Filenaab@gmail.com
filenaab.ir
%34تخفیف

بررسي خصوصيات بيولوژيکي و مولکولي جدايه-هاي ايراني ويروس بي بذري گوجه فرنگي (TAV) از گياهان زينتي

تعداد96 صفحه در فایل word

کارشناسي ارشد بيماري­ شناسي گياهي

 

بررسي خصوصيات بيولوژيکي و مولکولي جدايه­هاي ايراني ويروس بي بذري گوجه فرنگي (TAV) از گياهان زينتي

چکيده

       ويروس بي­بذري گوجه فرنگيTAV)) از خانواده بروموويريده و جنس کوکوموويروس بوده که از اکثر نقاط دنيا گزارش گرديده و در ميزبان­هاي متعددي ايجاد بيماري مي­کند. ژنوم ويروس متشکل از سه قطعه آر.ان.اي تک رشته­اي مثبت مي باشد که پروتئين­هاي متفاوتي را کد مي­نمايد. در اين تحقيق به منظور شناسايي و معرفي ويروس TAV ازايران، طي سال­هاي 88 الي90 تعداد 413 نمونه گياهي از استان­هاي کرمان، همدان، آذربايجان­غربي، آذربايجان­شرقي، فارس و يزد جمع آوري و جهت تأئيد آلودگي نمونه ها از آزمون DAS-ELISA استفاده گرديد. نتايج حاصل از اين آزمون بيانگر شناسايي و وجود ويروس بي­بذري گوجه فرنگي از روي گياهان اطلسي و داوودي در کشور بود. با توجه به اينكه ويروس TAV براي نخستين بار در ايران شناسايي مي­گردد، لذا جدايه اطلسي (Ker.Mah.P) ويروس رديابي شده از منطقه ماهان استان کرمان به منظور مطالعات مولكولي و تكثير طول کامل ژنوم و جدايه داوودي (Ker.Ker.Ch.1) نيز جهت تكثير ژن پروتئين پوششي و به دنبال آن تعيين جايگاه تکاملي آنها و مطالعات بيولوژيکي مورد بررسي قرار گرفتند. جهت تعيين دامنه ميزباني جدايه هاي ايراني TAV از 34 گونه گياهي از7 خانواده استفاده گرديد که نتايج حاصل بيانگر دامنه ميزباني گسترده جدايه­هاي ايراني TAV مي باشد. طول کامل ژنوم جدايه ايراني Ker.Mah.P و ژن CP جدايه Ker.Ker.Ch.1 نيز با استفاده از آغازگرهاي اختصاصي با روش RT-PCR تکثير و سپس همسانه سازي و تعيين ترادف گرديدند. بر­اساس نتايج بدست آمده طول قطعات RNA-1، RNA-2 و RNA-3 جدايه ايراني Ker.Mah.P به ترتيب 3351، 3008 و 2192 نوکلئوتيد تعيين گرديد و در نهايت طول کامل ژنوم اين جدايه معادل 8551 نوکلئوتيد مي باشد. همچنين نتايج حاصل از تجزيه فيلوژنتيکي براساس ناحيه ژني CP بيانگر آن است که جدايه­هاي TAV در دو گروه اصلي I و II قرار مي گيرند. گروه I نيز به دو زير گروه IIA و IIB تقسيم مي­گردد که هر دو جدايه ايراني TAV در زير گروه IIA به همراه جدايه­هاي گزارش شده از کشورهاي مختلف دنيا واقع مي­گردند. همچنين جدايه­هاي ايراني داراي ميزان مشابهت بالاي ترادف نوکلئوتيدي و اسيدهاي­آمينه مربوط به ژن پروتئين پوششي به ميزان بيش از 99 درصد با يکديگر مي­باشند. نتايج حاصل از اين تحقيق بيانگر آن است که ترادف نوکلئوتيدي جدايه­هاي ايراني TAV، علي رغم وجود اين جدايه­ها در يک منطقه جغرافيايي جديد و ميزبان متفاوت (گياه اطلسي)، شبيه ديگر جدايه­هاي گزارش  شده اين ويروس به شدت حفاظت شده مي­باشند. همچنين گياه اطلسي براي نخستين بار در دنيا به عنوان ميزبان طبيعي ويروس TAV شناسايي و گزارش مي­گردد.

