینپژوهش.. 50

3-3- کاشتگیاهآرابیدوپسیس.. 50

3-4- اعمالتیماربررویگیاهآرابیدوپسیس.. 51

3-5- استخراجDNAازبافتبرگی.. 52

3-5-1- تهیهبافرCTAB.. 53

3-6- استخراجRNAازبافتبرگ.. 53

3-7- تعیینکمیتوکیفیتRNAاستخراجشده.. 54

3-7-1- تهيهژلآگاروزوانجامالكتروفورز.. 55

3-8- تیمارDNaseبرایحذفآلودگیژنومیدرRNAاستخراجشده 55

3-9- سنتزcDNA.. 56

3-10- طراحیآغازگرهایاختصاصیبرایانجامReal Time RT-PCR.. 57

3-11- تکثیرقطعهموردنظربااستفادهازواکنشزنجیره‏یپلیمراز 58

3-12- انجامواکنشReal time RT-PCRبرايcDNAهايتهيهشده.. 59

3-13- روشنرمالسازيبيانژنهاپسازواكنشReal-time PCR.. 62

3-14- آنالیزآماریبیانژنها.. 62

4-آنالیزآماریبیانژنهایمدنظر.. 65

4-1- نمونهگيريازبافتبرگيواستخراجRNA.. 65

4-2- تیمارDNase. 66

4-3- تاییدسنتزcDNAبااستفادهازژلآگارز.. 66

4-4- بهینهسازیکاراییودمایاتصالپرایمرهابرایواکنش Real time PCR 67

4-5-تحلیلالگویبیانژنهایJAZ1, JAR1, PAL1. 68

4-5-1-بررسیالگویبیانژنPAL1. 68

4-5-2-بررسیالگویبیانژنJAZ1. 72

4-5-3-بررسیالگویبیانژنJAR1. 76

5- بحث.. 81

5-1- بحثکلی.. 81

5-2- پیشنهادات.. 87

منابع.. 93

چکیده و صفحه عنوان به انگلیسی

فهرست جداول

عنوان…………………………………………………………………………………صفحه

جدول 2-1- ردهبندیکنونیوخصوصیاتPss. 13

جدول2-2- برخیفاکتورهایبیماریزایپاتوارهایمختلفباکتریP. syringaeفقطآنهاییاستکهمنجربهایجادبیماریرویدرختانمیوهوگیاهانچوبیمیگردند.. 14

جدول3-1- موادمورداستفادهدرمحلولهوگلندکشتآرابیدوپسیس 51

جدول3- 2- موادومقادیرموردنیازبرایتهیه 100 میلیلیتربافرCTAB 53

جدول3- 5- نوعموادومقدارموردنیازبرایتیمارنمونهRNAباDNAse. 56

جدول3- 6- نوعومقدارمواداستفادهشدهدرسنتزرشتهcDNAدرمرحلهاول. 56

جدول3- 7- نوعومقدارمواداستفادهشدهدرسنتزرشتهcDNAدرمرحلهدوم. 57

جدول3- 8- آغازگرهایمورداستفادهبرایتکثیرژنهایهدفدرگیاهآرابیدوپسیس. 58

جدول3- 9- نوعومقدارموادموردنیازدرواکنشزنجیرهایپلیمراز 58

جدول 3- 10- چرخهحرارتیواکنشزنجیرهایپلیمرازجهتتکثیرقطعاتژنهایJAR1،JAZ1وPAL1. 59

جدول 3- 11- نوعومقدارموادمورداستفادهدرواکنشReal time PCRبرایژنهایاصلیPAL1،JAR1وJAZ1وهمچنینژنکنترلداخلیELF 60

