بررسی اثر بیس فنول A بر یادگیری احترازی غیر فعال و توزیع گیرنده ی NMDA در هیپوکامپ، آمیگدال، مخچه و پری فرونتال مخ موش صحرایی نر

فهرست مطالب

عنوان                                         صفحه

فصل اول : مقدمه …………………………. 2

 

فصل دوم  مبانی نظری تحقیق

2 -1 زنواستر.ژن ها……………………… 8

2-2 بیس فنول آ…………………………. 8

2-3 حافظه و انواع آن…………………… 10

2-3-1 حافظه ی کوتاه مدت………………. 10

2-3-2 حافظه ی میان مدت……………….. 10

2-3-3 حافظه ی بلند مدت……………….. 12

2-3-4- حافظه ی اظهاری………………… 12

2-3-5- حافظه ی غیر اظهاری…………….. 13

2-4- یادگیری احترازی…………………… 13

2-5- نقش مراکز عمده در یادگیری………….. 15

2-5-1-هیپوکامپ……………………….. 15

2-5-2- مخچه………………………….. 19

2-5-3- آمیگدال……………………….. 22

2-5-4- قشر پری فرونتال مخ……………… 25

2-6- گیرنده های گلوتامات……………….. 28

2-7- گیرنده ی NMDA و نقش آن دریادگیری……. 29

 2-8- LTP ،LTD  و مکانیسم عمل آنها………… 32

2-9-هورمون های  استروئیدی و نقش آنها در یادگیری   38

2-9-1 شیمی هورمون های استروئیدی………… 38

2-9-2- نقش هورمون های استروئیدی در یادگیری و حافظه   39

عنوان                                         صفحه

فصل سوم : مواد و روش کار

3-1- ترکيبات شيميايي و مواد مصرفي……….. 42

3-2- وسایل و دستگاه ها…………………. 43

3-3- حیوانات………………………….. 43

3-4- دوره گاواژ حیوانات………………… 44

3-5- القاء يادگيري احترازي در حيوان مورد مطالعه    45

3-6- خارج کردن مغز و تثبيت بافت…………. 46

3-7- آب‌گيري از بافت، شفاف سازی و پارافين دهي 47

3-8- قالب گيري در پارافين………………. 47

3-9- تهیه ی لام پلی الایزینه……………… 48

3-10- برش‌گيري و قرار دادن برش‌ها روي لام…… 48

3-11- تکنيک ايمنوهيستوشيمي……………… 49

3-12- طرز تهيه بافرPBS………………….. 50

3-13- روش تهيه بافر سيترات……………… 50

3-14- روش تهيه فرمالين 10 درصد بافره…….. 51

3-15- روش تهيه فرمالين 4 درصد بافره……… 51

3-16- طرز تهيه فتوميكروگراف از مقاطع بافتی.. 51

3-17 – تعيين درصد تيرگي رنگ ايجاد شده……….. 51

3-18- روش‌های آماری…………………….. 52

فصل چهارم : نتایج

4-1- اثر بیس فنول آ بر يادگيري احترازي غير فعال. 54

4-2- بررسی اثر بیس فنول آ بر تراکم زیر واحد NR1 گیرنده ی NMDA در سلول

 های پورکینژ مخچه……………………… 56

4-3- اثر بیس فنول آ بر تراکم زیر واحد NR1 گیرنده ی NMDA در قشر پری

 فرونتال مخ موش صحرایی…………………. 60

4-4- اثر بیس فنول آ بر تراکم زیر واحد NR1 گیرنده ی NMDA در آمیگدال

موش صحرایی …………………………… 63

4-5- اثر بیس فنول آ بر تراکم زیر واحد NR1 گیرنده ی NMDA در هیپوکامپ

موش صحرایی نر ………………………… 68

عنوان                                         صفحه

فصل پنجم : بحث و نتیجه گیری

5-1- اثر بیس فنول آ بر یادگیری و حافظه  ….. 78

5-2- اثر بیس فنول آ بر توزیع زیر واحد NR1 گیرنده ی NMDA در مخچه،

پری فرونتال مخ، هیپوکامپ و آمیگدال………. 81

5-3- اثر بیس فنول آ و یادگیری احترازی غیر فعال بر توزیع زیر واحد NR1

گیرنده ی NMDA ………………………… 85

5-4-نتیجه گیری ……………………….. 88

5-5- پیشنهادات ……………………….. 88

 

