بررسی تاثیر آلدوسترون در بهبود کیفی جنین های حاصل از تخمک های منجمد شده (انجماد شیشه ای) گوسفند

    خلاصه فارسی…………………………………………………………………………………………………………………………………………1

   فصل اول: کلیات

مقدمه ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………2

1-1-  بیان مسئله……………………………………………………………………………………………………………………………………4

1- 2 -اهداف  پژوهش……………………………………………………………………………………………………………………………..5

1-3-  ضروریت انجام تحقیق…………………………………………………………………………………………………………………..6

1-4- تولید جنین در شرایط in vivo…………………………………………………………………………………………………..6

1-4-1- روند ایجاد سلول جنسی ماده……………………………………………………………………………………………………6

1-4-1-1- ویژگی­های اووسیت ثانویه……………………………………………………………………………………………………..8

1-4-2- روند ایجاد سلول جنسی نر………………………………………………………………………………………………………..9

1-4-3- لقاح…………………………………………………………………………………………………………………………………………..10

1-4-4- تسهیم……………………………………………………………………………………………………………………………………….12

1-5- تولید جنین در شرایط in vitro…………………………………………………………………………………………………14

1-5-1- بلوغ آزمایشگاهی تخمک (IVM)…………………………………………………………………………………………..15

1-5-2- ظرفیت پذیری اسپرم……………………………………………………………………………………………………………….19

1-5-3- لقاح در شرایط آزمایشگاهی(IVF)…………………………………………………………………………………………21

1-5-4-کشت جنین در شرایط آزمایشگاهی(IVC)…………………………………………………………………………….23

1-6- مقایسه جنین­های طبیعی با جنین­های آزمایشگاهی…………………………………………………………………..26

1-7- انجماد……………………………………………………………………………………………………………………………………………27

1-7-1- مراحل اصلی انجماد………………………………………………………………………………………………………………….30

1-7-2- راه­های کاهش اثرات زیانبار مواد محافظت کننده…………………………………………………………………..30

1-7-3- روش­های انجماد………………………………………………………………………………………………………………………30

1-7-3-1- انجماد شیشه­ای…………………………………………………………………………………………………………………..31

1-7-3-1-1- عوامل تکنیکی موثر در انجماد شیشه­ای………………………………………………………………………..32

1-7-3-1-1-1- زمان تعادل و آبگیری…………………………………………………………………………………………………32

1-7-3-1-1-2- سرعت سرد کردن………………………………………………………………………………………………………32

1-7-3-1-1-3- سرعت گرم کردن……………………………………………………………………………………………………….35

1-7-3-1-1-4- مواد محافظ انجمادی………………………………………………………………………………………………….35

1-7-3-1-1-5- نقش ضد یخ­ها…………………………………………………………………………………………………………….36

1-7-3-1-1-6- ذوب و آبدهی…………………………………………………………………………………………………………….. 36

1-8- آلدوسترون…………………………………………………………………………………………………………………………………….37

1-8-1- خصوصیات………………………………………………………………………………………………………………………………..37

1-8-2- عملکرد……………………………………………………………………………………………………………………………………..38

1-9- ارزیابی کیفیت رویان…………………………………………………………………………………………………………………….41

1-10- سلول­های رویانی………………………………………………………………………………………………………………………..43

فصل دوم: مروری بر متون گذشته

2-1- اثرات انجماد بر روی تخمک…………………………………………………………………………………………………………46

2-2- اثر روش انجماد شیشه­ای……………………………………………………………………………………………………………..47

2-3- بیان زیر واحد­های پمپ Na/K ATpase در تخمک و جنین…………………………………………………48

2-4- پمپ  Na/K ATpase …………………………………………………………………………………………………………….49

2-5- آکواپورین­ها…………………………………………………………………………………………………………………………………..51

2-6- هچ یا تفریخ…………………………………………………………………………………………………………………………………..52

2-7- فعال شدن ژنوم رویانی…………………………………………………………………………………………………………………55

2-8- متابولیسم رویان……………………………………………………………………………………………………………………………56

2-9- نقش آلدوسترون در بیان پروتیین Na/K ATpase………………………………………………………………..58

فصل سوم: مواد و روش­ها

3-1- تولید جنین های حاصل از لقاح خارج رحمی (IVF)…………………………………………………………………61

3-1-1- جمع‌آوری تخمدان‌ها از کشتارگاه و استحصال تخمک‌ها از مایع فولیکولی……………………………61

3-1-2- بلوغ آزمایشگاهی تخمک‌ها (IVM)………………………………………………………………………………………..62

3-1-3- لقاح داخل آزمایشگاهی (IVF)………………………………………………………………………………………………63

3-1-3-1- آماده سازی اووسیت­های بالغ شده برای لقاح……………………………………………………………………..63

3-1-3-2- آماده سازی اسپرم………………………………………………………………………………………………………………..63

3-1-4- کشت داخل آزمایشگاهی جنین های حاصل از(IVF)…………………………………………………………..64

3-1-5- تازه كردن محیط کشت جنین‌ها……………………………………………………………………………………………..65

3-2- تهیه محلول‌های انجمادی…………………………………………………………………………………………………………….65

3-3- مراحل انجام روند انجماد شیشه ای……………………………………………………………………………………………..66

3-4- محیط ذوب……………………………………………………………………………………………………………………………………66

3-5- گروه­های آزمایشی و طراحی مطالعه…………………………………………………………………………………………….66

3-6- ارزیابی جنين‌ها……………………………………………………………………………………………………………………………..68

3-6-1- ارزیابی کیفی جنین‌ها با استفاده از رنگ‌آمیزی افتراقی………………………………………………………….68

3-7- ایمونوسایتوشیمی پروتئین­های سطحی جنین های گوسفندی(Sheep embryo ICC)……..70

فصل چهارم: نتایج

4-1- تخمک­های منجمد شده……………………………………………………………………………………………………………….82

4-1-1- گروه آزمایشی اول، افزودن آلدوسترون به محیط IVM تخمک­های منجمد-ذوب شده در مرحله GV……………………………………………………………………………………………………………………………………………….82

4-1-2- گروه آزمایشی دوم، افزودن آلدوسترون در روز چهارم جنینی (D4)، به محیط کشت جنین­های حاصل از تخمک­های منجمد-ذوب شده………………………………………………………………………………………..82

4-1-3- گروه آزمایشی سوم، افزودن آلدوسترون در طی IVM، ومتعاقباً انجماد تخمک ها در مرحله MII………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….83

4-1-4- گروه آزمایشی چهارم، یا گروه کننرل……………………………………………………………………………………….83

4-2- تخمک های منجمد نشده……………………………………………………………………………………………………………..85

4-2-1- گروه آزمایشی پنجم، افزودن آلدوسترون به محیط IVM تخمک­های غیر منجمد……………….85

4-2-2- گروه آزمایشی ششم، افزودن آلدوسترون در روز چهارم جنینی (D4)، به محیط کشت جنین­های حاصل از تخمک­های غیر منجمد……………………………………………………………………………………………………85

4-2-3- گروه آزمایشی هفتم، یا گروه کنترل………………………………………………………………………………………..86

4-3- میزان بیان پمپ Na+/K+/ATPase در گروه های آزمایشی ……………………………………………….87

فصل پنجم: بحث و پیشنهادات

بحث……………………………………………………………………………………………………………………………………………..89

نتیجه­گیری……………………………………………………………………………………………………………………………………………… 94

پیشنهادات……………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 95

منابع……………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 96

خلاصه انگلیسی…………………………………………………………………………………………………………………………………113