کلمات کليدي: ويروس بي­بذري گوجه فرنگي، ژنوم کامل، ترادف نوکلئوتيدي، دامنه ميزباني، اطلسي

دسته: , برچسب: , , , ,

1

1-1- معرفي ويروس بي بذزي گوجه فرنگي

1

1-2- بررسي دامنه ميزبان­هاي طبيعي و علائم ويروس بي بذري گوجه فرنگي

2

1-2-1- ميز بان­هاي اوليه

2

1-2-1-1-گل داوودي

2

1-2-1-1-1- علائم ويروس بي بذزي گوجه فرنگي بر روي گياه داوودي

3

1-2-1-1-2- ديگر ويروس هاي داوودي

3

1-2-1-2- گياه گوجه فرنگي

3

1-2-1-2-1- علائم ويروس بي بذري گوجه فرنگي بر روي گياه گوجه فرنگي

4

1-2-1-2-2- ديگر ويروس هاي گوجه فرنگي

4

1-2-2- ميزبان هاي ثانويه ويروس بي­بذري گوجه فرنگي

4

1-2-2-1- خانواده Compositae

4

1-2-2-1-1-گل آهار

4

1-2-2-2- خانواده Solanaceae

4

1-2-2-2-1-گياه فلفل

5

1-2-2-3- خانواده Iridaceae

5

1-2-2-3-1- گل گلايول

5

-2-2-3-2- گل سنبل

6

1-2-2-4- خانواده Tropaeolaceae

6

1-2-2-4-1- گل لادن

6

1-2-2-5- خانواده Cannaceae

6

1-2-2-5-1- گل اختر

7

1-2-2-6- خانواده Liliaceae

7

1-2-2-6-1- گل سوسن

7

1-2-2-7- خانواده Lamiaceae

7

1-2-2-7-1- گياه نعناع

7

1-2-2-8- خانواده Leguminosae

7

1-2-2-8-1- گياه لوبيا

8

1-2-2-9- خانواده Chenopodiaceae

8

1-2-2-9-1- گياه اسفناج

8

1-2-2-10- خانواده Campanulaceae

8

1-2-2-3-10- گل استکاني

9

1-3- اهداف تحقيق

فصل دوم: مروري برمنابع

10

2-1- جايگاه ويروس بي بذري گوجه فرنگي در طبقه بندي ويروس­هاي گياهي

10

2-2- جنس کوکوموويروس

10

2-2-1- ويژگي هاي ويريون

11

2-2-2- ويژگي هاي ژنو

12

2-2-3- عملکرد پروتئين ها در جنس کوکوموويروس

12

2-2-3-1- پروتئين 1a

12

2-2-3-2- پروتئين 2a

13

2-2-3-3- پروتئين 2b

14

2-2-3-4- پروتئين 3a

14

2-2-3-5- پروتئين پوششي (CP)

