تاثیر پروتئین نوترکیب  OprF در ایجاد ایمنی علیه سودوموناس آئروجینوزا

تعداد132صفحه در فایل word

دکتری حرفه ای

تاثیر پروتئین نوترکیب  OprF در ایجاد ایمنی علیه سودوموناس آئروجینوزا

چکیده       

مقدمه و هدف: سودوموناس آئروجینوزا (Pseudomonas aeruginosa) مقام سوم ايجاد عفونتهاي بيمارستاني و مقام اول در بخش سوختگي را دارا است. مقاومت بالاي اين باکتری نسبت به مواد ضد میکروبی از جمله آنتی بیوتیک ها باعث پيچيده تر شدن درمان عفونتهاي ناشي از اين باكتري شده است و بنابراین محققان تمرکز فعالیت های خود را روی تحقیقات واکسن گذاشته اند. آزمایشات بالینی متعددی نشان می دهد که فلاژل و دو پروتئین غشا خارجی به نام هایOprF  و  OprIاز نظر توالی های مربوط به خاصیت آنتی ژنی در سویه های مختلف باکتری P. aeruginosa حفاظت شده اند. بنابراین ایمن سازی با آنتی ژن حفاظت شده ای مانند OprF می تواند در مبارزه با بیشتر یا تمام سروتیپ هایP. aeruginosa امید بخش باشد. با این نگرش این تحقیق  با هدف ایمنی زایی پروتئین نوترکیب OprF علیه سودوموناس آئروجینوزا طراحی و مورد بررسی قرار گرفت.

روش اجرای پژوهش: ابتدا  ژن  OprF با روش PCR تکثیر و پس از هضم با آنزیم های محدودگر HindIII و Xho I واکنش الحاق توسط آنزیمDNA لیگازT4در وکتور pET28a(+) انجام شد. پلاسمیدDNA نوترکیب به سلول مستعد E. coliBL21)DE3) به عنوان میزبان بیانی انتقال و پروتئین بیان شده پس از تایید و تخلیص به مدل های سوختگی حیوانی در گروه های مختلف موش تزریق و نتایج مورد ارزیابی قرار گرفت.

یافته ها و نوآوری پژوهش: موش هایBALB/c با استفاده از پروتئینOprF ایمن و تیتر آنتی بادی با آزمایش الایزا تعیین شد. به منظور ارزیابی ایمنی سطح مشخصی از موش های ایمن را سوزانده و با P. aeruginosa مورد چالش قرار دادیم. کاهش معنی داری (p <0.001)  درمیزان باکتریها در پوست، خون وارگان های داخلی بدن در موش ایمن آلوده به سودوموناس نسبت به گروه کنترل مثبت مشاهده شد. داده ها نشان می دهد کهIgG ضدOprF نقش مهمی در مهار گسترش سیستمیک سودوموناس ازناحیه عفونت به ارگان های داخلی بدن ایفا می کند. ایمنی با پروتئینOprF مانع گسترش عفونت در بدن میزبان گردید.

نتیجه گیری:OprF می تواند به عنوان کاندیدای واکسن برای مقابله با P. aeruginosa پیشنهاد شود.

کلیدواژه: سوختگی، واکسن،OprF، سودوموناس آئروجینوزا