%46تخفیف

بررسی میزان آلودگی به کریپتوسپوریدیوم پارووم در گوسفندان استان همدان با استفاده از Nested

تعداد72صفحه در فایل word

گروه آموزشي پاتوبیولوژی                 

 

         کارشناسی ارشد در رشته انگل شناسی گرایش دامپزشکی                           

بررسی میزان آلودگی به کریپتوسپوریدیوم پارووم در گوسفندان استان همدان با استفاده از Nested-PCR

چکیده:

کریپتوسپوریدیوم انگل تک‌یاخته داخل سلولی است که معمولاً اپی‌تلیوم دستگاه گوارش را درطیف وسیعی از مهره­داران آلوده می‌کند. تاکنون گونه‌های مختلفی از این تک‌یاخته شناسایی وگزارش شده است.  در این بین کریپتوسپوریدیوم پارووم یکی از گونه‌های مهمی است که دارای اهمیت زئونوتیک است. کریپتوسپوریدیوزیس در حیوانات تولیدکننده ضررهای اقتصادی مهمی را باعث می­شود و یکی از عوامل اصلی بیماری و مرگ و میر در دام‌ها به ویژه دام‌های جوان می باشد و به دلیل تفاوت‌های موجود بین گونه‌ها و ژنوتیپ‌های مختلف از نظر آلودگی ، اپیدمیولوژی‌ و مکانیسم‌های انتقال بیماری ، شناسایی گونه و  ژنوتیپ‌های کریپتوسپوریدیوم در هر منطقه جغرافیایی خاص از اهمیت ویژه­ای برخوردار است. از آنجایی که وضعیت آلودگی کریپتوسپوریدیوم در همدان به ویژه در گوسفند روشن نمی باشد، این مطالعه با هدف شناسایی وضعیت عفونت کریپتوسپوریدیوم پاروم در گوسفندان استان همدان با روش مولکولی انجام گرفت.این بررسی بر روی 41 نمونه DNA استخراج شده از 227 نمونه مدفوع گوسفندانی که از روستاهای مختلف استان همدان جمع‌آوری گردید، انجام شد.آزمایشNested-PCR  جهت تعیین گونه کریپتوسپوریدیوم پاروم بر روی ژن 18S rRNA  انجام گردید و روی ژل آگارز 1درصد با رنگ­آمیزی اتیدیوم بروماید الکتروفورز انجام شد. در نهایت نتایج این بررسی نشان داد که از مجموعه 41 نمونه‌ای که استخراج DNA شده بود فقط دو نمونه آلودگی به کریپتوسپوریدیوم پاروم را نشان دادند(8/4 درصد از نمونه­ها). و با توجه به اینکه آلودگی به کریپتوسپوریدیوم در گوسفند و بز کمتر مورد توجه قرار گرفته و نیز خسارات ناشی از این آلودگی،  لزوم بررسی بیشتر از راه مولکولی در شناسایی آلودگی در سایر نقاط استان و ایران احساس می­شود.

واژه­های کلیدی: کریپتوسپوریدیوم پارووم، Nested-PCR ،گوسفند، همدان،18S rRNA

 