فهرست منابع و مأخذ ……………………… 89

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

فهرست شکل ها و تصاویر

عنوان                                         صفحه

شکل 1-2:فرمول شیمیایی بیس فنول آ ………….. 8

شکل 2-2: سیستم حافظه در حلزون آپلسیا  ……… 11

شکل 3-2: تشکیلات هیپوکامپی ……………….. 15

شکل 2-4:  الف) موقعیت هیپوکامپ در برش مغز موش صحرایی؛ ب) هیپوکامپ

 ج) سیستم لیمبیک………………………… 16

شکل(2-5) شمایی از هیپوکامپ موش صحرایی. مناطق اصلی،ارتباطات سیناپسی،

مسیر های تحریکی مشخص هستند.LTP در هر سه سیناپس. 17

شکل(2 -6): ساختار آناتومیکی مخچه و لایه های مختلف آن.سلول ها  21

شکل(2-7) : الف) موقعیت آمیگدال در مغز، ب) هسته های آمیگدال   23

شکل (2-8): قشر پره فرونتال……………….. 26

شکل(2-9): انواع گیرنده های گلوتامات متابوتروپیک و یونوتروپیک.(A,B)

و خانواده ی گیرنده های ذکر شده (C, D)  ……….. 30

شکل (2-9): ساختار گیرندده ی NMDA   ……….. 31

شکل(2-10):مکانیسم مولکولی عمل گیرنده ی NMDA و تشکیل LTP و LTD……………………………………….. 34

شکل(11-2): نقش گیرنده های NMDA   در تشکیل LTP  اولیه و مؤخر   37

شکل(12-2):  مراحل مختلف …………………. 39

شکل 3-1: دستگاه شاتل باکس………………… 45

شکل3-2: مغز موش صحرایی…………………… 47

تصویر 4-1-  فتومیکروگراف از مخچه نشان دهنده ی سلول های  پورکینژ

در موش صحرایی تحت تأثیر بیس فنول آ در دو دوز بر توزیع زیر واحد

 NR1 گیرنده ی NMDA (400×)………………… 57

عنوان                                         صفحه

تصویر 4-2- فتومیکروگراف از مخچه در موش صحرایی نشان دهنده ی سلول های

 پورکینژ تحت تأثیر بیس فنول آ در دو دوز پس از یادگیری احترازی غیر فعال

 بر میزان توزیع زیر واحد NR1 گیرنده ی NMDA (400×).  58

تصویر 4-3- فتومیکروگراف مقایسه ی سلول های پورکینژ مخچه حاوی زیر

 واحد NR1 گیرنده ی NMDA تحت تأثیر بیس فنول آ در دو دوز مختلف

در موش های تحت یادگیری و بدون یادگیری (400×).. 59

تصویر 4-4- فتومیکروگراف سلول هاي قشر پري فرونتال در موش هاي

صحرائي تحت تاثيربیس فنول آ در دو دوز مختلف بر توزیع زیر واحد NR1

گیرنده ی NMDA (400× )……………………. 60

تصویر4-5- فتومیکروگراف سلول های قشر پری فرونتال مخ تحت تأثیر یادگیری

 و دو دوز بیس فنول آ بر توزیع زیر واحد NR1 گیرنده ی NMDA   (400 ×)…………………………………….. 61

