%53تخفیف

بررسی پلی مورفیسم¬های T-786C و G894T در ژن آنزیم نیتریک اکسید سنتتاز اندوتلیالی (eNOS) و بررسی ارتباط آنان با سطح نیتریک اکسید سرمی در افراد سالم غیر خویشاوند استان لرستان

Name: بررسی پلی مورفیسم¬های T-786C و G894T در ژن آنزیم نیتریک اکسید سنتتاز اندوتلیالی (eNOS) و بررسی ارتباط آنان با سطح نیتریک اکسید سرمی در افراد سالم غیر خویشاوند استان لرستان
SKU: 5521
Price: 210000 IRR
Availability: InStock

تعداد 119 صفحه در فایل word

چکیده

مقدمه: نیتریک اکسید دارای نقش‌هایی حیاتی همچون جلوگیری از تجمع پلاکت‌ها و کاهش اتصال لکوسیتها به سلول‌های اندوتلیال عروق، تنظیم عملکرد سلول‌های اندوتلیال و کنترل فشارخون است. این مولکول توسط آنزیم نیتریک اکسید سنتازاندوتلیالی در سلول‌های اندوتلیال سنتز می‌شود.

جایگاه ژن eNOS بر روی کروموزوم شماره 7 (7 q35-q36) قرار داشته و شامل 26 اگزون است. پلی مورفیسمهای ژن eNOS در اقوام و نژادهای گوناگون متفاوت بوده و انتظار می‌رود که وجود این پلی مورفیسمها کاهش سطح سرمی NO را به همراه داشته باشد. هدف از انجام این مطالعه بررسی شیوع دو پلی مورفیسم شایع ژن eNOS به نام‌های T-786C و G894 در استان لرستان در افراد سالم غیر خویشاوند بود. ارتباط بین این موتاسیونها و سطح سرمی نیتریک اکسید نیز بررسی شد.

روش انجام تحقیق: از دویست فرد غیر خویشاوند که سلامت آنان توسط پزشک متخصص تائید شده بود، با کسب رضایت آگاهانه خون‌گیری در ضد انعقاد EDTA به عمل آمد و بلافاصله استخراج DNA انجام شد. برای تشخیص پلی مورفیسمها از روش[1]PCR-RFLP استفاده شد. یک نمونه سرم نیز برای اندازه‌گیری سطح سرمی نیتریک اکسید با روش گریس گرفته می‌شد.

نتایج: شیوع ژنو تیپ‌های GG,GT, و TT در پلی مورفیسم G894T در 192 نمونه، به ترتیب 3/33,7/55 و 9/10 بود که در مقایسه اندازه NO بین این ژنو تیپ‌ها تفاوت معنی‌داری مشاهده نشد. در بررسی شیوع پلی مورفیسم T786C, فراوانی ژنو تیپ TT,TC و CC به ترتیب 1/40, 6/52 و 3/7 بود که سطح سرمی NO در این ژنو تیپ‌ها تفاوت معنی‌داری را با پلیمورفیسم نشان داد

بحث و نتیجه‌گیری:

شیوع پلی مورفیسمهای T-786C و G894T در افراد سالم استان لرستان تقریباً مشابه با شیوع در سایر نقاط جهان است.

لغات کلیدی: نیتریک اکسید، نیتریک اکسید سنتاز اندوتلیالی، پلی مورفیسم G894T، پلی مورفیسم T786C. استان لرستان

[1]Restriction fragment length polymorphism

دسته: زیست شناسی, علوم تجربی برچسب: پلی مورفیسم G894T, پلی مورفیسم T786C. استان لرستان, لغات کلیدی: نیتریک اکسید, نیتریک اکسید سنتاز اندوتلیالی

توضیحات
نظرات (0)

