بررسی واکنش ترانسپورتر دارویی MDR1 با تیموکینون حاصل از گیاه سیاه دانه

توضیحات

بررسی واکنش ترانسپورتر دارویی MDR1 با تیموکینون حاصل از گیاه سیاه دانه

تعداد94صفحه در فایل word

گروه بیوتکنولوژی و به نژادی گیاهی

کارشناسی ارشد

بررسی واکنش ترانسپورتر دارویی MDR1 با تیموکینون حاصل از گیاه سیاه دانه

کلید واژه ها: ترانسپورتر های دارویی ، تیموکینون ، سیاه دانه ، مقاومت چند دارویی

فهرست مطالب

فصل اول: مقدمه

1- مقدمه………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 1

فصل دوم: بررسی منابع

2-1 سياه دانه و تيموکينون………………………….. 5

2-1-1 تركيبات شيميايي گياه سياه­دانه…………………………………………………………………. 7

2-1-2 اثرات دارویی عصاره سیاه دانه…………………………………………………………………….. 8

2-2 اثرات ضد سرطانی تیموکینون…………………………………………………………………………………… 9

2-2-1 سميت سلولي تيموكينون……………………………………………………………………………………………. 10

2-2-2 تقویت اثر داروهای ضدسرطان……………………………………………………………………………… 11

2-2-3 پيشگيري از سرطان زايي مواد………………………………………………………………………….. 11

2-2-4 مهار متاستاز……………………………………………………………………………………………………………………. 11

2-2-5 كاهش عوارض سرطان و نيز كاهش عوارض درمان­هاي معمول سرطان 12

2-3 مقاومت دارویی در سرطان………………………… 12

2-3-1 مکانیسم‌های مقاومت دارویی………………………………………………………………………………….. 13

2-4 ترانسپورترهای خانواده ABC………………………. 13

2-4-1 ژن MDR1……………………………………… 15

2-4-2 گلیکوپروتئین P-gp (MDR1,ABCB1)……………………. 15

2-4-2-1 نحوه عملکرد MDR1…………………………… 16

2-4-2-2 بیان MDR1 در بافت های نرمال………………….. 17

2-4-2-3 نقش فیزیولوژیک MDR1در فارماکوکینیتیک داروها……. 18

2-5 مهار ترانسپورترهای ABC…………………………. 19

2-6 ارتباط بین تیموکینون و ترانسپورترهای ABC…………. 19

2-7 اهداف مطالعه………………………………….. 21

فصل سوم:مواد و روش ها

3-1 مواد، بافرها، محيط کشت ها و دستگاه هاي مورد استفاده در آزمايشات 23

3-2 کشت سلولي…………………………………….. 23

3-2-1 کشت سلول های منجمد شده……………………….. 23

3-2-2 تعویض محیط سلول ها…………………………… 24

3-2-3 تریپسینه کردن سلول ها………………………… 24

3-2-4 شمارش سلولی…………………………………. 25

3-2-5 پاساژ (واکشت) سلول ها………………………… 25

3-2-6 منجمد کردن سلول ها…………………………… 26

3-3 تست MTT………………………………………. 26

3-3-1 معرفی تست MTT ………………………………. 26

3-3-2 تیمار سلول های PG85-257Pو EPG85-257RDB با غلظت های مختلف تیموکینون برای انجام تست MTT…………………………………….. 27

3-3-2-1 آماده سازي غلظت هاي مختلف تيموکينون…………… 28

3-3-3 تیمار سلول های PG85-257Pو EPG85-257RDB با غلظت های مختلف دوکسوروبیسین برای انجام تست MTT…………………………………….. 29

3-3-3-1 آماده سازي غلظت هاي مختلف دوکسوروبیسین………… 29

3-3-4 تیمار سلول های PG85-257Pو EPG85-257RDB با غلظت های مختلف تیموکینون و دوکسوروبیسین برای انجام تست MTT…………………….. 30

