بررسی سیتوهیستولوژیکی تکوین اندام های زایشی و اثرات آلرژی زایی گلبرگ و دانه های گرده گیاه لیموشیرین(Citrus limon (L.) Barm f.)

فهرست مطالب

عنوان……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………صفحه

فصل اول: مقدمه………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….1

پیش گفتار………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………2

1-1- معرفی تیره مرکبات……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..3

• نمو شاخه ها و گل آذین در مرکبات……………………………………………………………………………………………………………………………………..4

2-1-1- معرفی جنس Citrus……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..5

1-2-1-1- معرفی گونه Citrus limon L………………………………………………………………………………………………………………………………………….6

2-1- هیستولوژی و تکوین گل……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..6

1-2-1- پرچم ها…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………9

1-1-2-1- فیلوژنی……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..9

2-1-2-1- ساختمان و تمایز بافتی پرچم………………………………………………………………………………………………………………………………………….9

3-1-2-1- نمو دانه گرده……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………11

1-3-1-2-1- لایه مغذی یا لایه تاپی و نقش آن………………………………………………………………………………………………………………………………15

2-3-1-2-1- دیواره ویژه کالوزی(SCW)…………………………………………………………………………………………………………………………………………16

3-1- ساختار دانه گرده………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………17

1-3-1- اسپوروپولنین…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………19

2-3-1- آراستار اگزین………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..20

4-1- ساختارهای ترشحی…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..20

5-1- هیستولوژی و فراساختار میوه در مرکبات………………………………………………………………………………………………………………………………..22

1-5-1- تغییرات رنگدانه ای میوه حین نمو………………………………………………………………………………………………………………………………………26

6-1- ساختار و تکوین کیسه های ترشحی اسانس…………………………………………………………………………………………………………………………….27

1-6-1- ترکیب شیمیایی اسانس و منشأ آن در مرکبات…………………………………………………………………………………………………………………..37

7-1- کلیاتی در مورد آلرژی……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….29

1-7-1- تعریف آلرژی…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………30

8-1- آتوپی………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….30

9-1- رده بندی واکنش ازدیاد حساسیت…………………………………………………………………………………………………………………………………………..31

10-1- آلرژن……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….36

11-1- انواع آلرژن ها………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….37

1-11-1-آلرژنهای دانه گرده………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………37

2-11-1-آلرژنهای غذایی گیاهی………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..37

12-1- علل آلرژی زائی گیاهان معطر………………………………………………………………………………………………………………………………………………..39

13-1-بیماری های آلرژیک در انسان ها…………………………………………………………………………………………………………………………………………….40

فصل دوم: مواد و روش ها……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….42

1-2- گیاه مورد استفاده در این پژوهش…………………………………………………………………………………………………………………………………………….43

2-2- جمع آوری نمونه گیاهی……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………43

3-2- مواد و محلول های مورد نیاز…………………………………………………………………………………………………………………………………………………….44

4-2- روش های سلول- بافت شناسی………………………………………………………………………………………………………………………………………………..45

1-4-2- تهیه برش های میکروتومی برای مطالعات تکوینی اندام های زایشی…………………………………………………………………………………45

5-2- جمع آوری و آماده سازی دانه های گرده…………………………………………………………………………………………………………………………………48

6-2- مطالعات ریخت شناسی دانه گرده…………………………………………………………………………………………………………………………………………….49

1-6-2- مشاهده مستقیم گرده ها با استفاده از روش وودهاوز(Wood house) یا شفاف سازی تکمیلی……………………………………49

2-6-2- روش استولیز…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………49

3-6-2- بررسی فراساختار دانه گرده به وسیله SEM……………………………………………………………………………………………………………………….50

7-2- بررسی توان آلرژی زایی دانه گرده، گلبرگ ها و پرچم ها……………………………………………………………………………………………………….51

1-7-2- انتخاب حیوان مناسب…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..51

2-7-2- عصاره گیری از دانه های گرده……………………………………………………………………………………………………………………………………………..52

3-7-2- عصاره گیری از گلبرگ ها به تنهایی و گلبرگ به همراه پرچم…………………………………………………………………………………………..52

4-7-2- تهیه بافر فسفات سالین PBS………………………………………………………………………………………………………………………………………………53

5-7-2- مطالعه پروتئین ها به روش الکتروفورز………………………………………………………………………………………………………………………………..53

1-5-7-2- الکتروفورز به روش SDS-PAGE در سیستم بافری ناپیوسته………………………………………………………………………………………..54

2-5-7-2- تهیه محلول ها و بافرهای لازم برای الکتروفورز سیستم SDS-PAGE………………………………………………………………………….55

3-5-7-2- مراحل تهیه ژل SDS-PAGE…………………………………………………………………………………………………………………………………………57

4-5-7-2- آماده سازی نمونه های پروتئینی و بارگذاری در ژل………………………………………………………………………………………………………58

5-5-7-2- رنگ آمیزی ژل…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………58

6-5-7-2- رنگ بری ژل ها و ظهور باندهای پروتئینی……………………………………………………………………………………………………………………..59

7-5-7-2- عکسبرداری………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………59

6-7-2- آزمون های تشخیص آلرژی………………………………………………………………………………………………………………………………………………….59

1-6-7-2- حساس سازی و ایمن سازی…………………………………………………………………………………………………………………………………………….59

2-6-7-2- آزمون های لازم برای بررسی تظاهرات آلرژیک در رت ها………………………………………………………………………………………………60

1- آزمون های پوستی…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………60

2- آزمون های تحریکی با ماده آلرژی زا…………………………………………………………………………………………………………………………………….61

3-آزمون های خونی……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………62

7-7-2- آنالیز آماری…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..64

فصل سوم: نتایج……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….65

1-3-بررسی سیتوهیستولوژیکی تکوین اندام های زایشی گل…………………………………………………………………………………………………………..66

1-1-3-تکوین گلبرگ…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………66

2-1-3- تکوین بساک…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………69

 3-1-3- تکوین تخمدان…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….75

2-3- ساختار و ریخت شناسی دانه های گرده…………………………………………………………………………………………………………………………………..78

3-3- مطالعه نیم رخ الکتروفورزی پروتئین های دانه گرده، گلبرگ، گلبرگ به همراه پرچم و پرچم ها………………………………………..83

4-3- بررسی آلرژی زائی عصاره های گرده ای، گلبرگ ها و گلبرگ به همراه پرچم……………………………………………………………………….85

1-4-3- نتایج آزمون های پوستی(قطر ویل)……………………………………………………………………………………………………………………………………..85

2-4-3- نتایج آزمون های تحریکی…………………………………………………………………………………………………………………………………………………….85

3-4-3- نتایج آزمون های خونی………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..85

فصل چهارم: بحث………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….90

1-4- تکوین گلبرگ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….91

2-4- نمو بساک………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..91

3-4- ساختار و فراساختار دانه گرده………………………………………………………………………………………………………………………………………………..92

4-4- تکوین تخمدان………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..92

5-4- باندهای پروتئینی در نیم رخ های الکتروفورزی…………………………………………………………………………………………………………………….93

6-4- آلرژی زایی گیاه گل لیموشیرین…………………………………………………………………………………………………………………………………………….94

پیشنهادات…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………97

منابع و مأخذ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..98