%53تخفیف

بررسی اثرسایتوتوکسیسیته 85ICD- (پپتیدهای مشتق ازسموم جانوری) برروی سلول سرطانی)549(A و نرمال(5MRC-

تعداد 129      صفحه در فایل  word

چکیده

هدف: سموم برخی جانوران منبع ترکيبات طبیعی توکسین ها و پروتئین ها است که خاصيت ضد توموری آن به اثبات رسيده است.در اين مطالعه اثر) ICD-85پپتید مشتق ازسم مار و عقرب) به طور مستقيم بررده سلولي آدنوکارسينوماي ریه مورد بررسي قرارگرفت.   روش بررسی: در اين مطالعه ازروش رنگ سنجي(NRU) و(MTT) درتعيين سيتوتوكسيسيتي ICD-85 بررشد سلول هاي بافت سرطاني ريه انسان و سلول بافت نرمال ریه وکلیه انسان در شرايط آزمايشگاهي مقايسه شده است. درتحقيق حاضر، از ترکيب کمپتوتسين که يک ترکيب استاندارد شده ضد سرطان با مکانيسم القاءآپوپتوز مي باشد، جهت مقايسه با ترکيبICD-85 استفاده شد.مشاهدات مورفولوژیکی، افزایش فعالیت کاسپاز8 وقطعه قطعه شدن DNAژنومی درسلول سرطانی(A549)تیمار شده با ترکیبICD-85، القاءآپوپتوزرا نشان داد.روش بررسی:  در اين مطالعه پس از کشت و تکثير سلول هاي  A549وHEK-293، MRC-5 به منظور تعيين اثر سايتوتوکسيک ترکیبICD-85 ، اين سلولها در مجاورت دوزهاي مختلف ترکیبICD-85 53،43،33،13،7،5/0میکروگرم در میلی لیتر) به مدت 24،48و72 ساعت آنکوبه شدند. پس از پايان آنکوباسيون تست NRU وMTT انجام شد. فراگمنتاسیون DNA و فعاليت آنزيم کاسپاز 8 به عنوان شاخصي از چگونگي وقوع آپوپتوز در سلول مي باشد. برای این منظور از کیت کالریمتری کاسپاز 8 و آزمایش DNA Ladder استفاده شد.يافته ها: IC50، میانگین توان زیستی سلول های سرطانی و نرمال بافت ریه و کلیه انسانی درگروه های تیمار شده با ترکیبICD-85 نسبت به یکدیگر دارای اختلاف معناداری می باشند(P<0.001)، که بيانگر اثرسايتوتوکسيسيتي انتخابي ترکیبICD-85 بر سلول هاي توموري مي باشد. دوز تیمار و توانایی زیستی سلول های سرطانی دارای اثرات متقابل می باشد، به صورتیکه با افزایش میزان دوز قابلیت حیات سلول ها کاهش معناداری پیدا می کند. ميزان فعاليت کاسپاز8 در سلول هاي سرطاني A549 تيمار شده با ترکيب ICD-85 افزایش یافت. قطعه قطعه شدنDNA ژنومی درسلول سرطانی جواب نهایی اثبات وقوع آپوپتوزاست. احتمالاً نفوذپذیری غشای لیزوزم و مهار مرگ سلولی اتوفاژی از عوامل اثرترکیبICD-85 برالقاءآپپتوز می باشد.

كليد واژهICD-85:،A549،MTT،NRU،کاسپاز8،DNALadder، سیتوتوکسیسیته،آپوپتوزیس

 

فهرست مطالب، اشکال، نمودار و جداول

عنوان                                                                                                                                صفحه                                                                                                                                           

فصل اول:کلیات.. 1

1-1بيان مسئله: 2

      1-2- همه گير شناسي سرطان: 4

      1-2-1- سرطان در ايران : 7

      1-3- تاريخچه و تعريف سرطان: 8

1-4- تومورها: 8

       1-4-1- تومورهاي خوش‌خيم: 8

       1-4-2- تومورهاي بدخيم: 9

       1- 4- 3- خصوصيات کلي رشد تومورال: 10

       1-4-4- فعاليت تومور: 11

1-5-  انواع سرطان: 11

1-6-آناتومي ريه: 12

       1-6-1-  سرطان ريه : 13

        1-6-2- انواع سرطان ريه: 13

        1-6-3- سرطان ريه سلول غير كوچك (NSCLC) : 14

        1-6-4- انواع مختلفي از سرطان ريه سلول غير  كوچك  وجود دارد: 14

        1-6-5- روش هاي تشخيص سرطان ريه: 14

        1-6-6-عوامل مستعد کننده سرطان ريه: 15

1-7- چرخه سلولي و رابطه آن با سرطان: 15

       1-7-1- به طورکلي سلولهاي سرطاني بايد ويژگي هاي زير را داشته باشند تا بتوانند بعنوان سلول های سرطاني در بدن دوام بياورند: 16

