%53تخفیف

بررسي مقاومت آنتي بيوتيكي كلبسيلاهاي جداشده از عفونت‌هاي ادراري بوسيله‌ي روش‌هاي روتين وPCR

تعداد 77صفحه در فایل word

چکیده

مصرف روز افزون مواد ضد میکروبی بتالاکتام در درمان عفونت‌های باکتریایی سبب افزایش مقاومت بر علیه آن‌ها شده است. هم اکنون یکی از معضلات در درمان عفونت‌های بیمارستانی مقاومت آنزیمی به بتالاکتامازهای وسیع الطیف (ESBL) در میان ایزوله‌های بالینی به ویژه کلبسیلا پنومونیه می باشد. از آنجاییکه تعدادی از سویه ها حساسیت دوگانه در شرایط آزمایشگاهی و درون بدن نشان می دهند، انتخاب درمان موثر را با مشکل رو به رو می کند. هدف از این تحقیق بررسی الگوهای حساسیت آنتی بیوتیکی نسبت به آنتی بیوتیک‌های بتالاکتام و تحقیق پیرامون وجود ژن‌های بتالاکتامازی blaSHV، blaTEM  و blaCTX-M در نمونه‌های بالینی کلبسیلا پنومونیه می باشد. در این مطالعه ابتدا 40 نمونه ادراری از بیمارستان خاتم الانبیاء شاهرود جمع آوری و20 سویه کلبسیلا توسط آزمایش‌های بیوشیمیایی تایید شدند. در مرحله بعد تست تعیین حساسیت نسبت به 13 آنتی بیوتیک منتخب انجام شد. سپس با استفاده از روش Double Disk Test سویه‌های تولیدکننده ESBL شناسایی گردیدند. در نهایت با استفاده از روش PCR سویه های تولیدکننده آنزیم‌های SHV، TEM و CTX-M مشخص شدند. در این تحقیق بیشترین میزان مقاومت  سوش‌ها در برابر نیتروفورانتوئین دیده شد. 15n=، (75%) و بیشترین میزان حساسیت آنها در برابر ایمی پنم دیده شد 15n=، (75%). همچنین 10n=، (50%) از نمونه‌های تحت بررسی، دارای ژن‌های ESBL بودند. همچنین7  جدایه، (70%) از سویه‌های مورد بررسی حاوی ژن blaSHV ، 5 جدایه، (50%) از سویه‌ها حاوی ژن blaTEM و 3 جدایه، (30%) از سویه‌ها حاوی ژن blaCTX-M بودند. با توجه به درصد بالای مقاومت به سفالوسپورین‌های نسل سوم، انجام دقیق آزمایش‌های آنتی بیوگرام قبل از تجویز آنتی بیوتیک در عفونت ناشی از ارگانیسم‌های تولیدکننده ESBL یک ضرورت اجتناب ناپذیر است.

کلمات کلیدی: بتالاکتاماز وسیع الطیف، کلبسیلا پنومونیه، عفونت ادراری،SHV،TEM،CTX-M

فهرست مطالب

 