15

2-3- ويروس بي­بذري گوجه فرنگي در جهان

16

2-3-1- سازماندهي ژنوم ويروس بي­بذري گوجه فرنگي

16

2-3-2- آر.ان.اي­هاي ژنومي

16

2-3-2-1- قطعه RNA-1

17

2-3-2-2- قطعه RNA-2

18

2-3-2-3- قطعه RNA-3

18

2-3-3- آر.ان.اي­هاي زير­ژنومي

19

2-4- دامنه ميزباني و علائم ويروس بي­بذري گوجه فرنگي

19

2-4-1- دامنه ميزباني ويروس بي­بذري گوجه فرنگي بر روي گياهان آزمون

19

2-4-2- گياهان تشخيصي ويروس ويروس بي­بذري گوجه فرنگي

20

2-4-3-گياهان تکثيري ويروس بي­بذري گوجه فرنگي

20

2-5- تفاوت­هاي ويروس بي­بذري گوجه فرنگي و ويروس موزائيک خيار

21

2-6 – روش­هاي انتقال ويروس بي­بذري گوجه فرنگي

21

2-6-1- انتقال با حشره ناقل

21

2-6-2- انتقال با بذر

21

2-6-3- انتقال با سس

21

2-7- سرولوژي

22

2-8- ويژگي هاي فيزيکي و فيزيوشيميايي

22

2-9- مکانيزم ايجاد بي بذري توسط ويروس بي­بذري گوجه فرنگي

23

2-10- زيان هاي اقتصادي توسط ويروس بي­بذري گوجه فرنگي

23

2-11- نقش پروتئين حرکتي ويروس بي­بذري گوجه فرنگي در بروز علائم

24

2-12- نقش پروتئين پوششي ويروس بي­بذري گوجه فرنگي در ايجاد آلودگي سيستميک در گياه

25

2-13- هيستولوژي

فصل سوم: مواد و روش­ها

26

3-1- نمونه برداري

26

3-2- آزمون الايزا

26

3-2-1- مراحل الايزاي ساندويچ دو طرفه

27

3-2-2- بافرهاي مورد استفاده در آزمون هاي الايزا

29

3-3- تعيين دامنه ميزباني ويروس بي­بذري گوجه فرنگي و مطالعات گلخانه اي

29

3-3-1- بافر فسفات 1/0 مولار 7 pH=

30

3-4- مطالعات مولکولي

30

3-4 -1- استخراج Total RNA با استفاده از کيت High pure viral nucleic acid kit

31

3-4-2- آزمون واکنش زنجيره اي پليمراز به روش نسخه برداري معکوس

31

3-4-2-1- مرحله سنتز cDNA

32

3-4-2-2- مراحل آزمون PCR

32

3-4-3- آغازگرهاي اختصاصي مورد استفاده جهت تکثير ژنوم جدايه ايراني ويروس بي­بذري گوجه فرنگي

32

3-4-4- الکتروفورزافقي

33

3-4-4-1- مواد لازم جهت تهيه بافر TBE

33

3-4-4-2- آماده سازي نشانگر مولکولي

33

3-5- همسانه سازي و تعيين توالي قطعات مختلف ژنوم جدايه ايراني ويروس بي­بذري گوجه فرنگي مجزا شده از گياه اطلسي (Ker.Mah.P) و ژن پروتئين پوششي جدايه مجزا شده از گياه داوودي (Ker.Ker.Ch.1)

34

3-5-1- قراردادن قطعه DNA موردنظر درون ناقل (Ligation)

34

3-5-1-1- خالص سازي محصول پي.سي.آر با استفاده از کيت (High Pure PCR Product Purification Kit)

34

3-5-1-2- استخراج از ژل با استفاده از کيت Agarose Gel DNA Extraction Kit

35

3-5-2- مراحل آماده سازي باکتري جهت عمل ترنسفورماسيون (Transformation)

35

3-5-2-1- کشت باکتري Escherichia coli بر روي محيط کشت جامد (Luria Bertani)  LB

36

3-5-2-2-کشت باکتري E.coli در محيط مايع C-medium

36

3-5-2-3- تهيه سلول هاي مستعد (competent cell) باکتري E.coli

37

3-5-3- انتقال پلاسميد نوترکيب به درون باکتري E.coli (Transformation)

37

3-5-4- محيط کشت جامد حاوي آمپي سيلين، IPTG و X-gal

38

3-5-5- انتخاب پرگنه جهت استخراج پلاسميد نوترکيب

38

3-5-6- استخراج پلاسميد نوترکيب از باکتري توسط روش Boiling:

39

3-5-7- استخراج پلاسميد نوترکيب از باکتري توسط High Pure Plasmid Isolation Kit,

40

3-5-7-1- مواد تشکيل دهنده بافرهاي استفاده شده در استخراج پلاسميد

40

3-5-8- هضم آنزيمي پلاسميد (Digestion)