3-3-4-1 آماده سازي غلظت هاي مختلف تيموکينون و دوکسورویسین 30

3-4 مقدمه ای بر روش HPLC……………………………. 30

3-4-1 شرایط کروماتوگرافی برای اندازه گیری تیموکینون…… 31

3-4-2 تهیه منحنی استاندارد تیموکینون در محیط متانولی….. 31

3-4-3- تهیه منحنی کالیبراسیون تیموکینون در محیط کشت کامل. 31

3-4-4- تهیه منحنی کالیبراسیون تیموکینون در زمان های مختلف در محیط کشت RPMI 1640 …………………………………………….. 32

3-4-5- ارزیابی میزان تیموکینون وارد شده به سلول EPG85-257RDB در محیط کشت RPMI 1640 …………………………………………….. 33

3-4-6 ارزیابی میزان خروج تیموکینون در محیط کشت سلول EPG85-257RDB از طریق پمپ MDR1…………………………………………….. 33

3-4-7 ارزیابی میزان خروج تیموکینون در محیط کشت سلول EPG85-257RDB از طریق پمپ MDR1 با روش Aditional Standard…………………………….. 34

3-5 مطالعات Molecular Docking…………………………….. 35

3-5-1 مقدمه ای بر مطالعات Molecular Docking………………… 35

3-5-2 مراحل آماده سازی انجام Docking ………………….. 36

3-5-2-1 جستجو در بانک های اطلاعاتی وآماده سازی مولکول پروتئین MDR1 36

3-5-2-2 آماده سازی ساختار مولکول های وین بلاستین، وراپامیل و تیموکینون 36

3-5-3 فرآیند داکینگ……………………………….. 37

3-5-3-1 بر هم کنش بین پروتئین MDR1 و سوبسترای اختصاصی آن.. 40

3-5-3-2 بر هم کنش بین پروتئین MDR1 و مهارکننده اختصاصی آن. 40

3-5-3-3 بر هم کنش بین پروتئین MDR1 و تیموکینون………… 40

فصل چهارم: نتايج و بحث

4-1 نتایج به دست آمده از تست MTT……………………. 41

4-1-1 تاثیر تيموکينون بر میزان رشد و تکثیر سلول هاي سرطاني ردهEPG85-257P 41

4-1-2 سميت غلظت هاي مختلف تيموکينون روي سلول هاي سرطاني ردهEPG85-257RDB 43

4-1-3 سميت غلظت هاي مختلف دوکسوروبیسین روي سلول هاي سرطاني ردهEPG85-257P 44

4-1-4 سميت غلظت هاي مختلف دوکسوروبیسین روي سلول هاي سرطاني ردهEPG85-257RDB 45

4-1-5 سميت غلظت هاي مختلف تيموکينون و دوکسوروبیسین روي سلول هاي سرطاني رده EPG85-257P …………………………………………. 47

4-1-6 سميت غلظت هاي مختلف تيموکينون و دوکسوروبیسین روي سلول هاي سرطاني رده EPG85-257RDB………………………………………… 49

4-2 .نتایج به دست آمده از آزمایشات HPLC……………….. 51

4-2-1. رسم منحنی استاندارد تیموکینون ………………… 51

4-2-4 ارزیابی میزان تیموکینون وارد شده به سلول EPG85-257RDB در محیط کشت 54

4-2-5 ارزیابی میزان خروج تیموکینون از سلول های EPG85-257RDB از طریق پمپ MDR1 56

4-3 نتایج به دست آمده از مطالعات Molecular Docking………….. 57

4-3-1 آنالیز برهم کنش پروتئین MDR1 با وین بلاستین………. 57

4-3-2 آنالیز برهم کنش پروتئین MDR1 با وراپامیل…………. 57

4-3-3.آنالیز برهم کنش پروتئین MDR1 با تیموکینون……….. 58

2-1-1 تركيبات شيميايي گياه سياهدانه…………………………………………………………………. 7

2-2-5 كاهش عوارض سرطان و نيز كاهش عوارض درمانهاي معمول سرطان 12