%46تخفیف

تجزیه مقایسه‌ای پروتئوم برگ ارقام گندم کویر و بهار تحت تنش خشکی

تعداد117صفحه در فایل word

گروه به نژادی و بیوتکنولوژی گیاهی

کارشناسی ارشد در رشته بیوتکنولوژی کشاورزی

تجزیه مقایسه‌ای پروتئوم برگ ارقام گندم کویر و بهار تحت تنش خشکی

کلید واژه: پروتئوم گندم، تنش خشکی، الکتروفورز دوبعدی

چکیده

خشکی یکی از مهمترین تنش‌های غیر زیستی در سراسر جهان است. گندم به عنوان یک گیاه زراعی مهم، اغلب در مناطقی کشت می‌شود که حداقل در دوره‌ای از سال با تنش خشکی و کم‌آبی مواجه می‌شود. یکی از راهکارهای شناسایی پروتئین‌های درگیر، در راستای بهبود تحمل گیاه به تنش خشکی، پروتئومیک است که از نتایج آن می‌توان برای افزایش عملکرد گندم استفاده کرد. به منظور بررسی اثر تنش خشکی بر الگوی پروتئوم برگ گندم دو رقم حساس بهار و متحمل کویر، آزمایشی براساس طرح کاملا تصادفی با چهار تکرار انجام شد. تیمار‌ها شامل ترکیب دو رقم کویر و بهار در حالت تنش خشکی و آبیاری عادی بودند. استخراج پروتئین‌های برگی به روش TCA/ استون انجام شد و الگوی بیان پروتئینی با استفاده از الکتروفورز دوبعدی بررسی گردید. پروتئین‌های احتمالی درگیر در تنش خشکی با مقایسه الگوی بیان تحت تنش خشکی با الگوی بیان در آبیاری عادی در هر رقم شناسایی شد. نتایج نشان داد اختلاف بین ‌ترکیبات تیماری برای صفات محتوای آب نسبی برگ، وزن‌تر اندام هوایی، وزن‌تر ریشه، حجم ریشه، و نسبت وزن‌تر ریشه به ‌اندام هوایی در سطح احتمال 1% و برای صفات وزن خشک اندام هوایی، طول ریشه و نسبت طول ریشه به ارتفاع بوته در سطح احتمال 5% معنی‌‌دار است. بررسی الگوی بیان پروتئوم برگ نشان داد که در هر کدام از ارقام 13 لکه (در مجموع 26 لکه) تغییر بیان معنی‌دار از لحاظ آماری و عامل القا یا وجود/عدم وجود دارند. رقم متحمل در مجموع با تعداد 11 لکه با افزایش بیان و وجود در شرایط تنش، پروتئین‌های پاسخ دهنده بیشتری نسبت به رقم حساس با تعداد 8  لکه با افزایش بیان معنی‌دار یا وجود، داشت. این لکه‌های پروتئینی براساس وزن مولکولی (MW) و نقطه ایزوالکتریک (pI) با جستجو در بانک‌های اطلاعاتی مورد شناسایی قرار گرفتند. از بین پروتئین‌های پاسخ دهنده هیچ یک بین دو رقم مشترک نبودند که این نشانگر مکانیسم‌های مختلف دو رقم در مقابله با تنش است. با این حال پروتئین‌های پاسخ دهنده به تنش دو رقم قابل طبقه‌بندی به گروه‌های عملکردی مشابه بودند. این گروه‌ها شامل: « فتوسنتز»، «مسیرهای متابولیکی»، «پاسخ و دفاع در برابر تنش»، «تنش اکسایشی»، «تنفس نوری»، «سنتز و تجمع پروتئین» و «پروتئین‌های با عملکرد ناشناخته» بودند.