41

3-5-9- انجام الکتروفورز جهت بررسي صحت انجام عمل هضم آنزيمي پلاسميد و همسانه سازي

41

3-6- نگهداري باکتري حاوي پلاسميد نوترکيب

41

3-7- آماده سازي نمونه ها به منظورتعيين توالي نوکلئوتيدي

41

3-8- تعيين ترادف ژنوم کامل جدايه ايراني ويروس بي­بذري گوجه فرنگي مجزا شده از گياه اطلسي (Ker.Mah.P) و ژن پروتئين پوششي جدايه مجزا شده از گياه داوودي (Ker.Ker.Ch.1) و مقايسه آن­ها با ساير جدايه هاي موجود در بانک ژن

فصل چهارم: نتايج

43

4-1- شناسايي و معرفي ويروس بي بذري گوجه فرنگي در ايران

43

4-1-1- علائم جدايه هاي شناسايي شده

43

4-1-1-1- جدايه اطلسي (Ker.Mah.P)

43

4-1-1-2- جدايه داوودي (Ker.Ker.Ch.1)

44

4-2- تعيين دامنه ميزباني جدايه­هاي ايراني ويروس بي­بذري گوجه فرنگي

44

4-2-1- بررسي علايم ايجاد شده بر روي گياهان مايه زني شده خانواده Solanaceae

44

4-2-1-1- علائم ايجاد شده بر روي ميزبان هاي طبيعي ويروس بي­بذري گوجه فرنگي

44

4-2-1-1-1-گياه گوجه فرنگي

44

4-2-1-1-2- گياه فلفل

45

4-2-1-1-3- گل اطلسي

45

4-2-1-2- علائم بر روي ميزبان¬هاي آزمايشگاهي ويروس در خانواده Solanaceae

45

4-2-1-2-1- گياه توتون Nicotiana glutinosa L.

45

4-2-1-2-2- گياه توتون Nicotiana Clevelendii Gray.

46

4-2-1-2-3- گياه توتون Nicotiana tabacum L. cv. Whiteburly

46

4-2-1-2-4- گياه توتون Nicotiana debneyii L.

46

4-2-1-2-5- گياه توتون Nicotiana tabacum var Samsun NN.

46

4-2-1-2-6- گياه توتون Nicotiana tabacum L. cv. Turkish

46

4-2-1-2-7- گياه داتوره.Datura maxima L

47

4-2-1-2-8-گياه داتوره.Datura stramonium L

47

4-2-2- بررسي علايم ايجاد شده بر روي گياهان مايه زني شده خانواده Compositaeae

47

4-2-2-1- گل داوودي

47

4-2-2-2- گل آهار

48

4-2-2-3- گل آفتابگردان زينتي

48

4-2-3- بررسي علايم ايجاد شده بر روي گياهان مايه زني شده خانواده Chenopodiaceae

48

4-2-3-1- گونه­هاي کنوپودييوم

48

4-2-3-2- گياه اسفناج

48

4-2-4- بررسي علايم ايجاد شده بر روي گياهان مايه زني شده خانواده Cucurbitaceae

49

4-2-4-1- گياه خيار رقم Peto Seed

49

4-2-5- بررسي علايم ايجاد شده بر روي گياهان مايه زني شده خانواده Leguminosae

49

4-2-5-1- گياه لوبيا چشم بلبلي رقم مشهد

49

4-2-5-2- گياه لوبيا سبز رقم Sunrise

49

4-3- استخراج Total RNA و آزمون RT-PCR

50

4-4- همسانه سازي قطعات تکثير شده ژنوم جدايه هاي ايراني ويروس بي بذري گوجه فرنگي

51

4-5- تعيين ترادف طول کامل ژنوم جدايه Ker.Mah.P و تعيين جايگاه تکاملي جدايه­هاي ايراني ويروس بي­ بذري گوجه فرنگي

فصل پنجم: بحث

52

5-1- بحث

60

منابع مورد استفاده

پيوست­ها

جداول

68

جدول 1-1- ميزبانان طبيعي ويروس بي بذري گوجه فرنگي

69

جدول 2-1- طبقه بندي ويروس بي بذري گوجه فرنگي

69

جدول 2-2- اسامي برخي از کشورهايي که ويروس بي­بذري گوجه فرنگي از آن­ها گزارش گرديده است.

