تاثیر استرس دوران بارداری مادر بر کورتکس مخچه وارزیابی آستانه تشنج توله ها در موش های سوری نژاد NMRI

 

فصل اول: کلیات       

مقدمه. 13

1-1 انواع استرس:.. 15

1-2 بررسي هاي آزمايشگاهي ايجاد استرس.. 15

1-3 عملکرد بدن در مقابل استرس.. 16

1-4 نوروآناتومي پاسخ استرسي.. 17

1-5 كنترل نورو آندوكريني پاسخ به استرس.. 20

1-6 CRF و استرس.. 20

1-7 CRF و بيان بيش از حد رسپتور CRF1 در پاسخ به استرس.. 21

1-8 وازوپرسين (Vasopressin). 21

1-9 استرس و تمایل به مصرف مواد مخدر. 22

1-10 استرس دوران بارداری.. 22

1-11 مخچه و تکوین آن. 23

1-12 تاثیر استرس دوران بارداری روی تکوین سیستم نورونی فرزندان. 26

1-13 تغییرات مخچه در اثر استرس دوران بارداری.. 26

1-14 تشنج (Seizure). 27

1-15 رابطه استرس با تشنج. 28

1-16 پنتیلن تترازول (PTZ). 28

1-17 پیشینه تحقیقات.. 30

1-17-1 تحقیقات انجام شده در مورد تاثیر استرس دوران بارداری بر رفتار های صرعی فرزندان. 30

1-17-2 تحقیقات انجام شده در مورد تاثیر استرس دوران بارداری بر تکامل مخچه فرزندان. 31

1-18 اهداف.. 32

فصل دوم: مواد و روش ها

2-1 دستگاه ها و ابزار مورد نیاز. 34

2-2 مواد مورد نیاز. 35

2-3 انتخاب حیوان. 36

2-3-1 رده بندی علمی موش سوری.. 36

2-3-2 برخی از ويژگی های بيولوژيکی و توليد مثلی موش سوری.. 37

2-4 نحوه  انجام آزمایش تشنج. 39

2-4-1 نحوه ایجاد استرس بی حرکتی در موش باردار. 40

2-4-2  نحوه تزریق PTZ 41

2-5 نحوه کشتن حیوان. 41

2-5-1 وسایل و مواد لازم جهت نمونه برداری.. 42

2-5-1-1 نحوه انجام نمونه برداری.. 42

2-6 تهیه ى برش 42

2-6-1 ثابت کردن بافت Fixation) ). 42

2-6-2 پاساژ بافتی (Tissue processing) 43

الف: آبگیری (Dehydration) 43

ب: شفاف سازی (Clearing) 44

ج: آغشتگی (Impregnation) 44

د: قالب گیری Embedding) ). 45

ه : برش گیری (Sectioning) 45

2-6-3 رنگ آمیزی.. 47

2-6-3-1 طریقه ساخت رنگ هماتوکسیلین. 47

2-6-3-2 طریقه ساخت رنگ ائوزین. 47

2-6-3-3 روش رنگ آمیزی (Staining) 48

2-7 چسباندن لامل. 50

2-8 مطالعه بافت شناسی.. 50

2-8-1 شمارش سلول های موجود در لایه های کورتکس مخچه. 50

2-8-2 شمارش تعداد سلول های پورکینژ. 50

2-8-3 نحوه مطالعه هیستومورفومتری.. 51

2-8-3-1  نحوه اندازه گیری ضخامت لایه های کورتکس مخچه. 51

2-8-3-2 نحوه اندازه گیری مساحت سلول های پورکینژ. 51

2-9 تجزیه تحلیل آماری: 51

2-10 ایمونوهیستوشیمی.. 51

TUNEL. 53

فصل سوم: نتایج

نتایج استرس دوران بارداری بر آستانه تشنج توله ها 56

نتایج استرس دوران بارداری بر تراکم سلول های لایه گرانولار و مولکولار مخچه. 57

نتایج استرس دوران بارداری بر تعداد سلول های پورکینژ مخچه. 58

نتایج میانگین مساحت سلول های پورکینژ در اثر استرس دوران بارداری.. 59

نتایج میانگین ضخامت لایه های مخچه در استرس دوران بارداری.. 60

نتایج ایمونوهیستوشیمی آنتی بادی Ki67. 61

نتایج ایمونوهیستوشیمی مرگ سلولی در نواحی مختلف کورتکس مخچه. 62

فصل چهارم: بحث و نتیجه گیری

بحث:.. 64

نتیجه گیری.. 72

پیشنهادات.. 72

فصل پنجم: منابع

منابع فارسی و انگلیسی……………………………………………………………………………………………………………71

Abstract. 82

فهرست اشکال

شکل 1-1 ریتم چرخه استرس در بدن انسان————————————————————————–14

شکل 1-2 ریتم چرخه استرس و عملکرد محور HPA قشر فوق کلیه به هنگام استرس—————————————-16

شکل 1-3 چرخه مغزی مداخله کننده در تنظیم نوروآندوکرینی پاسخ به استرس———————————————18

شکل 1-4 دیاگرام شماتیک از CNSموش در روز 5/9 جنینی————————————————————24

شکل 1-5 ساختار و اتصالات عصبی مخچه موش بالغ——————————————————————-24

شکل 1-6 بررسی تکوین مخچه————————————————————————————25

شکل 2-1 انجام تست اسمیر————————————————————————————–39

شکل 2-2 دستگاه القاء استرس بی حرکتی—————————————————————————41

شکل 2-3 دستگاه پردازش بافتی———————————————————————————–43

شکل 2-4 دستگاه توزیع پارافین————————————————————————————45

شکل 2-5 دستگاه میکروتوم—————————————————————————————46

شکل 3-1 تصاویر میکروسکپی از نواحی مختلف کورتکس مخچه در گروه های مختلف جهت بررسی تعداد سلول ها در لایه مولکولار و گرانولار——————————————————————————————————–57

شکل 3-2 تصاویر میکروسکپی از نواحی مختلف کورتکس مخچه در گروه های مختلف جهت بررسی تعداد سلول های پورکینژ———-58

شکل 3-3 تصاویر میکروسکپی از نواحی مختلف کورتکس مخچه در گروه های مختلف جهت بررسی مساحت سلول های پورکینژ.——–59

شکل 3-4 تصاویر میکروسکپی از نواحی مختلف کورتکس مخچه در گروه های مختلف جهت بررسی ضخامت لایه های مولکولار و گرانولار کورتکس مخچه————————————————————————————————–60

شکل 3-5 تصاویر میکروسکپی از نواحی مختلف کورتکس مخچه پس از انجام ایمونوهیستوشیمیki67———————–61

شکل 3-6 تصاویر میکروسکپی از نواحی مختلف کورتکس مخچه پس از انجام ایمونوهیستوشیمی Tunel—————–62

فهرست نمودارها

نمودار1: میانگین آستانه تشنج پس از دریافت PTZ در دو گروه استرس دیده و بدون استرس————————————-56

نمودار2: میانگین تعداد سلول ها در لایه های مولکولار و گرانولار مخچه——————————————————57

نمودار3: میانگین تعداد سلول های پورکینژ در کورتکس مخچه گروه های مختلف ———————————————58

نمودار 4: میانگین مساحت سلول های پورکینژ کورتکس مخچه در گروه های مختلف ———————————59

نمودار 5: میانگین ضخامت لایه مولکولار و گرانولار کورتکس مخچه در گروه های مختلف ——————————-