فهرست مطالب

عنوان صفحه

فصل اولمقدمه 1

1-1-ماهیت شیمیایی مولکول اکسید نیتریک.. 2

1-2-وجود NOدر بدن و چگونگی سنتز آن. 3

1-3- ایزو فرم‌های آنزیم نیتریک اکسید سنتاز 5

1-4-تفاوت‌های بین ایزو فرم‌هایNOS. 7

1-5-دلایل وجود آنزیم‌هاگوناگون. 10

1-6-ژن کد کننده eNOS و پلی مورفیسم های آن. 12

1-7-سایر عوامل تنظیم‌کننده تولید نیتریک اکسید. 13

1-8-عواملی که NO به‌وسیله آن‌ها اثرات زیستی خود را اعمال می‌کند. 15

1-9-ویژگی‌هایآنزیم مورد هدف NO.. 18

1-10-محصول sGCو اثرات فیزیولوژیکی آن. 19

1-11-مسیر سیگنالینگ برای NO و GMP حلقوی در سلول‌هایماهیچه‌ای صاف و پلاکت‌ها 21

1-11-1 سیگنالینگ NO در ماهیچه صاف.. 21

1-11-2-سیگنالینگ NO در پلاکت‌ها 23

1-12-واکنش NOبا دیگرگونه‌های واکنش‌پذیر اکسیژن. 26

1-12-1-نیتروزاسیون گروه تیولپروتئین‌ها واهمیت آن. 28

1-12-2-تشکیل پروکسی نیتریت و اهمیت آن. 30

1-13-NOSIII وفعالیت‌های ماکروفاژ 31

1-14- نیتراسیون پروتئین‌ها تحت شرایط فیزیولوژیکی نرمال. 32

1-15-اکسید نیتریک و تنظیم رشد سلولی و تولید پروتئین. 34

1-16-اثر اکسید نیتریک روی بیان ژن. 34

1-17-بیان مسئله 35

1-18-اهداف.. 36

1-19- جامعه‌ی موردمطالعه 36

1-20- رعایت اصول اخلاقی پژوهش… 37

1-21-تجزیه‌وتحلیل آماری: 37

فصل دوم مواد و روش‌ها

2-1-مواد و دستگاه‌ها 39

2-1-1 مواد شیمیائی: 39

2-1-2-محلول‌ها 39

2-1-3-دستگاه‌ها 40

2-2- روش کار 41

2-2-1-نمونه‌گیری. 41

2-2-2-روش استخراج DNA.. 42

2-2-3-جداسازی گلبول‌های سفید با استفاده از فایکول. 42

2-2-4- استخراج DNA با استفاده از کیت.. 43

2-3-بررسی کمی و کیفیDNAاستخراج‌شده 46

2-3-1-روش اسپکتوفتومتر. 46

2-3-2- روش نانودراپ.. 47

2-3-3-روش ژل الکتروفورز 48

2-4-الکتروفورز 48

2-4-1-وسايل و مواد موردنیاز در الكتروفورز 48

2-4-2 آگارز 49

2-4-3-رنگ simply safe. 50

2-4-4-ترکیبات وطرز تهیه TBE(Tris-borate-EDTA) 50

2-4-5- Loading Buffer 51

2-4-6-DNA سایز مارکر (Ladder) 51

2-4-7-طرز تهیه ژل الکتروفورز 52

2-4-8-طريقه بارگذاری كردنRunning Procedure. 53

2-4-9-روش كار دستگاه ژل داك (Gel Doc) 54

2-4-10-شناسایی و بررسی باندها 55

2-5-تکنیک Polymerase Chain Reaction) PCR) 55

2-5-1-حداقل عوامل موردنیاز برای یك واكنش PCR. 56

2-5-1-1- DNA ی الگو. 57

2-5-1-2- پرایمرهای Forward و Reverse 57

2-5-1-3-Taq polymerase 59

2-5-1-4-دزوکسی نوکلئونید تری فسفات‌ها (dNTPs) 60

2-5-1-5- بافرها وMgCl2. 60

2-5-2-پارامترهای مؤثر در PCR. 61

2-5-3- عواملی كه موجب كاهش بازده PCRمی‌شوند. 62

2-5-4-تعیین دمای Annealing پرایمرها جهت PCRژن‌ها 63

2-5-5-انجام PCRSet Up در این مطالعه 63