70

جدول 2-3- خصوصيات آر.ان.اي هاي ژنومي ويروس بي بذري گوجه فرنگي

70

جدول 3-1- استان هاي نمونه برداري شده در اين مطالعه طي سالهاي 90-88

71

جدول3-2- نام علمي خانواده و گياهان نمونه برداري شده جهت شناسايي ويروس بي بذري گوجه فرنگي

71

جدول 3-3- نام خانواده هاي گياهاني که جهت تعيين دامنه ميزباني و شناسايي ويروس بي بذري گوجه فرنگي در اين تحقيق استفاده شدند.

72

جدول 3-4- نام گياهاني که جهت تعيين دامنه ميزباني و شناسايي ويروس بي بذري گوجه فرنگي استفاده شدند.

73

جدول 3-5- خصوصيات آغازگرهاي مورد استفاده جهت تکثير قطعه RNA-1 جدايه ايراني Ker.Mah.P مجزا شده از گياه اطلسي

74

جدول 3-6- خصوصيات آغازگرهاي مورد استفاده جهت تکثير قطعه RNA-2 جدايه ايراني Ker.Mah.P مجزا شده از گياه اطلسي

74

جدول 3-7- خصوصيات آغازگرهاي مورد استفاده جهت تکثير قطعه RNA-3 جدايه ايراني Ker.Mah.P مجزا شده از گياه اطلسي و ژن پروتئين پوششي جدايه Ker.Ker.Ch.1 مجزا شده از گياه داوودي

75

جدول 3-8- مواد لازم جهت ساختنcDNA  در مرحله RT

75

جدول 3-9- مواد لازم جهت انجام آزمون PCR در يک واکنش 50 ميکروليتري

76

جدول 3-10- مواد مورد نياز جهت Ligation

76

جدول3-11- مواد مورد نياز جهت تهيه 100 ميلي ليترمحيط کشت جامد

77

جدول 3-12- مواد و مقادير مورد نياز جهت تهيه 100 ميلي­ليتر بافر STET

77

جدول-3-13- مواد مورد نياز جهت هضم آنزيمي پلاسميد نوترکيب (Digestion)

78

جدول4-1- گياهان، مناطق نمونه برداري و ميزان آلودگي نسبت به ويروس بي بذري گوجه فرنگي

79

جدول4-2- جدايه هاي ايراني مورد بررسي در اين تحقيق همراه با حروف مخفف مورد استفاده

79

جدول 4-3- علائم ايجاد شده توسط جدايه­هاي ايراني ويروس بي­بذري گوجه فرنگي بر روي گياهان آزمون

81

جدول 4-4- جدايه هاي مورد بررسي ويروس بي­بذري گوجه فرنگي موجود در بانک ژن جهت مقايسه و رسم دندروگرام و تعيين جايگاه فيلوژنتيکي جدايه هاي ايراني اين ويروس

شکل­ها

83

شکل 1-1- بد شکلي و پژمردگي گل داوودي در اثر آلودگي به ويروس بي بذري گوجه فرنگي

83

شکل 1-2- رنگ پريدگي و روشن شدن سطح پهنک برگ هاي داوودي در اثر آلودگي به ويروس بي بذري گوجه فرنگي

83

شکل 1-3- شکستگي رنگ گل گلايول، موزائيک شديد ولکه هاي نکروتيک ايجاد شده توسط ويروس بي بذري گوجه فرنگي

84

شکل 1-4- علائم لکه هاي کلروتيک و رنگ پريدگي برگ هاي گياه لوبيا ايجاد شده توسط ويروس بي بذري گوجه فرنگي

84

شکل 2-1- ساختار ژنوم گونه­هاي جنس کوکوموويروس

85

شکل 4-1- علائم بدشکلي در برگ هاي گياه داوودي ايجاد شده توسط ويروس بي بذري گوجه فرنگي جمع آوري شده از مناطق گلکاري شهر کرمان

