%41تخفیف

دانلود محصول: بررسی میزان شیوع کوکسیلا بورنتی در شیر گاو، تولید شده در ایران به دو روش Nested PCR و Real-time PCR

تعداد 60صفحه فایل word قابل ویرایش

Site: www.filenaab.ir

دانشکده دامپزشکی

  دکترای تخصصی رشته‌ی بهداشت مواد غذایی

بررسی میزان شیوع کوکسیلا بورنتی در شیر گاو، تولید شده در ایران به دو روش Nested PCR و Real-time PCR

 

چکیده

تب كيو يك بيماري مشترک بین انسان و دام است كه عامل آن كوكسيلا بورنتي (Coxiella burnetii) مي­باشد. كوكسیلوز در حيوانات اهلي معمولاً تحت باليني است اگرچه احتمال سقط و مرده­زايي در دام نيز وجود دارد. حيوانات اهلي مهم ترين مخزن كوكسيلا بوده و از طريق شير، ادرار، مدفوع و ترشحات تنفسي و توليد مثلي آن را دفع مي­كنند. استنشاق ریز قطره هاي آلوده، مهم ترين راه آلودگي انسان و حيوانات است. در انسان، بيماري به شكل حاد يا مزمن وجود دارد که در صورت مزمن بودن عامل اندوکاردیت و هپاتیت در انسان می باشد. این مطالعه با هدف بررسی میزان شیوع کوکسیلا بورنتی در شیر گاو تولید شده در ایران به دو روش Real-time PCR و Nested PCR انجام شد. در این مطالعه تعداد۳00 نمونه شیر خام از شهرستان های واقع در سه استان چهارمحال و بختیاری، یزد و اصفهان در چهار فصل جمع آوری گردید و به روش های Nested PCR و Real-time PCR از نظر آلودگی به کوکسیلا بورنتی مورد آزمایش قرار گرفت. در روش Nested PCR در مجموع تعداد ۲۶ نمونه (به ترتیب تعداد 14 نمونه در استان چهارمحال و بختیاری، تعداد 7 نمونه در استان اصفهان و تعداد 5 نمونه در استان یزد) از نظر کوکسیلا بورنتی مثبت بودند و در روش Real-time PCR در مجموع تعداد ۷۴ نمونه (به ترتیب تعداد 33 نمونه در استان چهارمحال و بختیاری، 26 نمونه در استان اصفهان و تعداد 15 نمونه در استان یزد) از نظر کوکسیلا بورنتی مثبت تشخیص داده شدند. آزمون آماری اختلاف مشاهده شده بین استان های چهارمحال و بختیاری با استان های اصفهان و یزد را معنی دار دانست (P< 0.05). نتایج حاصل از این مطالعه نشان داد که روش Real-time PCR از توان بیشتری برای تشخیص آلودگی به کوکسیلا بورنتی برخوردار است. بر اساس نتایج به دست آمده میزان فراوانی کوکسیلا بورنتی درشیر خام در فصول مختلف سال متفاوت است به طوری که در فصول زمستان و بهار بیشتر از سایر فصول است (P< 0.05). هم چنین نتایج این تحقیق حاکی از آن است که میزان شیوع کوکسیلا بورنتی در فرآورده های شیری تولید شده در استان چهارمحال و بختیاری بالاتر است و شیر خام می‌تواند از منابع مهم این میکروارگانیسم به شمار آید.

 