چکیده فارسی.. 1

فصل اول:مقدمه و اهداف تحقیق

1-1 مقدمه 2

1-2 بیان مسئله 3

 1-2-1 اهمیت و ضرورت انجام پژوهش…. 3

1-3 اهداف تحقیق در نگاه اجمالی.. 4

فصل دوم:کلیات و پیشینه تحقیق

2-1 مقدمه. 6

2-2 خانواده انتروباکتریاسه 7

2-2-1 جنس کلبسیلا.. 7

2-2-1-1 فیزیولوژی و ویژگی‌های کشت 8

2-2-1-2 اپیدمیولوژی 8

2-2-1-3 کپسول 9

2-2-1-4 پیلی یا فیمبریه 9

2-2-1-5 لیپوپلی ساکارید (LPS)   9

2-2-1-6 سیدروفورها 10

2-2-1-7 توکسین   10

2-3بیماریزایی.. 10

2-4 عفونت‌های مجاری ادراری.. 11

2-5 آنتی بیوتیک‌های بتالاکتام 12

2-5-1 انواع بتالاکتام. 14

2-5-1 -1پنی سیلین ها 14

2-5-1-2 بنزیل پنی سیلین.. 14

2-5-1-3  فنوکسی متیل پنی سیلین.. 14

2-5-1-4 آمپی سیلین ومشتقات وابسته. 14

2-5-1-5 پنی سیلین‌های مقاوم به پنی سیلیناز. 15

2-5-1-6 پنی سیلین‌های وسیع الطیف…. 15

2-5-1-7 آمیدینوپنی سیلین‌.. 16

2-5-1-8 کربوکسی پنی سیلین ها 16

2-5-1-9 تموسیلین.. 17

2-6 سفالوسپورین.. 17

2-6-1نسل اول. 18

2-6-2 نسل دوم. 19

2-6-3 نسل سوم. 20

2-6-4 نسل چهارم. 22

2-7 کارباپنم. 23

2-8 مونوباکتام‌. 23

2-9 مهارکننده‌های بتالاکتاماز. 24

2-9-1 کلاولانیک اسید. 24

2-9-2 تازوباکتام. 24

2-9-3 سولباکتام. 24

2-10 مکانیسم عمل آنتی بیوتیک‌های بتالاکتام. 24

2-11 مکانیسم عمل مهارکننده‌های بتالاکتاماز. 25

2-12 مقاومت باکتریایی.. 25

2-13 آنزیم‌های بتالاکتاماز. 27

2-14 طبقه بندی آنزیم‌های بتالاکتاماز. 27

2-14-1 طبقه بندی بر اساس جایگاه فعال آنزیم 27

2-14-2 طبقه بندی بر اساس خصوصیات مولکولی.. 28

2-14-3 طبقه بندی بر اساس خصوصیات عملکردی 28

2-15 منشائ ژنتیکی آنزیم‌های بتالاکتاماز. 31

2-16آنزیم‌های بتالاکتاماز معمول. 31

2-16-1 TEM 31

2-16-2 SHV 32

2-16-3  AmpC 33

2-17  بتالاکتامازهای وسیع الطیف (ESBLS) 33

2-17-1  بتالاکتامازهای وسیع الطیف TEM… 35

2-17-2 بتالاکتاماز وسیع الطیف SHV.. 36

2-17-3  بتالاکتامازهای وسیع الطیف CTXM… 37

2-17-4 Toho- بتالاکتاماز. 38

2-17-5  OXA- بتالاکتاماز. 38

2-18  انواع دیگر ESBLS 38

2-18-1PER 39

2-18-2 VEB.. 39

2-19 پراکنش آنزیم‌های ESBL. 39

2-20  فاکتورهای احتمالی موثر برای اکتساب ESBL. 40

2-21 مطالعات مربوط به PCR.. 40

2-21-1 کاربردهای PCR.. 41

فصل سوم:مواد و روش‌ها

3-1 وسايل و مواد مصرفي براي كشت و جداسازي کلبسیلا پنومونیه. 44

3-2 وسايل و مواد مصرفي براي استخراج  DNA.. 44

3-2-1 وسايل مصرفي براي استخراج  DNA.. 44

3-2-2 محلول‌ها و مواد مصرفي براي استخراج  DNAوانجام PCR.. 45

آب مقطر ديونيزه استريل مخصوصPCR.. 45

3-3 وسايل و مواد مصرفي براي الكتروفورز. 46

پودر آگارز  (Cinagen, Iran) 46

3-4 روش تهيه‌ي محلول‌ها و مواد مصرفي.. 46

3-4-1 محلول شماره I 46

3-4-2 محلول شماره II 46

3-4-3 بافر TBE (1X). 46

3-5  روش کار. 47

3-5-1 جمع آوری نمونه. 47

3-5-2 مورفولوژی و رنگ آمیزی.. 47

3-5-3  رنگ آمیزی گرم. 47

3-5-4 تست مصرف سیترات (Simmon Citrat Agar) 48

3-5-6 تست اوره آز. 48

3-5-7 Methyl-Red Vogase-Proskauer (MR-VP) test 48

3-5-8 Triple Sugar Iron Agar (TSI) test 48

3-5-9 محیط کشت (Sulfide-Indol-Moltility) SIM… 49

3-5-10 محیط‌های کشت… 49

3-5-11 نگهداری و کشت نمونه‌ها 50

3-6  تعیین مقاومت آنتی بیوتیکی.. 50

3-6-1 روش آنتی بیوگرام. 50

3-7  تشخیص بتالاکتامازهای وسیع الطیف (ESBL) 52

3-7-1 تست غربالگیری.. 52

3-7-2  تست تاییدی برای فنوتیپ ESBL. 52

         3-8  آزمایشات مولکولی.. 53

3-8-1  استخراج DNA……………………………………………………………………………………………………….. 53

3-8-2 طرز تهیه محلول های مورد نیاز برای استخراج DNA.. 54

3-8-3 تعیین غلظت DNA با دستگاه اسپکتروفتومتر. 54

3-8-4  تهیه مخلوط واکنش PCR.. 54

3-8-5  طرز تهیه ژل آگارز1 درصد. 57

3-8-6 انتقال محصولاتPCR  به چاهك‌هاي ژل و مشاهده‌ی باندها 58

فصل چهارم:نتایج

4-1 شناسایی و تعیین هویت باکتری‌ها 60

4-2 نتایج حاصل از تست های بیوشیمیایی بر روی 40 جدایه عفونت ادراری 60

4-3  نتایج حاصل از آنتی بیوگرام. 62

4-4  بررسی نتایج تشخیص بتالاکتاماز وسیع الطیف…. 64

4-5 تایید استخراج DNA.. 65

4-6  نتایج حاصل از انجام PCR.. 66

4-6-1  بررسی وجود ژن bla SHV در سویه‌های کلینیکی.. 66

4-6-2  بررسی وجود ژن bla CTX-M در سویه‌های کلینیکی.. 67

4-6-3  بررسی وجود ژن  bla TEMدر سویه‌های کلینیکی.. 68

فصل پنجم:بحث وپیشنهادات

5-1بحث… 71

5-2نتیجه گیری نهایی:……………………………………………………………………………………………………………………………75

5-3پیشنهادات……………………………………………………………………………………………………………………………………….76

منابع و مآخذ. 77

چکیده انگلیسی……………………………………………………………………………………………………………………………………..

قبلا حساب کاربری ایجاد کرده اید؟
گذرواژه خود را فراموش کرده اید؟
Loading...
enemad-logo