85

شکل 4-2- علائم رنگ پريدگي سطح برگ هاي گياه داوودي ايجاد شده توسط ويروس بي بذري گوجه فرنگي جمع آوري شده از مناطق گلکاري شهر کرمان

85

شکل 4-3- علايم تاولي بر روي برگ هاي گياه گوجه فرنگي. مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P

86

شکل 4-4- علايم رنگ پريدگي بر روي برگ هاي گياه گوجه فرنگي. مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P

86

شکل 4-5- علايم بدشکلي بر روي برگ هاي گياه گوجه فرنگي مايه زني شده با جدايه Ker.Ker.Ch.1

86

شکل 4-6- علايم رنگ پريدگي بر روي برگ هاي گياه فلفل مايه زني شده با جدايه Ker.Ker.Ch.1

87

شکل 4-7- علايم Calico بر روي برگ هاي گياه فلفل مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P

87

شکل 4-8- علايم رنگ پريدگي و زردي بر روي برگ هاي گياه اطلسي مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P

87

شکل 4-9- علايم بدشکلي بر روي برگ هاي گياه اطلسي مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P

88

شکل 4-10- علايم موزائيک بر روي برگ هاي گياه اطلسي مايه زني شده با جدايه Ker.Ker.Ch.1

88

شکل 4-11- علايم پيچک مانند شدن برگ ها بر روي برگ هاي گياه Nicotiana glutinosa L. مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P

88

شکل4-12- علايم پيچک مانند شدن برگ ها بر روي برگ هاي گياه
Nicotiana glutinosa L. مايه زني شده با جدايه Ker.Ker.Ch.1

89

شکل 4-13- علايم چينه داني بر روي سطح زيرين برگ هاي گياه
Nicotiana glutinosa L. مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P

89

شکل 4-14- علايم تاولي شدن برگ ها بر روي برگ هاي گياه
Nicotiana glutinosa L. مايه زني شده با جدايه Ker.Ker.Ch.1

89

شکل 4-15- علايم چينه داني بر روي سطح زيرين برگ هاي گياه
Nicotiana Clevelendii Gray. مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P

90

شکل 4-16- علايم رنگ پريدگي بر روي برگ گياهNicotiana Clevelendii Gray. مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P

90

شکل 4-17- گياه Nicotiana Clevelendii Gray. مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P

91

شکل 4-18- علايم نقش حلقوي بر روي برگ هاي گياه Nicotiana tabacum L. cv.  مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P

91

شکل 4-19- علايم لکه هاي نکروتيک بر روي برگ گياه Nicotiana tabacum L. cv. Whiteburly. مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P

91

شکل 4-20- علايم سوزني شدن برگ هاي گياه Nicotiana tabacum L. cv. Whiteburly. مايه زني شده با جدايه Ker. Ker.Ch.1

92

شکل 4-21- علايم چينه داني بر روي سطح زيرين برگ هاي گياه
 Nicotiana tabacum L. cv. Whiteburly. مايه زني شده با جدايه Ker.Ker.Ch.1

92

شکل 4-22- علايم بد شکلي و لکه هاي نکروتيک بر روي سطح برگ هاي گياه Nicotiana tabacum L. cv. Whiteburly. مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P

92

شکل  4-23- علايم ماتل بر روي برگ هاي گياه Nicotiana debneyii L. مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P

93

شکل 4-24- علايم بدشکلي بر روي برگ هاي گياه Nicotiana debneyii L. مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P

93

شکل  4-25- گياه آلوده.Nicotiana debneyii L مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P

93

شکل 4-26- علايم ماتل بر روي برگ هاي گياه Nicotiana tabacum var Samsun NN مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P

94

شکل 4-27- علايم بدشکلي بر روي برگ هاي گياه Nicotiana tabacum var Samsun NN مايه زني شده با جدايه Ker. Ker.Ch.1

94

شکل 4-28- گياه آلوده . Nicotiana tabacum L. cv. Turkish مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P

