بررسی ریز افزایی انگورپرلیت (Vitis vinifera var. Perlette) و پایداري ژنتیکی گیاهان تولید شده با استفاده از نشانگ-KIAIEG31

تعداد65صفحه در فایل word

كارشناسي ارشد در رشته­ی

بیوتکنولوژی کشاورزی

بررسی ریز افزاییانگورپرلیت (Vitis vinifera var. Perlette)  و پایداري ژنتیکی گیاهان تولید شده با استفاده از نشانگرمولکولیRAPD

انگور رقم پرلت به عنوان یکی از مهم‌ترین ارقام تجاری انگور در دنیا می‌باشد کهدارای سرعت رشد بالا، باردهیزیاد، زودرس و مقاوم به حرارت بالا و آفتاب سوختگی می‌باشد. با توجه به اینکه تکثیرسنتی این رقم انگور دارای بازده پایینی می‌باشد، امروزه از روش کشت بافت برای تکثیر اقتصادی و تجاری آن استفاده می‌شود.تولید گیاهان همسان و کاملاً شبیه مادری از مزایای ریزازدیادی محسوب می‌گردد. اما در برخی موارد تفاوت‌های مورفولوژیک و ژنتیکی بین گیاهان حاصل از کشت بافت و گیاه  مادری وجود دارد.بنابراین اهداف این پژوهش در دو جنبه بهینه سازی محیط کشت و بررسی پایداری ژنتیکی و یکنواختی نتاج حاصل از کشت بافت انگور رقم پرلت با استفاده از نشانگر مولکولی RAPDمی‌باشد. مراحل تهیه ریزنمونه و ضدعفونی بافت انجام شد. در هر سه مرحله تکثیر، شاخه زایی و ریشه زایی با تغییر در میزان و ترکیبات مورد استفاده محیط کشت مناسب بهینه سازی شد.در نتیجه سرعت تکثیر به دو برابر افزایش یافت و مدت زمان انتظار به منظور ریشه زایی از 40 تا 45 روز به 30 تا 35 روز کاهش یافت. همچنین 5/1 میلی گرم کینتین به همراه 4/0 میلی گرم در لیتر 2iP   و بدون  استفاده از BAP بهترین نتیجه را در مرحله شاخه زایی داشت و طول دوره شاخه زایی از یک ماه به 21 روز کاهش یافت. به منظور ریشه زایی،محیط کشت‌های مختلف، با استفاده ازهورمون‌های BAP ، NAA ، GA3 و  IBAتهیه شد و در نهایت ترکیب هورمون BAP با مقدار 6/0 میلی گرم بر لیتر به همراه هورمون IBA به میزان 5/0 میلی گرم بر لیتر بهترین نتیجه را داشت. به منظور بررسی پایداری ژنتیکینتاج حاصل از کشت بافت، از گیاه مادری ، 10 نمونه واکشت اول و10 نمونه  واکشت دوم استخراج DNA  صورت گرفت. واکنش PCR با استفاده از 9 آغازگر RAPD انجام شد. در نتیجه 1100 باند با وزن مولکولی bp150 تا bp 1800  تکثیر شدند.نتایجاینپژوهش نشان داد کهتنوعمورفولوژیکی و ژنتیکیمعنیداریبینگیاهانمادریوهمچنینبینواکشتهایاولودوموجود ندارد. بنابراینمی‌توان نتیجه گرفت که نهال‌های انگورحاصل از کشت بافت دارایپایداریژنتیکی قابل ملاحظه‌ای هستند.

واژه‌های کلیدی: انگور پر لت، کشت بافت، تنوع سوماکلونال، پایداری ژنتیکی، نشانگرRAPD