تصویر 4-7- فتومیکروگراف سلول های هسته های  (a)  BMAو  BLA(b) آمیگدال

 در موش صحرائي تحت تأثير بیس فنول آ در دو دوز مختلف بر توزیع زیر واحد

 NR1 گیرنده ی NMDA (400×)………………… 64

تصویر 4-8- فتومیکروگراف سلول های هسته های BMA و BLA آمیگدال

 موش صحرایی تحت تأثیر یادگیری و دو دوز بیس فنول آ بر توزیع زیر واحد

 NR1 گیرنده ی NMDA (400×)………………… 66

تصویر4-9- فتو میکروگراف مقایسه ی سلول های هسته های BMA و BLA

آمیگدال حاوی زیر واحد NR1 گیرنده ی NMDA در دو دوز بیس فنول آ تحت

 اثر یادگیری و بدون یادگیری (400×)………… 67

تصویر 4-10- فتومیکروگراف لايه ي سلول هاي هرمی  منطقه ی CA3 هیپوکامپ

  در موش هاي صحرائي تحت تاثير بیس فنول آ در دو دوز مختلف آ بر توزیع زیر

 واحد NR1 گیرنده ی NMDA (400×)……………. 68

تصویر 4-11- فتومیکروگراف سلول های هرمی منطقه ی  CA3هیپوکامپ

 موش صحرایی تحت تأثیر یادگیری و دو دوز بیس فنول آ بر توزیع زیر واحد NR1

گیرنده ی NMDA (بزرگنمایی 400× می باشد)…….. 69

تصویر4-12- فتو میکروگراف مقایسه ی سلول های هرمی هیپوکامپ حاوی

 زیر واحد NR1 گیرنده ی NMDA  در دو دوز بیس فنول آ تحت اثر یادگیری

 و بدون یادگیری (400×)…………………… 70

عنوان                                         صفحه

تصویر4-13- فتومیکروگراف لايه ي سلول هاي هرمی منطقه ی CA2 هیپوکامپ

 در موش هاي صحرائي تحت تاثير بیس فنول آ در دو دوز مختلف آ بر توزیع زیر

 واحد NR1 گیرنده ی NMDA (400×)……………. 71

تصویر 4-14- فتومیکروگراف سلول های هرمی منطقه ی CA2  هیپوکامپ

موش صحرایی تحت تأثیر یادگیری و دو دوز بیس فنول آ بر توزیع زیر واحد

 NR1 گیرنده ی NMDA (400×)………………… 72

تصویر4-15- فتو میکروگراف مقایسه ی سلول های هرمی  منطقه ی CA2

هیپوکامپ موش صحرایی در دو دوز بیس فنول آ تحت اثر یادگیری و بدون

 یادگیری آ بر توزیع زیر واحد NR1 گیرنده ی NMDA (400×).  73

تصویر4-16- فتومیکروگراف لايه ي سلول هاي هرمی منطقه ی CA1 هیپوکامپ

 در موش هاي صحرائي تحت تاثير بیس فنول آ در دو دوز مختلف بر توزیع زیر

 واحد NR1 گیرنده ی  NMDA (400×)…………… 74

تصویر 4-17- فتومیکروگراف سلول های هرمی منطقه ی CA1  هیپوکامپ

 موش صحرایی تحت تأثیر یادگیری و دو دوز بیس فنول آ بر توزیع زیر واحد NR1

 گیرنده ی NMDA (400×)……………………. 75

تصویر4-18- فتو میکروگراف مقایسه ی سلول های هرمی منطقه ی CA1

هیپوکامپ آ حاوی زیر واحد NR1 گیرنده ی NMDA در دو دوز بیس فنول آ

تحت اثر یادگیری و بدون یادگیری (400×)……… 76

فهرست نمودار ها

عنوان                                         صفحه

نمودار4-1- اثر بیس فنول آ بر یادگیری احترازی غیر فعال (Mean ± SEM)………………………………………. 55