94

شکل 4-29- علايم چينه داني بر روي برگ هاي گياه Datura maxima L مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P

95

شکل 4-30- علايم موزائيک بر روي برگ هاي گياه Datura maxima L مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P

95

شکل 4-31- علايم بدشکلي بر روي برگ هاي گياه Datura maxima L مايه زني شده با جدايه Ker. Ker.Ch.1

95

شکل4-32- علايم بدشکلي و ريز برگي بر روي برگ هاي گياه داوودي مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P

96

شکل4-33- علايم رگبرگ روشني بر روي برگ هاي گياه داوودي مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P

96

شکل4-34- علايم نکروز و بدشکلي بر روي برگ هاي گياه داوودي مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P مجزا شده ازگياه اطلسي

96

شکل4-35- علايم ماتل بر روي برگ هاي گياه داوودي مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P

97

شکل 4-36- علايم بدشکلي بر روي گل هاي گياه داوودي مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P

97

شکل 4-37- علايم بدشکلي بر روي گل هاي گياه داوودي مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P

98

شکل 4-38- پژمردگي گل گياه داوودي مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P

98

شکل 4-39- علايم شکستگي رنگ بر روي گلبرگ هاي گل گياه داوودي مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P

99

شکل 4-40- علايم لکه نکروتيک و بدشکلي بر روي برگ هاي گل آهار مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P

99

شکل 4-41- علايم کوتولگي و بدشکلي بر روي برگ هاي گل آفتابگردان زينتي مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P

99

شکل 4-42- علايم لکه هاي نکروتيک بر روي برگ هاي گياه Chenopodium amaranticolor Coste et Reyn مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P

100

شکل 4-43- علايم کوتولگي گياه اسفناج مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P

100

شکل 4-44- علايم بدشکلي بر روي برگ هاي گياه اسفناج مايه زني شده با جدايه KerKer.Ch.1

100

شکل 4-45- علايم لکه هاي نکروتيک ولکه هاي کلروتيک بر روي برگ هاي گياه خيار رقم Peto Seed مايه زني شده با جدايه KerKer.Ch.1

101

شکل 4-46- علايم لکه هاي کلروتيک بر روي برگ هاي گياه لوبيا چشم بلبلي رقم مشهد مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P

101

شکل 4-47- علايم بدشکلي و سوزني شدن برگ بر روي برگ هاي گياه لوبيا سبز رقم Sunrise مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P

102

شکل4-48- الكتروفورز محصول PCR تكثير شده با استفاده از آغازگرهاي  اختصاصي  R9/F1با باند 678 جفت بازي مربوط به ژن پروتئين پوششي جدايه هاي ايراني ويروس بی بذری گوجه فرنگی درون ژل آگاروز1%

102

شکل 4-49- الكتروفورز محصول PCR تكثير شده با استفاده از آغازگرهاي  اختصاصي  R5/F3 با باند 750 جفت بازي مربوط به ژن پروتئين حرکتي جدايه Ker.Mah.P درون ژل آگاروز1%

103

شکل 4-50- الكتروفورز محصول PCR تكثير شده با استفاده از آغازگرهاي  اختصاصي  R7/F6با باند 477 جفت بازي مربوط به ناحيه  ICR قطعه RNA-3 جدايه Ker.Mah.P درون ژل آگاروز1%

103

شکل 4-51- الكتروفورز محصول PCR تكثير شده با استفاده از آغازگرهاي اختصاصيR76/F32 با باند 863 جفت بازي مربوط به ژن 2a جدايه Ker.Mah.P درون ژل آگاروز1%

104

شکل 4-52- الكتروفورز محصول PCR تكثير شده با استفاده از آغازگرهاي  اختصاصي  R43/F10با باند 1060 جفت بازي مربوط به ژن 2a جدايه Ker.Mah.P درون ژل آگاروز1%

104

شکل 4-53- الكتروفورز محصول PCR تكثير شده با استفاده از آغازگرهاي  اختصاصي R111/F50 با باند 602 جفت بازي مربوط به ژن 2b جدايه Ker.Mah.P درون ژل آگاروز1%

