بررسي مقاومت آنتي بيوتيكي سويه هاي اسيد لاكتيك جداسازي شده از پنير سنتي تالشي

فهرست مطالب

عنوان                                                                                                          صفحه

چكيده…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………. 1

 

فصل اول: مقدمه          

1-1-مقدمه………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 2

1-2- پنيرهاي توليد شده ازشير گوسفند……………………………………………………………………………………………………… 5

1-3- كيفيت ميكروبي پنيرهاي آب نمكي……………………………………………………………………………………………………. 5

1-4- تنوع ميكروبي در انواع پنير………………………………………………………………………………………………………………… 6

1- 5- عوامل موثر بر رشد باكتري ها درپنير……………………………………………………………………………………………….. 6

1-6- باكتري هاي اسيدلاكتيك……………………………………………………………………………………………………………………. 7                1-6-1- باكتري هاي آغازگر……………………………………………………………………………………………………………………………………… 7

1-6-2- باكتري هاي غيرآغازگر…………………………………………………………………………………………………………………. 8

1-6-2-1- پديوكوكسي ها…………………………………………………………………………………………………………………………. 8

1-6-2-2- لكونوستوك ها…………………………………………………………………………………………………………………………. 9

1-6-2-3- آنتروكوكسي ها………………………………………………………………………………………………………………………… 9

1-6-2-4- لاكتوباسيلوس ها………………………………………………………………………………………………………………………. 9

1-7- منشا باكتري هاي غير آغازگر…………………………………………………………………………………………………………….. 10

1-8-بيان مساله…………………………………………………………………………………………………………………………………………… 10

1-9- ضرورت انجام تحقيق……………………………………………………………………………………………………………………….. 13

1-10- اهداف پژوهش……………………………………………………………………………………………………………………………….. 13

1-11-فرضيه هاي پژوهش…………………………………………………………………………………………………………………………. 13

1-12-تعريف متغيرها و پيش فرض هاي پژوهش………………………………………………………………………………………. 14

1-13- تعريف اصطلاحات…………………………………………………………………………………………………………………………. 14

1-13-1 پنير……………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 14

1-13-2- باكتري هاي اسيد لاكتيك……………………………………………………………………………………………………………. 14

1-13-3-آنتي بيوتيك ها…………………………………………………………………………………………………………………………….. 15

1-13-4- مفهوم MIC………………………………………………………………………………………………………………………………… 15

 

 

فصل دوم :  مروري بر تحقيقات انجام شده

2-1- آنتي بيوتيك و مقاومت آنتي بيوتيك…………………………………………………………………………………………………. 16

2-2- اهميت و گسترش مقاومت آنتي بيوتيكي…………………………………………………………………………………………… 17

2-3- ميكروارگانيسم هاي كومنسال و مقاومت انتي بيوتيكي………………………………………………………………………. 17

2-4- ايمني باكتري اسيدلاكتيك………………………………………………………………………………………………………………….. 18

2-5-مقاومت انتي بيوتيكي در باكتري هاي اسيد لاكتيك…………………………………………………………………………….. 19

2-6- انتقال افقي مقاومت آنتي بيوتيكي به باكتري هاي اسيد لاكتيك و از باكتري هاي اسيد لاكتيك…………… 23