2-6-پروتکل PCR در این مطالعه 65

2-7-تکنیکRFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) 66

2-7-1-پروتکل انجام RFLPژن‌هایموردمطالعه 68

2-7-2-بررسی پلی مورفیسم در پروموترژن eNOs درموقعیت T786C. 68

2-7-3-بررسی پلی مورفیسم در پروموترژن eNOs درموقعیت G894T. 70

2-8-اندازه‌گیری نیتریک اکسید در خون. 73

2-8-1-مواد لازم برای ساخت معرف گریس… 73

2-8-2-طرز تهیه 74

2-8-3- روش تهیه منحني استاندارد 74

فصل سوم یافته‌ها

3-1-نتایج الکتروفورز جهت تائیدDNA استخراج‌شده: 76

3-2- تعیین غلظت نمونه‌هایDNA با روش اسپکتروفتومتری. 76

3-3-نتایج حاصل از PCR: 77

3-3-1- PCR پلی مورفیسم G894T. 77

3-3-2- PCR پلی مورفیسم T786C. 77

3-4-هضمتوسط آنزیم Ban II 79

3-5-هضم توسط آنزیم Msp I 79

3-6- نتایج حاصل از بررسی پلی مورفیسمG894T. 80

3-7-نتایج حاصل از بررسی درصد فراوانی ژنو تیپT786C. 81

3-8-نتایج حاصل از ارتباط سطح نیتریک اکسیددر خون با پلی مورفیسم G894T. 82

3-9-نتایج حاصل از ارتباط سطح نیتریک اکسید در خون با پلی مورفیسم T786C. 83

3-10-نتایج حاصل از بررسی NO در افرادی که دارای هردو موتانت هستند با افراد دارای یک نوع موتانت یا فاقد موتانت 84

فصل چهارم بحث و نتیجه‌گیری

4-1-بحث و نتیجه‌گیری. 88

منابع. 97

فهرست جدول‌ها

جدول 2-1- ترکیبات وحجم مواد مورد نیاز برای ساخت 500لیتر محلول استوک بوریک اسید . 50

جدول (2-2)- ترکیبات به کار رفته در لودینگ بافر. 51

جدول 2-3- بعد از انجام گرادیانت دمایی بهترین دمای انلینگ و سایر مراحل PCR برای پلی مورفیسم G894T به صورت بالاانجام شد. 64

جدول 2-4- برای پلی مورفیسم T786C بعد از انجام گرادیانت دمایی و انتخابمناسب‌ترین دمای انلینگ طبق جدول بالاPCR انجام شد. 64

جدول 2-5.برای انجام PCR ازMaster Mix آماده استفاده شد و کل مواد واکنش PCR در پایان به حجم 25 میکرولیتر می رسند. 66

جدول 2-6-پرایمر های طراحی شده برای انجام PCR برای هردو پلی مورفیسم. 67

جدول 2-7-پروتکل هضم آنزیم MspI 68

جدول 2-8- قطعات حاصل از برش آنزیم MspI در پلی مورفیسم T786C. 70

جدول2-9-پروتکل هضم آنزیم BanII 71

جدول 2-10-قطعات حاصل از هضم آنزیمیBanII روی PCR پلی مورفیسم G894T. 72

جدول 3-1- فراوانی به دست آمده از واریانت های پلی مورفیسم G894T در این مطالعه 80

جدول 3-2- فراوانی حاصل از بررسی واریانت های T786C در این مطالعه 81

جدول3-3- میانگین NO بر میکرو مول بر لیتر در کل افراد در بین سه ژنو تیپG894T. 82

جدول 3-4- میانگین NOبرحسب میکرو مول بر لیتر در کل افراد در بین سه ژنو تیپT786C. 83

جدول 3-5- میانگین مقدار NO در افراد دارای موتانت از هر دو نوع پلی مورفیسم (کد3), افراد دارای یک نوع موتانت(کد2) و فاقد موتانت (کد 1) 85