مقدمه 1

  1. بررسی منابع 3

1-1 گیاهان و خشکی 3

1-2 واکنش‌های مورفولوژیک در شرایط تنش کم آبی 3

1-3 واکنش‌های فیزیولوژیک در شرایط تنش کم آبی 5

1-3-1 دریافت علایم تنش خشکی 5

1-3-2 غشای پلاسمایی و نقش آن در دریافت علایم تنش خشکی 7

1-3-3 واکنش سیستم فتوسنتزی برگ به شرایط تنش خشکی 8

1-4 اثرات بیوشیمیایی تنش خشکی 12

1-5 مواد حل شونده سازگار و تنظیم اسمزی 15

1-5-1 مکانیسم عمل مواد حل شونده سازگار 16

1-5-2 بیوسنتز مواد حل شونده سازگار 19

1-6 تنش اکسیداتیو 22

1-7 حفاظت ساختارهای سلولی 23

1-8 انتقال پیغام و بیان ژن در طول دوره تنش خشکی 24

1-8-1 دریافت پیام و انتقال به فواصل دور 24

1-8-2 آبسیزیک اسید و واکنش‌های علامت دهنده در سلول‌های محافظ روزنه 25

1-8-3 تنظیم بیان ژن تحت تنش خشکی 28

1-9 پاسخ‌های مولکولی به خشکی در گیاهان مقاوم به خشکی 31

1-10 رهیافت پروتئومیک 32

1-10-1 الکتروفورز دو بعدی 34

1-10-2 کاربرد رهیافت پروتئومیک در مطالعه تنش خشکی گندم 36

اهداف پژوهش 39

  1. مواد و روش‌ها 40

2-1 مواد گیاهی و روش انجام آزمایش 40

2-2 طرح آزمایشی و نحوه اعمال تنش خشکی 40

2-3 صفات مورد اندازه‌گیری 41

2-3-2 وزن خشک اندام هوایی 41

2-3-3 وزن تر ریشه 41

2-3-4 حجم ریشه 41

2-3-5 ارتفاع بوته 42

2-3-6 طول ریشه 42

2-3-7 محتوای آب نسبی برگ (RWC) 42

2-4 الکتروفورز دوبعدی 43

2-4-1 الکتروفورز بعد اول 43

2-4-2 استخراج پروتئین 44

1-12-6 الکتروفورز بعد دوم 47

2-4-3 رنگ‎آمیزی و رنگ‎بری ژل 50

2-4-4 تصویربرداری از ژل‌ها و تجزیه لکه‌های پروتئینی 51

  1. نتایج و بحث 54

3-1 تجزیه واریانس صفات اندازه‌گیری شده 54

3-2 اثر تنش خشکی بر صفات رشدی گیاه 56

3-2-1 محتوای آب نسبی برگ 56

3-2-2 وزن‌تر اندام هوایی و ریشه 57

3-2-3 وزن خشک اندام هوایی 59

3-2-4 حجم ریشه و طول ریشه 60

3-2-5 نسبت طول ریشه به ارتفاع بوته و نسبت وزن‌تر ریشه به وزن‌تر اندام هوایی 62

3-2-6 ارتفاع بوته 64

3-3 تجزیه پروتئوم 65

3-4 نقش پروتئین‌های شناسایی شده تحت تنش خشکی 74

3-4-1 پروتئین‌های درگیر در فتوسنتز 74

3-4-2 پروتئین‌های درگیر در مسیرهای متابولیسم 76

3-4-3 پروتئین‌های درگیر در پاسخ و دفاع در برابر تنش 79

3-4-4 پروتئین‌های درگیر در تنش اکسایشی 79

3-4-5 پروتئین‌های درگیر در تنفس نوری 82

3-4-6 پروتئین‌های درگیر در سنتز و تجمع پروتئین 83

3-4-7 پروتئین‌های با عملکرد ناشناخته 86

نتیجه گیری کلی 87

پیشنهادات 89

منابع 90

جدول ‏1‑1: میزان ضرایب مرحله دوم برای واکنش‌های بین رادیکال‌های هیدروکسیل و ترکیبات گوناگون 18

جدول ‏2‑1: مواد و مقادیر لازم برای تهیه ژل بعد اول (مقادیر برای دو ژل) 44

جدول ‏2‑2: ترکیب محلول استخراج پروتئین 44

جدول ‏2‑3: ترکیب محلول شست‌شو برای استخراج پروتئین 45

جدول ‏2‑4: تهیه ژل جدا کننده (مقادیر برای یک ژل) 48

جدول ‏2‑5: مواد مورد نیاز برای تهیه ژل نگه‌دارنده(برای یک ژل) 48

جدول ‏2‑6: مواد لازم برای تهیه بافر نمونه SDS (SDS-Sample buffer) 49

جدول ‏2‑7: مواد و مقادیر لازم برای تهیه بافر رانش (SDS-PAGE Running buffer) 50

جدول ‏2‑8: مواد لازم برای تهیه محلول رنگی آبی کوماسی 51

جدول ‏2‑9: مواد لازم برای تهیه محلول رنگ‌بری 51

جدول ‏3‑1: تجزیه واریانس صفات مورد مطالعه ارقام گندم در شرایط تنش خشکی 55

جدول ‏3‑2: تعداد لکه‌های پروتئینی پاسخ دهنده به تنش خشکی در دو رقم حساس و متحمل 67