                  مقدمه……………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 1

                 1- فصل اول:کلیات…………………………………………………………………………………………………………………………… 4

1-1- تاريخچه………………………………………………………………………………………………………………………………….. 4

1-2- طبقه‌بندي………………………………………………………………………………………………………………………………. 6

1-3- میزبان‌ها……………………………………………………………………………………………………………………………………7

1-4- چرخه‌ زندگی………………………………………………………………………………………………………………………….. 8

1-5- ریخت شناسی………………………………………………………………………………………………………………………... 9

1-6- راه‌هاي انتقال كريپتوسپوريديوم……………………………………………………………………………………………10

1-6-1- انتقال به وسيله اووسيست‌هاي مقاوم محيطي……………………………………………………………….. 10

1-6-2- انتقال با منشاء عفونت انساني…………………………………………………………………………………………. 11

1-6-3- انتقال از طريق آب آلوده…………………………………………………………………………………………………. 12

1-6-4- انتقال از طريق تنفس هواي آلوده………………………………………………………………………………….. 13

1-7- اپیدمیولوژی………………………………………………………………………………………………………………………….13

1-8- بیماریزایی………………………………………………………………………………………………………………………………14

1-9- نشانه های بالینی در نشخوارکنندگان…………………………………………………………………………………..15

1-10- نشانه های بالینی در انسان…………………………………………………………………………………………………15

1-11- تشخيص كريپتوسپوريديوزيس…………………………………………………………………………………………..16

1-11-1- روش‌هاي تغليظي مدفوع……………………………………………………………………………………………….16

1-11-2- روش‌هاي رنگ‌آميزي……………………………………………………………………………………………………..18

1-11-3- روش‌هاي هيستوپاتولوژي…………………………………………………………………………………………….. 19

1-11-4-روش‌هاي سرولوژي……………………………………………………………………………………………………….. 20

1-11-5- روش‌هاي مولكولي………………………………………………………………………………………………………… 22

1-11-6- روش‌هاي موجود بر مبناي PCR……………………………………………………………………………….. 24

1-12- اجزاء واکنش    PCR……………………………………………………………………………………………………… 25

1-13- درمان وکنترل……………………………………………………………………………………………………………………. 28

1-14- مروري بر مطالعات پیشین انجام شده روي كريپتوسپوريديوم………………………………………… 28

                    2- فصل دوم : مواد و روش­کار………………………………………………………………………………………………………. 38

2-1- جمع آوری نمونه و جداسازی اووسیست…………………………………………………………………………….. 38

2-1-1- استخراج DNA از اووسیست………………………………………………………………………………………… 38

2-2- روش کار………………………………………………………………………………………………………………………………. 40

2-2-1- مرحله اولPCR……………………………………………………………………………………………………………… 40

2-2-2- مرحله Nested-PCR…………………………………………………………………………………………………  41

2-3- الكتروفورز DNA روي ژل آگارز……………………………………………………………………………………….. 42

2-3-1- تهيه ژل آگارز 1%……………………………………………………………………………………………………………..43

2-3-2- الکتروفورز نمونه‌ها…………………………………………………………………………………………………………… 43

                    3- فصل سوم: نتایج و بحث…………………………………………………………………………………………………………… 45

3-1- نتایج Nested-PCR………………………………………………………………………………………………………… 45

3-2- بحث…………………………………………………………………………………………………………………………………….. 48

3-3- جمع بندی…………………………………………………………………………………………………………………………… 53

3-4- پیشنهادات…………………………………………………………………………………………………………………………… 53

                    4- منابع…………………………………………………………………………………………………………………………………………. 55

                                                                       فهرست اشکال

عنوان                                                                                                                                                  صفحه

شکل ‏1‑1: چرخه زندگی انگل کریپتوسپوریدیوم پارووم……………………………………………………………………………….. 9

شکل ‏3‑1: الکتروفورز محصول PCR مرحله اول مربوط به 5 نمونه DNA استخراج شده……………………… 45

شکل ‏3‑2: الکتروفورز محصول Nested-PCR مربوط به 2 نمونه مثبت در مرحله اول…………………………. 46

 

 

 

                                                              فهرست جداول

عنوان                                                                                                                      صفحه

جدول1-1: ‏طبقه‌بندي انگل كريپتوسپوريديوم. 6

جدول1-2: گونه‌های گزارش شده کرپیتوسپوریدیوم ومیزبان‌های آن‌ها  7

جدول‏2-1: مقادیر مورد نیاز برای PCR اول. 40

جدول2-2: ‏برنامه  PCRاول. 41

جدول2-3: برنامه Nested-PCR.. 41

جدول2-4: مواد مورد نیاز برای ساختن محلول TBE. 42

قبلا حساب کاربری ایجاد کرده اید؟
گذرواژه خود را فراموش کرده اید؟
Loading...
enemad-logo