جدول 3- 12- سیکلگرماییاستفادهشدهدرواکنشReal time PCRجهتتکثیرژنPAL1 60

جدول 3- 13- سیکلگرماییاستفادهشدهدرواکنشReal time PCRجهتتکثیرژنJAR1 60

جدول 3- 14- سیکلگرماییاستفادهشدهدرواکنشReal time PCRجهتتکثیرژنJAZ1 61

جدول 3- 15- سیکلگرماییاستفادهشدهدرواکنشReal time PCRجهتتکثیرژنکنترلداخلیELF.. 61

جدول 4-1 میزانبیاننسبیژنPAL1درگیاهآرابیدوپسیسدرپاسخبهمایهزنیباسهجدایهیباکتریW₃ (گندم)،P₅ (هلو) وP₈ (گلابی) طیبازههایزمانیمختلف… 72

جدول 4-2 میزانبیاننسبیژنJAZ1درگیاهآرابیدوپسیسدرپاسخبهمایهزنیباسهجدایهیباکتریW₃ (گندم)،P₅ (هلو) وP₈ (گلابی) طیبازههایزمانیمختلف… 75

جدول 4-3 میزانبیاننسبیژنJAR1درگیاهآرابیدوپسیسدرپاسخبهمایهزنیباسهجدایهیباکتریW₃ (گندم)،P₅ (هلو) وP₈ (گلابی) طیبازههایزمانیمختلف. 79

فهرست اشکال

عنوان…………………………………………………………………………………صفحه

شکل 2-1 مسیرفنیلآلانینبرایبیوسنتزسالسیلیکاسید.. 30

شکل 4-1- استخراجRNAازبرگوباندهایSrRNA18وSrRNA 28.. 65

شکل 4-2- استخراجRNAازبرگوباندهایSrRNA18وSrRNA 28.. 66

شکل 4-3- محصولواکنشPCRبهوسیلهآغازگرهایژنJAZ1رویcDNAهایسنتزشده. 67

شکل 4-4- محصولواکنشPCRبهوسیلهآغازگرهایژنJAZ1رویcDNAهایسنتزشده. 67

شکل 4-5-تغییراتبیانژنPAL1آرابیدوپسیسدرپاسخبهباکتریPss،جدایهیw3ازگندم 69

شکل 4-6- تغییراتبیانژنPAL1آرابیدوپسیسدرپاسخبهباکتریPss،جدایهیp5ازهلو 70

شکل 4-7- تغییراتبیانژنPAL1آرابیدوپسیسدرپاسخبهباکتریPss،جدایهیp8ازگلابی.. 71

شکل 4-8-تغییراتبیانژنJAZ1آرابیدوپسیسدرپاسخبهباکتریPss،جدایهیw3ازگندم 73

شکل 4-9- تغییراتبیانژنJAZ1آرابیدوپسیسدرپاسخبهباکتریPss،جدایهیP5ازهلو 74

شکل 4-10-تغییراتبیانژنJAZ1آرابیدوپسیسدرپاسخبهباکتریPss،جدایهیp8ازگلابی.. 74

شکل 4-11- تغییراتبیانژنJAR1آرابیدوپسیسدرپاسخبهباکتریPss،جدایهیw3ازگندم.. 76

شکل 4-12- تغییراتبیانژنJAR1آرابیدوپسیسدرپاسخبهباکتریPss،جدایهیP5ازهلو.. 77

شکل 4-13- تغییراتبیانژنJAR1آرابیدوپسیسدرپاسخبهباکتریPss،جدایهیp8ازگلابی… 77

امتیاز 0 از 5 از 0 دیدگاه

قیمت اصلی 39,000 تومان بود.قیمت فعلی 21,000 تومان است.

تاریخ ایجاد دی 17, 1399
تاریخ بروزرسانی اسفند 13, 1401
فروش 0
دیدگاه 0

شرایط استفاده از محصول

تمام محصولات به ازای پرداخت پروژه تنها قابل استفاده می باشند. این بدین معنی است که برای استفاده از یک یا چند محصول ، لازم به خرید آن محصول است.

مزایای خرید این محصول:

دسترسی به فایل به صورت همیشگی
پشتیبانی رایگان
پشتیبانی 24 ساعته محصول
بازگشت وجه در صورت عدم رضایت مشتری

مشاهده قوانین سایت