جدول ‏3‑3: گروه‌های عملکردی پروتئین‌های انتخابی به تفکیک ارقام. 71

جدول ‏3‑4: پروتئین‌های درگیر در تنش خشکی در رقم حساس بهار. 72

جدول ‏3‑5: پروتئین‌های درگیر در تنش خشکی در رقم کویر 73

شکل ‏1‑1: حساسیت فرایندهای فیزیولوژیکی و متابولیکی گیاهان نسبت به تنش خشکی 13

شکل ‏1‑2: بسته شدن روزنه‌ها بوسیله آبسیزیک‌اسید 26

شکل ‏1‑3: تنظیم بیان ژن از مسیرهای وابسته به آبسیزیک‌اسید و مستقل از آن در اثر تنش کمبود آب 29

شکل ‏2‑1: شمای آپاراتوس الکتروفورز بعد یک 47

شکل ‏2‑2: آپاراتوس بعد دوم الکتروفورز 50

شکل ‏3‑1: مقایسه میانگین‌ ترکیبات تیماری از لحاظ محتوای آب نسبی برگ. 56

شکل ‏3‑2: مقایسه میانگین ‌ترکیبات تیماری از لحاظ صفات وزن‌تر ریشه و اندام هوایی. 58

شکل ‏3‑3: مقایسه میانگین‌ترکیبات تیماری از لحاظ وزن خشک اندام هوایی. 59

شکل ‏3‑4: مقایسه میانگین‌ ترکیبات تیماری از لحاظ حجم ریشه. 61

شکل ‏3‑5: مقایسه میانگین‌ ترکیبات تیماری از لحاظ طول ریشه. 62

شکل ‏3‑6: مقایسه میانگین‌ترکیبات تیماری از لحاظ صفات نسبت طول ریشه به ارتفاع بوته و نسبت وزن‌تر ریشه به وزن‌تر اندام هوایی. 63

شکل ‏3‑7: پروتئین‌های دارای تفاوت بیان تحت شرایط تنش خشکی در رقم بهار (الف) و در رقم کویر (ب). 66

شکل ‏3‑8: موقعیت لکه‌های پروتئینی انتخابی روی ژل‌های الکتروفورز دو بعدی رقم گندم حساس بهار در حالت آبیاری عادی (بالا) و تنش خشکی (پایین). 68

شکل ‏3‑9: موقعیت لکه‌های پروتئینی انتخابی روی ژل‌های الکتروفورز دوبعدی رقم متحمل کویر در حالت آبیاری عادی (بالا) و تنش خشکی (پایین). 69

شکل ‏3‑10: گروههای عملکردی پروتئین‌های پاسخ دهنده به تنش خشکی 74

شکل ‏3‑11: میزان بیان لکه شماره 4204 (الف) در رقم بهار و 5611 (ب) در رقم کویر تحت شرایط آبیاری عادی و تنش خشکی 75

شکل ‏3‑12: میزان بیان لکه شماره 3101 تحت شرایط آبیاری عادی و تنش خشکی در رقم بهار 77

شکل ‏3‑13: میزان بیان لکه شماره 4617 تحت شرایط آبیاری عادی و تنش خشکی در رقم کویر 79

شکل ‏3‑14: میزان بیان لکه شماره 5101 (الف) و 6105 (ب) تحت آبیاری عادی و تنش خشکی در رقم بهار 80

شکل ‏3‑15: میزان بیان لکه شماره 4505 (الف) و 4201 (ب) تحت شرایط آبیاری عادی و تنش خشکی در رقم کویر 81

شکل ‏3‑16: میزان بیان لکه شماره4903  در رقم بهار تحت آبیاری عادی و تنش خشکی 82

شکل ‏3‑17: میزان بیان لکه شماره 5603  در رقم کویر  تحت آبیاری عادی و تنش خشکی 83

شکل ‏3‑18: میزان بیان لکه شماره 5503  (الف) و 3205 (ب) تحت آبیاری عادی و تنش خشکی در رقم کویر 84

شکل ‏3‑19: میزان بیان لکه شماره 5204 (الف) و 4107 (ب) تحت شرایط آبیاری عادی و تنش خشکی در رقم کویر 85

شکل ‏3‑20: میزان بیان لکه شماره 7102 تحت شرایط آبیاری عادی و تنش خشکی در رقم بهار 86

قبلا حساب کاربری ایجاد کرده اید؟
گذرواژه خود را فراموش کرده اید؟
Loading...
enemad-logo