1-8- راههاي انتشار سرطان: 17

        1-9- عوامل مؤثر در پید ایش سرطان: 17

       1-9-1- کارسینوژنز: 17

        1-9-2- انواع کارسينوژنهاي: 17

1-10- استراتژي درمان سرطان: 20

       1-10-1- نقش جراحي در درمان سرطان : 20

       1-10-2- سوزاندن و استفاده از اشعه ليزر. 21

       1-10-3- راديوتراپي: 21

       1-10-4- شيمي درماني در سرطان ریه: 22

       1-10-5- محدوديت درماني هرکدام از چهار روش: 22

1-11- علم شيمي درماني: 23

       1-11-1- سير تحولي و رشد شيمي درماني: 24

       1-11-2- انواع شيمي درماني: 24

1-12- مکانیسم تأثیر داروهای شیمی درمانی: 25

       1-13- ساختن داروهای ضد سرطان:. 26

       1-13-1- داروهاي مورد مطالعه در شيمي درماني: 28

       1-13-2- انواع داروهای شیمی درمانی نئوپلاسم: 29

       1-13-3-  مطالعات کنوني بر روي آنتي کانسرها با منشأ بيولوژيک: 32

1-14- تنظيم آپپتوسيس: 35

      1-14-1- پيشامدهاي سلولي آپپتوسيس: 36

1-15- مکانيسم القاي آپپتوز: 36

      1-15-1-كاسپازها 41

      1-15-2- خصوصیات سلولی طی روند نکروز و مرگ خودبخود: 43

      1-16- روشهاي تشخيص آپوپتوز: 45

1-17- نقش برخي ازمنابع بيولوژيک در درمان سرطان با مکانيسم القاء آپوپتوز: 45

       1-17-1- مکانيسم عمل کمپتوتسين(CPT): 46

       1-18 – اثر بخشي برخي سموم شفابخش: 47

فصل دوم: مواد و روشها………… 50

2-1- محيط كشت آزمايشگاهي. 54

       2-1-1- كشت سلولي در دارو شناسي و سم شناسي: 55

       2-1-2- طريقه ساخت محيط 12/F-DMEM براي يک ليتر: 56

       2-1-3- نسل گرداني سلول ها و جدا نمودن سلول هاي چسبيده از سطح فلاسك: 56

       2-1-4- انجماد و ذخيره نمودن سلول ها: 58

       2 -1-5- خارج كردن سلول از تانك ازت: 60

       2-1-6- شمارش سلولي به وسيله لام هموسايتومتر و ميكروسكوپ: 60

 2-2-آماده سازي ترکيب 85-ICD: 62

 2-3- بررسي مورفولوژي سلول ها: 62

2-4- آزمون هاي حسا سيت سلولي: 63

      2-4-1- آزمون MTT. 63

      2-4-2- آزمايش رنگ سنجی MTT: 65

      2-4-3-اندازه گيري IC50: 66

2-5- آزمون رنگ سنجي قرمز خنثی: 66

       2-5-1- روش دوم سنجش سيتوتوكسيسيته :NRU.. 67

 2-6- اندازه گيري آنزيم کاسپاز 8 به روش کالریمتری:. 68

 2- 7 – بررسی قطعه قطعه شدن:DNA.. 69

فصل سوم : نتایج…….. .70

3-1- بررسیهای آماری مقایسه ای سیتوتوکسیسیتی با افزایش غلظت ترکیب   ICD-85 بر رشد سلول A549 با روشMTT: 71

   3-1-1- بررسیهای آماری  مقایسه ای سیتوتوکسیسیتی  با  افزایش غلظت کمپتوتسین بررشد سلول A549  با روشMTT: 72

  3 -1-2- بررسیهای آماری  مقایسه ای  سیتوتوکسیسیتی  با  افزایش غلظت 85  ICD-بر رشد سلول A549   با روش قرمزخنثی: 73

    3-1-3- بررسیهای آماری مقایسه ای سیتوتوکسیسی با افزایش غلظت ترکیب کمپتوتسین بر رشدسلول A549  با روش قرمزخنثی: 75

  3-1-4- مقايسه اثر سيتوتوکسيک ترکيب ICD-85  بر رشد سلول سرطاني(A549)  و نرمال  MRC-5) وHEK293): 76

   3-1-5- مقاسيه اثر سيتوتوکسيک ترکيب کمپتوتسين بر رشد سلول سرطاني (A549)  و نرمال MRC-5)    و( HEK293: 77

3-2- اندازه گيري فعاليت آنزيم کاسپاز 8 در سلول  Hek293, A549: 81

3-3- اثرترکیبICD-85 برDNA ژنومی:. 83

3-4- نتایج تغييرات مورفولوژيکي سلول هاي سرطا ني A549درتماس با ترکيبICD-85: 84

 3-4-1-نتایج  تغييرات مورفولوژيک سلول سرطا ني A549 در تماس با کمپتوتسين : …..84

  3-4-2- نتایج تغییرات مورفولوژیک  سلول سرطانی در تماس با ترکیب ICD-85  .. . . . ….85

  3 -4-3- نتا یج مورفولوژيکي سلول هاي نرمال   Hek293پس از 48 ساعت:.. 86

4-1- بحث:.. 87

4-2- نتیجه گیری: 104

4-2- پيشنهادات: 105

5-1- منابع فارسي: 106

5-2:منابع لاتین. 107

شکل 1-1 :شیوع سرطان و مرگ و میر ناشی از آن بر اساس جنسیت ( مردان) سال 2004-2000..  5