نمودار 4-2- اثر بیس فنول آ بر تراکم زیر واحد NR1 گیرنده ی NMDA

در سلول های پورکینژ مخچه ی موش صحرایی……… 57

نمودار 4-3- اثر بیس فنول آ و یادگیری احترازی غیر فعال بر تراکم زیر واحد

NR1  گیرنده ی NMDA در سلول های پورکینژ مخچه در موش صحرایی.   58

نمودار 4-4- مقایسه ی تراکم زیر واحد NR1 گیرنده ی NMDA در موش های

 دریافت کننده ی بیس فنول آ تحت یادگیری و بدون یادگیری در

سلول های پورکینژ مخچه……………………. 59

نمودار 4-5- اثر بیس فنول آ بر تراکم زیر واحد NR1 گیرنده ی NMDA قشر پری

 فرونتال مخ موش صحرایی…………………… 60

نمودار 4-6- اثر بیس فنول آ و یادگیری احترازی بر تراکم زیر واحدNR1

 گیرنده ی NMDA در قشر پری فرونتال مخ  موش صحرایی    61

نمودار 4-7- مقایسه ی تراکم زیر واحد NR1 گیرنده ی NMDA موش های

 دریافت کننده ی بیس فنول آ تحت یادگیری و بدون یادگیری در قشر

 پری فرونتال مخ…………………………. 62

نمودار4-8- اثر بیس فنول آ بر تراکم زیر واحد NR1 گیرنده ی

 NMDAهسته ی BLA آمیگدال موش صحرایی………… 63

نمودار 4-9 – اثر بیس فنول آ بر تراکم زیر واحد NR1 گیرنده ی

 NMDAهسته ی BMA آمیگدال موش صحرایی………… 63

نمودار 4-10- اثر بیس فنول آ و یادگیری بر تراکم زیر واحدNR1  گیرنده ی

 NMDA در هسته ی  BLA  آمیگدال  موش صحرایی…… 65

نمودار 4-11- اثر بیس فنول آ و یادگیری بر تراکم زیر واحدNR1  گیرنده ی

 NMDA در هسته ی  BMA  آمیگدال موش صحرایی…… 65

عنوان                                         صفحه

نمودار 4-12- مقایسه ی تراکم زیر واحد NR1 گیرنده ی NMDA در

 موش های دریافت کننده ی بیس فنول آ تحت یادگیری و بدون یادگیری

 در سلول های هسته های BLA آمیگدال…………. 66

نمودار 4-13- مقایسه ی تراکم زیر واحد NR1 گیرنده ی NMDA در

 موش های دریافت کننده ی بیس فنول آ تحت یادگیری و بدون یادگیری

 در سلول های هسته های BMA آمیگدال…………. 67

نمودار 4-14- اثر بیس فنول آ بر تراکم زیر واحد NR1 گیرنده ی NMDA

 منطقه ی CA3 هیپوکامپ موش صحرایی………….. 68

نمودار 4-15- اثر بیس فنول آ و یادگیری بر تراکم زیر واحدNR1  گیرنده ی

 NMDA در منطقه ی CA3 هیپوکامپ  موش صحرایی….. 69

نمودار4-16-مقایسه ی تراکم زیر واحد NR1 گیرنده ی NMDA موشهای

دریافت کننده ی بیس فنول آ تحت یادگیری و بدون یادگیری در

 منطقه ی CA3 هیپوکامپ……………………. 70

نمودار 4-17- اثر بیس فنول آ بر تراکم زیر واحد NR1 گیرنده ی NMDA

 منطقه ی CA2 هیپوکامپ موش صحرایی………….. 71

نمودار 4-18- اثر بیس فنول آ و یادگیری بر تراکم زیر واحد NR1  گیرنده ی

 NMDA در منطقه ی CA2 هیپوکامپ  موش صحرایی….. 72

نمودار4-19-مقایسه ی تراکم زیر واحد NR1 گیرنده ی NMDA موشهای

دریافت کننده ی بیس فنول آ تحت یادگیری و بدون یادگیری در منطقه ی

 CA2 هیپوکامپ…………………………… 73

نمودار 4-20- اثر بیس فنول آ بر تراکم زیر واحد NR1 گیرنده ی NMDA

 منطقه ی CA1 هیپوکامپ موش صحرایی………….. 74

نمودار 4-21- اثر بیس فنول آ و یادگیری بر تراکم زیر واحدNR1  گیرنده ی

 NMDA در هیپوکامپ  موش صحرایی منطقه CA1……. 75

نمودار4-22- مقایسه ی تراکم زیر واحد NR1 گیرنده ی NMDA موشهای

دریافت کننده ی بیس فنول آ تحت یادگیری و بدون یادگیری در

 منطقه ی CA1 هیپوکامپ……………………. 76