%46تخفیف

بررسي ميزان آلودگي Encephalitozoon cuniculi در خرگوشهای آزمایشگاهی مراكزتحقيقاتي و خرگوشهاي اهلي با روشهاي مولكولي

 

تعداد73 صفحه در فایل word

گروه آموزشي پاتوبیولوژی

 

کارشناسی ارشد در رشته انگل شناسی دامپزشکی

 

بررسي ميزان آلودگي Encephalitozoon cuniculi در خرگوشهای آزمایشگاهی مراكزتحقيقاتي و خرگوشهاي اهلي با روشهاي مولكولي

چكيده:

انسفاليتوزون كانيكولي تك ياخته داخل سلولی اجباری در شاخه ميكروسپوريدیا مي‌باشدكه بيماري ناشي از آن ،انسفاليتوزونوزيس ، يكي از عوامل مهم فلجي تشنج و مرگ و مير در بين خرگوشهاي آزمايشگاهي و خرگوشهاي اهلي مي باشد.و يك بيماري زئونوز بين انسان و خرگوش بوده روشهاي مختلف براي تشخيص اين پاتوژن در خرگوش استفاده مي شود كه يكي از حساسترين و اختصاصي ترين تكنيك هاي تشخيص ، روشهاي مولكولي مي باشد.

هدف از اين مطالعه بررسي اين انگل پاتوژن در کلني خرگوشهاي آزمايشگاهي نژادNew Zealand White و خرگوشهاي اهلي بود.از آنجایيکه تاکنون هيچگونه تحقيقي بر روي اين انگل‌در حيوانات آزمايشگاهي وخرگوشهاي اهلي ايران صورت نگرفته است.60 سر خرگوش ازمایشگاهی نژاد New Zealand Whiteبطور تصادفی از 6 مرکز پرورش حیوانات آزمایشگاهی و تعداد 9 سرخرگوش اهلي از بازار فروش حیوانات خانگی خریداری شد و به آزمایشگاه منتقل گردیدند.مغز خرگوشها بدقت از جمجه خارج  و به دو نيم تقسيم گرديدند.نيمي از آن در فرمالين 10% و نيمي ديگرآندر فريزر 20- درجه‌سانتي‌گراد قرار داده شدند.از بافتهاي مغز به روش فنل كلروفرم، DNA استخراج و سپس  Nested-PCRانجام شد.تعداد 7 مورد از 9 خرگوش اهلي مورد مطالعه (7/77%) و 2 مورد از خرگوشهاي آزمايشگاهي (3/3%) آلوده به انسفاليتوزون بودند.در مطالعه حاضر با تهيه مقاطع هيستوپاتولوژي از خرگوشهاي آزمايشگاهي ، شواهدی از انسفاليتوزون مشاهده نشد.نتايج حاصل از اين تحقيق با توجه به اينكه اين انگل بين انسان و خرگوش مشترك بوده و سبب ايجاد بيماري در انسان مي گردد لزوم بررسي و رديابي اين انگل در تعداد نمونه هاي بيشتري از خرگوشهاي اهلي و آزمايشگاهي ضرورت دارد در كودكان و افراد نقص سيستم ايمني و مبتلايان به ايدز اين انگل به عنوان عفونت فرصت طلب شناخته شده است.

واژه هاي كليدي:انسفاليتوزون كانيكولي ، ميكروسپوريدیا ، خرگوش ، Nested-PCR ، هيستوپاتولوژي، ايران

 