فهرست نمودارها

نمودار3-1- نمودار فراوانی انواع زنوتیپ های پلی مورفیسم G894T در این مطالعه. 81

نمودار 3-2-نمودار فراوانی انواع ژنوتیپ های پلی مورفیسم T786C در این مطالعه 82

نمودار 3-3- نمودار میانگین مقدار NO در هریک از ژنوتیپ های پلی مورفیسم G894T. 83

نمودار3-4-نمودار میانگین مقدار NO در هریک ازژنوتیپ های پلی مورفیسم T786C. 84

نمودار 3-5-میانگین مقدار NO در افراد دارای موتانت از هر دو نوع پلی مورفیسم (کد3), افراد دارای یک نوع موتانت(کد2) و فاقد موتانت (کد 1) 86

فهرست شکل‌ها

شکل 1-1 بیوسنتز نیتریک اکسید. 4

شکل (1-2) چگونه متابولیسم NO متناسب با متابولیسم نیتروژن در بدن است.. 5

شکل (1-3) ساختار ایزو فرم‌های مختلف NOs و چگونگی فعال شدن آنها 8

شکل (1-4) کارکرد های فیزیولوزیکی هر یک از ایزوفرم ها 10

شکل (1-5) چگونه استروژن باعث افزایش ترشح NO می‌شود. 12

شکل (1-6) 14

شکل (1-7): نقشNO مشتق شده از اندوتلیوم در تنظیم فشارخون و فعال‌سازیپلاکت‌ها 17

شکل (1-8): ساختاراولیه‌ی پروتئین گوانیلات سیکلاز محلول و فعال شدن آن به شکل GMP حلقوی توسط NO.آنزیم یک هترودیمر با یک جزء همی است که برای اتصال NO و فعال شدن آنزیم ضروری است. 17

شکل (1-9): تنظیم غلظت GMP حلقوی توسط گوانیلیل سیکلاز محلول وفسفودی استراز (PDE)V. 19

شکل (1-10): مکانیسمی که NO توسط آن انقباضاتسلول‌هایعضله‌ی صاف را کاهش می‌دهد.GMP. 22

شکل (1-11): مکانیسم مهار فعال شدن پلاکت‌هاتوسط NO. 25

شکل (1-12): برهمکنش‌های اکسید نیتریک با دیگر تنظیم‌کننده‌های عروقی که از اندوتلیوم یا پلاکت‌ها ترشح می‌شوند. انواعپیام‌رسان‌های اصلی داخل سلولی نشان داده‌شده‌اند. 27

شکل 3-1- تصویر ژل الکتروفورز جهت تائیدDNAاستخراج‌شده. 76

شکل 3-2-نتیجه الکتروفورز چند نمونه PCR شده از پلی مورفیسم G894T که در باند 250 قرار گرفته اند. 77

شکل 3-3-نتیجه الکتروفورز حاصل از PCR چند نمونه برای پلی مورفیسم T786C ومشاهده شده باند 180 روی ژل الکتروفورز 78

شکل 3-4-بعد از هضم آنزیمی محصولات PCR پلی مورفیسم G894T توسط آنزیم Ban II قطعات 163 و85 در حالتی که فاقد موتانت است مشاهده شد و در حالتی که دارای موتانت بود فاقد برش بود یعنی همان 250 مشاهده شد. ودر صورتی که هتروزیگوت بود برش های 163 و85و250 هر سه مشاهده شد. 79

شکل 3-5- پس از هضم آنزیمی محصولات PCR پلی مورفیسم T786C توسط آنزیم MspI در صورت داشتن موتانت هضم شده وباندهای 90و40 و50 ایجاد می‌شود ودر صورت داشتن آلل وحشی 140و40 ایجاد شده و در صورت هتروزیگوت بودن باند های 140،50 و90 ایجاد می‌شود. 80

نقد و بررسی‌ها

هنوز بررسی‌ای ثبت نشده است.

اولین کسی باشید که دیدگاهی می نویسد “بررسی پلی مورفیسم¬های T-786C و G894T در ژن آنزیم نیتریک اکسید سنتتاز اندوتلیالی (eNOS) و بررسی ارتباط آنان با سطح نیتریک اکسید سرمی در افراد سالم غیر خویشاوند استان لرستان”