2-7-سنجش ميزان مقاومت به انتي بيوتيك………………………………………………………………………………………………… 26

فصل سوم : مواد و روش ها     

3-1-  مواد مصرفی…………………………………………………………………………………………………………………………………….. 28

3-1-1- محیط کشت broth  MRS(Merck، آلمان)………………………………………………………………………………. 28

3-1-2-محیط کشتAgar  M17 (Merck، آلمان)………………………………………………………………………………….. 28

3-1-3-  محیط کشت Muller Hinton (Merck، آلمان)………………………………………………………………………. 28

3-1-4-آگار (Merck، آلمان)…………………………………………………………………………………………………………………….. 28

3-1-5- گلیسرول (Merck، آلمان)……………………………………………………………………………………………………………. 28

3-1-6-آب اکسیژنه (Merck، آلمان)………………………………………………………………………………………………………… 28

3-1-7-پنی سیلین (داروسازی سها، ایران)…………………………………………………………………………………………………. 28

3-1-8- ریفامپسین (داروسازی سها، ایران)………………………………………………………………………………………………… 28

3-1-9-آمپی سیلین (داروسازی سها، ایران)……………………………………………………………………………………………….. 28

3-1-10-کلرامفنیکل (داروسازی سها، ایران)………………………………………………………………………………………………. 28

3-1-11-اریترومایسین (داروسازی سها، ایران)…………………………………………………………………………………………… 28

3-1-12-تتراسایکلین (داروسازی سها، ایران)…………………………………………………………………………………………….. 28

3-1-13-جنتامایسین (داروسازی سها، ایران)……………………………………………………………………………………………… 28

3-1-14-کانامایسین (داروسازی سها، ایران)……………………………………………………………………………………………….. 28

3-1-15-استرپتومایسین (داروسازی سها، ایران)…………………………………………………………………………………………. 28

3-1-16-نئومایسین (داروسازی سها، ایران)………………………………………………………………………………………………… 28

3-1-17-کلرور باریوم (Merck، آلمان)…………………………………………………………………………………………………….. 28

3-1-18-اسیدسولفوریک (Merck، آلمان………………………………………………………………………………………………….. 28

3-2- دستگاه های آزمایشگاهی…………………………………………………………………………………………………………………… 28

3-2-1- گرمخانه (طب آزما، ایران)…………………………………………………………………………………………………………….. 28

3-2-2- جار بی هوازی (طب آزما، ایران)………………………………………………………………………………………………….. 28

3-2-3- pH  سنج (طب آزما، ایران)………………………………………………………………………………………………………….. 28

3-2-4- ورتکس )فن آزما گستر، ایران)……………………………………………………………………………………………………… 28

3-2-5- اتوکلاو  (ریحان طب، ایران)…………………………………………………………………………………………………………. 29

3-2-6-میکروسکوپ (ایتالیا)……………………………………………………………………………………………………………………… 29

3-3-فعال سازي مجدد جدايه ها………………………………………………………………………………………………………………… 29

3-4-روش رقيق سازي……………………………………………………………………………………………………………………………….. 29

3-4-1- تهيه محلول هاي مادر……………………………………………………………………………………………………………………. 29

3-4-2-بدست آوردن ساير محدوده هاي غلظتي آنتي بيوتيك ها……………………………………………………………….. 30

3-4-3- تهيه مايع تلقيح……………………………………………………………………………………………………………………………… 31

3-4-3-1-تهيه استاندارد نيم مك فارلند……………………………………………………………………………………………………… 31

3-4-3-2- تهيه معلقه ميكروبي………………………………………………………………………………………………………………….. 31

3-4-4- نحوه ي كشت………………………………………………………………………………………………………………………………. 31

3-4-5-نحوه ي خواندن نتايج……………………………………………………………………………………………………………………. 32

فصل چهارم : نتايج و بحث

4-1- نتایج مربوط به تعیین میزان MIC با استفاده از روش میکرودیلوشن…………………………………………………. 33

4-2- تعیین میزان MIC باکتری های اسید لاکتیک در روش میکرودیلوشن……………………………………………….. 33

4-3-  بررسی میزان مقاومت آنتی بیوتیکی لاکتوباسیلوسها ………………………………………………………………………… 33

4-4-مقاومت لاکتوباسیلوس ها به آنتی بیوتیک های موثر بر روی دیواره(پني سيلين،آمپي سيلين)………………. 34

4-5-بررسی مقاومت لاکتوباسیلوس ها نسبت به آنتی بیوتیک های آمینوگلیکوزیدی موثر بر روی سنتز
پروتئین………………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 34

4-6- نتایج مربوط به بررسی مقاومت لاکتوباسیلوس ها نسبت به آنتی بیوتیک های موثر بر روی سنتز
پروتئین………………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 36

4-7- مقاومت لاکتوباسیلوس ها نسبت به آنتی بیوتیک موثر بر روی سنتز RNA………………………………………. 37

4-8- نتایج حاصل از بررسی مقاومت آنتی بیوتیکی استرپتوکوکوس گوآلیتیکوس………………………………………. 37

4-9- نتایج حاصل از بررسی مقاومت آنتی بیوتیکی انتروکوکوس فکالیس………………………………………………….. 38

4-10- دندروگرم حاصل از داده های مربوط به مقاومت آنتی بیوتیکی……………………………………………………….. 38

فصل پنجم: نتيجه گيري

5-1- تفسیر و مقایسه نتایج مربوط به تعیین میزان MIC……………………………………………………………………………. 40

5-2- تفسیر و مقایسه نتایج مربوط به رسم دندروگرم و بررسی الگوی فنوتیپی………………………………………….. 47

5-3- نتیجه گیری و پیشنهادات …………………………………………………………………………………………………………………. 50

5-3-1- مقاومت نسبت به پنی سیلین و آمپی سیلین…………………………………………………………………………………… 52

5-3-2- مقاومت نسبت به جنتامایسین، کانامایسین، نئومایسین و استرپتومایسین………………………………………… 53

5-3-3-مقاومت نسبت به آنتی بیوتیک های اریترومایسین،کلرامفنیکل، تتراسایکلین……………………………………. 53

5-3-4-مقاومت نسبت به ریفامپسین…………………………………………………………………………………………………………… 54

5-3-5- نتایج کلی مربوط به بررسی دندروگرم…………………………………………………………………………………………… 54

5-4-پیشنهادات…………………………………………………………………………………………………………………………………………… 54

منابع……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………. 55

فهرست جداول

عنوان                                                                                                            صفحه

جدول 4-1- بررسی مقاومت لاکتوباسیلوس ها نسبت به آنتی بیوتیک های بتالاکتام موثر بر روی دیواره……. 34

جدول 4-2- بررسی مقاومت لاکتوباسیلوس ها نسبت به آنتی بیوتیک های بتالاکتام موثر بر روی دیواره……. 35

جدول 4-3- بررسی مقاومت لاکتوباسیلوس ها نسبت به آنتی بیوتیک های موثر بر روی سنتز پروتئین………. 36

جدول 4-4- بررسی مقاومت لاکتوباسیلوس ها نسبت به آنتی بیوتیک های موثر بر روی سنتز RNA ……… 37

جدول 4-5- بررسی مقاومت انتروکوکوس ها و استرپتوکوکوس گوآلیتیکوس نسبت به آنتی بیوتیک ها ……. 38

فهرست اشکال

عنوان                                                                                                              صفحه

شکل 3-1 نحوه کشت و بررسی 4 جدایه در یک میکروپلیت حاوی رقت های بین (μL 128-25/0) جهت
تعیین MIC…………………………………………………………………………………………………………………………………………………. 32

شکل 4-1 ………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 38