واژگان کلیدی : کوکسیلا بورنتی، شیر خام، Real-time PCR و Nested PCR

شش

فهرست مطالب

عنوان                         صفحه

فصل اول   7

مقدمه  7

فصل دوم  9

کلیات   9

2-1- تاریخچه  9

2-1-1- ریکتزیاله  10

2-1-2-  تب کیو  10

2-1-3- ریخت شناسی   11

2-1-4- کشت و جدا سازی   11

2-1-5-  ساختمان پادگنی   11

2-1-6- واکنش های سرم شناسی   12

2-2-  سبب شناسی   13

2-3-  حساسیت و مقاومت در برابر بیماری   14

2-4- عوامل بیماری زا 14

2-5-  انتشارجغرافیایی   15

2-6-  میزبان  16

2-6-1-  فاکتورهای بیماری زا در کوکسیلا بورنتی   17

2-6-2- کنه های ناقل کوکسیلا بورنتی   18

2-7-  پاتوژنز در حیوانات   18

2-8-  تظاهرات بالینی  در انسان  19

2-9- تشخیص    21

2-10- درمان  22

2-11- پیشگیری و کنترل عفونت کوکسیلا بورنتی   23

2-12-  واکسن   24

2-13- اهميت و ضرورت تحقيق روی وضعیت بهداشتی مواد غذایی   24

2-14- روش های تشخیص کوکسیلا بورنتی   24

2-14-1- روش های تشخیصی   24

2-14-2-  جداسازی و كشت   24

2-14-3-  روش رنگ آمیزی باکتری   25

2-14-4-  روش هاي سرم شناسی   25

2-14-5-  روش ایمونوفلورسانس (Immunofluorescence)  25

2-14-6-  روش میکروایمونوفلورسانس (Microimmunofluorescence). 25

2-14-7-  آزمون الایزا (ELISA)  26

2-14-8-  تست تثبیت کمپلمان  (CFT: complement fixation test). 26

2-14-9-  تست های تشخیص اسید نوکلئیک    27

2-14-10- واکنش زنجیره ای پلی مراز (PCR) ………………………………………………………… 27

2-14-11- روش Real-Time PCR ………………………………………………………………….. 28

2-14-12-  تشخيص افتراقى   28

فصل سوم  30

روش کار 30

3-1- نمونه گیری   30

3-1-1- منطقه مورد پژوهش    30

3-1-2- جمع آوری نمونه  31

3-2- جداسازی رسوب باکتری از شیر  32

3-3- استخراج DNA ژنومی از نمونه ها 32

3-4- روش انجام PCR   32

3-5- مواد و وسایل   33

3-5-1- اتیدیوم بروماید  34

3-5-2- Mix در PCR، خود شامل مواد زیر است : 34

3-5-3- تهیه ژل آگارز 1 درصد  34

3-6- الکتروفورز روی ژل آگارز 34

3-7- PCR آشیانه ای 35

3-8-  Real Time PCR   35

3-9- آنالیز آماری   36

فصل چهارم  37

نتایج   37

4-1- نتایج کیفی مربوط به استخراج DNA   37

4-2- نتایج حاصل از مشاهده نمونه های دارای آلودگی کوکسیلا بورنتی درمرحله اول PCR   38

4-3- نتایج حاصل از مشاهده ی نمونه های دارای آلودگی کوکسیلا بورنتی در مرحله Nested-PCR   38

4-4- نتایجReal Time PCR 40

4-5- مقایسه نتایج دو آزمون Nested-PCR و Real Time PCR   42

فصل پنجم   43

بحث   43

5-1- منطقه جغرافیایی و فصل مورد مطالعه و تاثیر آن بر شیوع  43

5-2- بررسی حساسیت دو روش تشخیصی   44

5-3- پیشنهادات   47

منابع   48

فهرست شکل ها

عنوان                         صفحه

شکل 2-1:  انتشار تب کیو در سطح جهان. 16

شکل4-1:  باند مربوط به استخراج DNA از لبنیات بر روی ژل،چاهک M مارکر 100 bp ،چاهکها نمونه های DNA   37

شکل 4-2: M : مارکر bp 100 ساخت شرکت سینا ژن، چاهک2تا 6: محصولات PCR مرحله اول،چاهک 1: کنترل منفی   38

شکل 4-3:   :Mمارکر bp 100 ساخت شرکت سینا ژن، چاهک2تا5: محصولات Nested-PCR، چاهک 1و6: کنترل منفی   39

فهرست جدول ها

عنوان                         صفحه

جدول شماره 3-1:  پرایمرهای به کار رفته در PCR همراه با توالی و سایز باند آن ها 33

جدول 4-1: جدول میزان فراوانی شیوع کوکسیلا بورنتی در شیر خام استان های چهارمحال و بختیاری، اصفهان و یزد بر اساس نتایح Nested-PCR.. 39

جدول 4-۲: جدول میزان فراوانی کوکسیلا بورنتی در  شیر خام استان های چهارمحال و بختیاری، اصفهان و یزد  بر اساس نتایح Real Time PCR.. 41

فهرست نمودارها

عنوان                         صفحه

نمودار4-1:  فراوانی نسبی کوکسیلا بورنتی در شیر خام در فصول مختلف بر اساس نتایج  Nested-PCR.. 40

نمودار4-2: فراوانی نسبی کوکسیلا بورنتی در شیر خام در فصول مختلف بر اساس نتایج  Real Time PCR.. 41

قبلا حساب کاربری ایجاد کرده اید؟
گذرواژه خود را فراموش کرده اید؟
Loading...
enemad-logo