%53تخفیف

بررسی امکان حضور و تایید ملکولی میکرو RNA‌های جدید در ناحیه ژنومی تکثیر شده 3q26.33

Name: بررسی امکان حضور و تایید ملکولی میکرو RNAهای جدید در ناحیه ژنومی تکثیر شده 3q26.33
SKU: 5506
Price: 210000 IRR
Availability: InStock

تعداد 80 صفحه در فایل word

چکیده:

سرطان ریه یکی از علل اصلی مرگ و میر ناشی از سرطان در سطح دنیاست. مطالعات سیتوژنتیکی نشان می‌دهد که تومورهای ریوی ناهنجاری کروموزومی مختلفی را نشان می‌دهند که جهش در بازوی بلند کروموزوم 3 یکی از موارد شایع می‌باشد. miRNAها RNAهای غیر کد کننده تک رشته‌ای کوچکی هستند که بعنوان تنظیم کننده‌های بیان ژن در سطح بعد از رونویسی عمل می‌کنند. miRNAها فرایندهای مهم سلولی همانند تکثیر، تمایز، اپوپتوز و تومورزایی را کنترل می‌کنند. ناحیه ژنومی miRNAها نشان می‌دهد که انها در نواحی کروموزومی حساس و مرتبط با سرطان قرار گرفته اند. در مطالعه حاضر ناحیه بازوی بلند کروموزوم 3 برای وجود miRNAهای جدید که ممکن است نقشهایی در سرطانزایی ریوی داشته باشند، تحت مطالعه قرار گرفت. با استفاده از نرم‌افزارهای بیوانفورماتیکی متعدد، ما نواحی حفاظت شده در ساب باند 3q26.33 را برای یافتن ساختارهای سنجاق سری که مشخصه پیش سازهای miRNA است، جستجو کردیم. با توجه به امتیازهای بدست امده توسط نرم‌افزارها، ما سه ساختار سنجاق سری را برای تایید تجربی انتخاب کردیم. از بین سه ساختار سنجاق سری انتخاب شده، یکی از انها بنام AMIR-4 بیان اندوژنوس ان توسط PCR شناسایی شد و تعیین توالی صحت وجود این miRNA را تایید کرد. ترانسفکشن سلول‌های SW480 با وکتور بیانی حامل پیش ساز این miRNA منجر به بیش بیانی فرم بالغ AMIR-4 گردید که بیانگر واقعی بودن این miRNA است. از نرم‌افزار Lab DIANA برای پیش بینی اهداف ژنی AMIR-4 استفاده گردید. نتایج Real-time PCR در سلول‌های SW480 ترانسفكت شده با حامل بیان کننده AMIR-4 نشان داد که بیان دو ژن APPL1 و TrkC در سطح معنی‌داری کاهش یافته است.

واژگان‌کلیدی: سرطان ریه، microRNA، بیوانفورماتیک

دسته: زیست شناسی, علوم تجربی برچسب: microRNA, بیوانفورماتیک, واژگان‌کلیدی: سرطان ریه

توضیحات
نظرات (0)

فهرست مطالب

عنوان صفحه

فصل اول: مقدمه. 1

1-1. پیشگفتار 2

1-2. microRNA.. 3

1-2-1. نقش miRNA‌ها در بیماری.. 5

1-2-2. تولید رونوشت اولیه microRNA.. 6

1-2-3. انتقال pre-miRNA به سیتو پلاسم.. 6

1-2-4. پردازش سیتوپلاسمی.. 7

1-2-5. فرایند خاموش سازی بیان ژن‌ها توسط microRNA.. 7

1-2-6. سازماندهی ژنومی miRNA ها 8

1-3. سرطان ریه. 9

1-3-1. عوامل موثر بر افزایش خطر سرطان ریه. 9

1-3-2. طبقه بندی سرطان ریه. 10

1-3-3. مرحله بندی سرطان.. 11

1-3-4. ژنتیک مولکولی سرطان ریه. 12

1-3-5. سیتوژنتیک سرطان ریه. 13

1-4. ضروریات انجام تحقیق.. 14

فصل دوم: مواد وروش‌ها 16

2-1. مطالعات بیوانفورماتیکی.. 17

2-1-1. بررسی توالی تكثیر یابنده در ناحیه 3q برای پیدا کردن ساختارهای سنجاق سری.. 17