شکل1-2: شیوع سرطان و مرگ و میر ناشی از آن بر اساس جنسیت(زنان) سا ل 2004-2000. 6

شکل1-3 : رشد سلول سرطاني. 10

شکل 1-4 : قسمتی ازریه چپ انسان. 12

شکل1- 5 : مراحل كشف و تولید دارو. 27

شکل 1-6: مکانیسم عمل داروهای ضد سرطان. 30

شکل 1-7: تبديل سلول نرمال به سلول سرطاني. 32

شکل 1-8 :آپپتوزیس.. 36

شکل 1-9 : فاکتور هاي موثر درميسرداخلی آپوپتوز با دخالت میتوکندری.. 39

شکل 1-10: ساختار كاسپازها و چگونگي فعال شدن آنهادر تصوير بالا. 42

شکل2-1:برخي از وسايل مورد نياز جهت کشت سلولي. 54

شکل2-2: طريقه پاساژ دادن سلولها 57

شکل 2-3 : طريقه انجماد و ذخيره نمودن سلول ها 59

شکل2-4 : لام هموسایتومتر جهت شمارش سلول. 60

شکل 2-5 : سلول سرطاني A549. 61

شکل 2-6:سلو ل سرطانی MRC-5. 61

شکل 2-7 :سلول نرمال HEK293. 62

شکل 2-8 : رنگ بنفش حاصل از احيايMTT به فورمازان نامحلول. 64

شکل 2-9 : نمايي از ميتوکندري و ليزوزم 64

شکل3-1: منحني لگاريتمي اثر سيتوتوکسيک غلظتهاي گوناگون ترکيب ICD-85 در سلول هاي  A549  اندازه گيري شده به روش MTT   72

شکل 3-2:منحني لگاريتمي اثر سيتوتوکسيک غلظتهاي گوناگون ترکيب کمپتوتسين در سلول هاي A549 اندازه گيري شده به روش MTT   73

شکل 3-3 : منحني لگاريتمي اثر سيتوتوکسيک غلظتهاي گوناگون ترکيب ICD-85 در سلول هاي A549 اندازه گيري شده به روش قرمز خنثی  74

شکل 3-4 :منحني لگاريتمي اثر سيتوتوکسيک غلظتهاي گوناگون ترکيب کمپتوتسين درسلول هاي A549 اندازه گيري شده به قرمز خنثی  76

شکل 3-5 : نمودار ستوني مقايسه  اثر مهاري ترکيب  ICD-85بر روي سلول سرطاني و نرمال با  استفاده از آزمون قرمز خنثی و MTT   77

شکل 3-6 : نمودار ستوني مقايسه اثر مهاري ترکيب کمپتوتسين بر روي سلول نرمال و سرطانی. 78

شکل 3-7: نمودار ستوني اثرترکيب  ICD-85برمیزان فعالیت کاسپاز 8 در سلول نرمال و سرطانی. 82

شکل3 -8 :اثر ترکیب ICD-85 برDNA ژنومی در سلول سرطانی و نرمال. 83

شکل 3-9 :تغييرات مورفولوژيکي سلول هاي سرطان ((A549 84

شکل 3-10:تغييرات مورفولوژيکي سلول سرطاني (A549) 85

شکل 3-11:تغييرات مورفولوژيکي سلول سرطاني (MRC-5) 85

شکل 3-12: تغييرات مورفولوژيکي سلول هاي نرمال293) (HEK.. 86

 جدول 1-1: تفاوت بين رشد خوش خيم و بدخيم 9

جدول 1-2: برخي عوامل محيطي ايجاد کننده سرطان. 19

جدول 1-3: مهم ترين علائم هشدار دهنده سرطان از انجمن سرطان آمريکا 20

جدول 1-4 : انواع داروهاي ضد سرطان تجاري.. 31

جدول 1-5 : مقايسه آپوپتوز ونکروز. 43

جدول2-1: مواد مورد نياز. 51

جدول2-2 : وسايل مورد نياز. 52

جدول 2-3 : تجهيزات مورد نياز. 53

جدول3-1: مطالعات آماري دردو رده سلولي بر روي7 غلظت مختلف ترکيبICD-85 در زمانهاي مختلف (24،48و72 ساعت) 79

جدول3-2: مطالعات آماري در دو رده سلولي بر روي غلظت های  مختلف کمپتوتسين  در  زمانهاي مختلف  (24،48و72 ساعت) 80

نقد و بررسی‌ها

هنوز بررسی‌ای ثبت نشده است.

اولین کسی باشید که دیدگاهی می نویسد “بررسی اثرسایتوتوکسیسیته 85ICD- (پپتیدهای مشتق ازسموم جانوری) برروی سلول سرطانی)549(A و نرمال(5MRC-”

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *

قبلا حساب کاربری ایجاد کرده اید؟
گذرواژه خود را فراموش کرده اید؟
Loading...
enemad-logo