فهرست مطالب

چكيده: 1

مقدمه 2

فصل اول 6

کلیات 6

1-1.تاریخچه 7

2-1.مروري بر اهميت موضوع 11

3-1.خرگوش آزمايشگاهي 14

1-3-1.خصوصيات بيولوژيکي خرگوش آزمايشگاهي: 18

2-3-1.كاربرد خرگوش در تحقيقات بيولوژي 20

4-1. ميكروسپوريديا 22

1-4-1.بیولوژی و فیزیولوژی 22

2-4-1.مشخصات بیولوژیک ارگانیسم 22

3-4-1.طبقه بندي علمي انگل انسفاليتوزون كانيكولي 23

4-4-1.مرفولوژي انگل: 23

5-4-1.چرخه زندگي انگل 25

6-4-1.بيماريزايي: 26

7-4-1.تشخيص: 27

8-4-1.درمان و پيشگيري: 28

5-1.ساير بيماريهاي انگلي 30

1-5-1.انگلهاي تك ياخته 30

1-1-5-1.كوكسيديوز كبدي 30

2-1-5-1.كوكسيديوز روده اي 30

3-1-5-1.كريپتوسپوريديوز 30

2-5-1. انگل هاي خارجي 31

1-2-5-1.جرب ها 31

2-2-5-1. کک 31

3-2-5-1. شپش 31

4-2-5-1. كنه 31

3-5-1. انگل هاي داخلي 32

1-3-5-1. نماتودها 32

2-3-5-1. ترماتودها  33

3-3-5-1. سستودها  33

فصل دوم 34

مواد و روش کار 34

1-2. آماده سازي خرگوشها: 35

2-2.مراحل استخراج DNA به روش فنل کلروفرم: 35

3-2.استخراج DNA: 37

4-2. واکنش زنجیره ای پلیمرازPCR: 38

5-2. پرايمر: 40

6-2. الكتروفورز: 42

7-2. هیستوپاتولوژی: 43

1-7-2. روش انجام کار: 47

فصل سوم 49

نتايج 49

فصل چهارم 55

بحث ، نتيجه گيري و پيشنهادات 55

1-4. بحث و نتيجه گيري: 56

2-4. پيشنهادات 58

منابع: 59

 

فهرست جداول

جدول1-1:نژادهاي مختلف خرگوش 15

جدول2-1:اختلافات بيولوژيکي و فيزيولوژيکي خرگوش اهلي  و خرگوش وحشي يا صحرايي 17

جدول3-1: نماتودهايي که در خرگوش آزمايشگاهي آلودگي انگلي ايجاد مي کنند . 32

جدول 1-2:مواد لازم جهت استخراج DNA به روش فنل-کلروفرم 37

جدول2-2: وسايل لازم جهت استخراج DNA به روش فنل-كلروفرم 37

جدول 3-2:  مقدار و غلظت مواد بكار رفته براي PCR 38

جدول 4-2:  مقدار و غلظت مواد بكار رفته براي Nested-PCR 38

جدول 5-2: برنامه استفاده شدهPCR 39

جدول 6-2:  برنامه استفاده شدهNested-PCR 39

جدول7-2: توالي پرايمر هاي بكار رفته در تكنيكNested PCR- 40

جدول8-2:  مواد لازم جهت انجام هیستو پاتولوژی 43

جدول9-2: تجهیزات لازم انجام هیستوپاتولوژی 43

جدول10-2: نحوه ساختن رنگ هماتوکسیلن: 45

جدول11-2: نحوه ساختن رنگ ائوزین 46

جدول 1-3:درصد آلودگي خرگوشهاي مورد مطالعه به انگل انسفاليتوزون كانيكولي به روش مولكولي 54

فهرست شکل ها و نمودارها

شکل1-1:خرگوش آزمايشگاهي 14

شکل2-1: نژاد هاي مختلف خرگوش آزمايشگاهي 15

شکل3-1: Pika 16

شکل4-1: خرگوش صحرايي Hare 17

شکل5-1: مقايسه تراکم استخواني گربه با خرگوش 18

شکل6-1: شكاف لب بالا در خرگوش) 18

شکل7-1: فرم فعال و اسپورهايEncephalitozooncuniculi 24

شكل 8-1:چرخه زندگي انسفاليتوزون كانيكولي 25

شکل9-1: : سیست های کاذب (Pseudocysts)  داخل سلولی  . 28

شکل10-1: خرگوش هاي مبتلا به Encephalitozoonosis   با علائم فلجي 29

شکل11-1: ضايعات گرانولوماتوزدر كليه هاي خرگوش مبتلا به Encephalitozoonosis 29

شكل1-2: موقعيت پرايمر Forward و Reverse در ژن16ssrRNA 40

شكل 2-2:موقعيت پرايمر Forward و Reverse در ژن16small ribosomal RNA 41

تصویر1-3: نمونه DNA استخراج شده از مغز خرگوش آزمايشگاهي 50

تصویر2-3:  نمونه DNA استخراج شده از مغز خرگوش اهلي 50

تصویر3-3: نتايج PCR مربوط به خرگوش آزمایشگاهی غير آلوده 51

تصویر 4-3 : نتايج PCRمرحله اول در خرگوش هاي اهلي 52

تصویر5-3: نتايج  Nested- PCRدر خرگوش هاي اهلي 52

تصویر 6-3: مقطع هیستوپاتولوژی از بافت مغز خرگوش آزمایشگاهی مورد مطالعه(رنگ آميزيH&E) 53

نمودار1-3:فراواني آلودگي خرگوشهاي مورد مطالعه به انگل انسفاليتوزون كانيكولي به روش مولكولي 53

 

قبلا حساب کاربری ایجاد کرده اید؟
گذرواژه خود را فراموش کرده اید؟
Loading...
enemad-logo