2-1-2. بررسی بیوانفورماتیکی اهداف ژنی microRNA.. 18

2-2. مطالعات تجربی.. 18

2-2-1. استخراج DNA ژنومیک انسانی از خون.. 18

2-2-2. تکثیر ناحیه‌ی حاوی ساختار سنجاق سری.. 20

2-2-2-1. طراحی پرایمر. 20

2-2-2-2. آماده‌سازی پرایمرهای PCR.. 22

2-2-2-3. الگوهای (Templates) PCR.. 22

2-2-2-4. DNA پلیمراز، بافر، dNTP و Mg²⁺ 22

2-2-3. استخراج از ژل اگارز و تخلیص محصول PCR.. 23

2-2-4. کلونینگ ناحیه اینترونی در TA vector 24

2-2-4-1. کشت باکتری DH5a. 25

2-2-4-2. مستعد کردن باکتری DH5α (CaCl₂) 25

2-2-4-3. استخراج پلاسمید در مقیاس کم.. 27

2-2-4-4. مراحل استخراج پلاسمید با روش Miniprep. 28

2-2-4-5. تایید پلاسمید استخراج شده با پرایمر‌های داخلی Nested. 29

2-2-5. کلونینگ ناحیه پیش بینی شده به عنوان پیش ساز microRNA.. 29

2-2-5-1. تکثیر و استخراج وکتور بیانی سلول یوکاریوت… 30

2-2-5-2. تایید پلاسمید استخراجی با روش هضم آنزیمی.. 31

2-2-5-3. غرباگری کلون‌های نوترکیب باکتریایی با کلونی PCR.. 32

2-2-5-4. تعیین توالی حامل (Vector)نهایی.. 32

2-2-6. کشت سلول‌های HeLa, Sw-480, Hek-293-T. 32

2-2-6-1. انجماد سلول‌ها 33

2-2-7. ترانسفکت سلول‌های Hela و SW-480 با استفاده از لیپوفکتامین.. 34

2-2-7-1. عکس برداری فلورسانت از سلول ها 35

2-2-8. استخراج RNA کل از سلول ها 35

2-2-8-1. بررسی كمی و كیفی RNA‌ی استخراج شده 37

2-2-8-2. نانودراپ… 37

2-2-8-3. الكتروفورز ژل آگارز 37

2-2-9. افزودن دنباله poly A به مجموعه RNA استخراج شده 40

2-2-10. سنتز cDNA.. 40

2-2-11. Real-time PCR.. 42

2-2-12. آنالیز مرگ سلولی با تکنیک فلوسایتومتری.. 45

2-2-12-1. آنالیز سلول‌های رنگ آمیزی شده با كمك دستگاه فلوسیتومتری.. 45

فصل سوم: نتایج.. 46

3-1. نتایج مطالعات بیوانفورماتیکی.. 47

3-1-1. بررسی توالی تكثیر شونده در ناحیه 3q. 47

3-2. نتایج تجربی.. 50

3-2-1. تکثیر نواحی ژنومی که حاوی miRNA‌های احتمالی هستند. 50

3-2-2. کلون سازی در حامل‌های pTG19-T. 50

3-2-3. ساب کلونینگ قطعات ورودی در حامل بیانی pEGFP-c1 پستانداران.. 50

3-2-4. تعیین توالی.. 51

3-2-5. ترانسفکشن سازه‌های نوترکیب درون رده‌های سلولی SW480 و HeLa. 51

3-2-6. استخراج RNAی کلی.. 52

3-2-7. اضافه کردن Poly A و سنتز cDNA.. 52

3-2-8. RT-PCR.. 53

3-3. پیش بینی ژنهای هدف AMIR-4. 55

3-4. بررسی عملکرد AMIR-4. 57

3-4-1. بیش بیان AMIR-4. 57

3-4-2. کاهش بیان ژنهای هدف… 57

فصل چهارم: بحث… 59

4-1. كشف miRNA جدید. 60

4-2. کشف یک ژن miRNA جدید در ناحیه کروموزومی 3q26.33. 62

4-3. ژن میزبان AMIR-4: PIK3CA.. 63

4-4. ژن‌های هدف شناسایی شده برای AMIR-4: APPL1 و Trk C.. 65

منابع و مآخذ.. 66

چکیده انگلیسی.. 72

نقد و بررسی‌ها

هنوز بررسی‌ای ثبت نشده است.

اولین کسی باشید که دیدگاهی می نویسد “بررسی امکان حضور و تایید ملکولی میکرو RNA‌های جدید در ناحیه ژنومی تکثیر شده 3q26.33”

بررسی امکان حضور و تایید ملکولی میکرو RNA‌های جدید در ناحیه ژنومی تکثیر شده 3q26.33

تعداد 80 صفحه در فایل word

چکیده:

واژگان‌کلیدی: سرطان ریه، microRNA، بیوانفورماتیک

فهرست مطالب

عنوان صفحه

نقد و بررسی‌ها

محصولات مرتبط

شناسایی فنوتیبی و ژنوتیبی مقاومت نسبت به متی سیلین در جدایه¬های استافیلوکوکوس کوآگولاز منفی بدست آمده از موارد ورم پستان تحت بالینی در میش

دانلود محصول: مدل سازی لرزش در بیماران پارکینسونی

دانلود پروژه:اثر قرص ملاتونین بر روی کبد چرب غیر الکلی