105

شکل 4-54- الكتروفورز محصول PCR تكثير شده با استفاده از آغازگرهاي  اختصاصي  R31/F70با باند 689 جفت بازي مربوط به ژن 1a جدايه Ker.Mah.P درون ژل آگاروز1%

105

شکل 4-55- الكتروفورز محصول PCR تكثير شده با استفاده از آغازگرهاي  اختصاصي  R17/F93با باند 1010 جفت بازي مربوط به ژن 1a جدايه Ker.Mah.P درون ژل آگاروز1%

106

شکل 4-56- الکتروفورز پلاسميد نوترکيب حاوي قطعه ژن پروتئين پوششي جدايه هاي ايراني ويروس TAV  هضم شده با آنزيم هاي EcoR1 و Pst1 درون ژل آگاروز1%

106

شکل 4-57- الکتروفورز پلاسميد نوترکيب حاوي قطعه ژن پروتئين حرکتي جدايه Ker.Mah.P هضم شده با آنزيم هاي EcoR1 و Pst1 درون ژل آگاروز1%

107

شکل 4-58- الکتروفورز پلاسميد نوترکيب حاوي قطعه 863 جفت بازي مربوط به ژن 2a جدايه Ker.Mah.P هضم شده با آنزيم هاي EcoR1 و Pst1 درون ژل آگاروز1%

107

شکل 4-59- الکتروفورز پلاسميد نوترکيب حاوي قطعه 1060 جفت بازي مربوط به ژن 2a جدايه Ker.Mah.P هضم شده با آنزيم هاي EcoR1 و Pst1 درون ژل آگاروز1%

108

شکل 4-60- الکتروفورز پلاسميد نوترکيب حاوي قطعه 899 جفت بازي مربوط به ژن 2a جدايه Ker.Mah.P هضم شده با آنزيم هاي EcoR1 و Pst1 درون ژل آگاروز1%

108

شکل 4-61- الکتروفورز پلاسميد نوترکيب حاوي قطعه 602 جفت بازي مربوط به ژن 2b جدايه Ker.Mah.P هضم شده با آنزيم هاي EcoR1 و Pst1 درون ژل آگاروز1%

109

شکل 4-62- الکتروفورز پلاسميد نوترکيب حاوي قطعه 1033 جفت بازي مربوط به ژن 1a جدايه Ker.Mah.P هضم شده با آنزيم هاي EcoR1 و Pst1 درون ژل آگاروز1%

109

شکل 4-63- الکتروفورز پلاسميد نوترکيب حاوي قطعه 1010 جفت بازي مربوط به ژن 1a جدايه Ker.Mah.P هضم شده با آنزيم هاي EcoR1 و Pst1 درون ژل آگاروز1%

110

شکل 4-64- شکل شماتيک قطعه RNA-3 جدايه ايراني Ker.Mah.P

111

شکل 4-65- شکل شماتيک قطعه RNA-2 جدايه ايراني Ker.Mah.P

112

شکل 4-66- شکل شماتيک قطعه RNA-1 جدايه ايراني Ker.Mah.P

113

شکل 5-1- مقايسه توالي انتها ي 3’UTR قطعه ي RNA-3 جدايه هاي ويروس بي بذري گوجه فرنگي و جدايه ايراني Ker.Mah.P

113

شکل 5-2- نوکلئوتيد سيتوزين حفاظت شده در ژن پروتئين حرکتي ويروس بي بذري گوجه فرنگي در جدايه هاي گزارش شده در دنيا و جدايه ايراني Ker.Mah.P

114

شکل 5-3- توالي حفاظت شده UG tract که در انتهاي ناحيه 5’UTR قطعه RNA-3 جدايه هاي ويروس بي بذري گوجه فرنگي و جدايه ايراني Ker.Mah.P

114

شکل5-4- توالي ناحيه کنترل داخلي (ICR) که در ناحيه بين ژني (Intergenic Region) قطعه RNA-3 جدايه ايراني Ker.Mah.P و ديگر جدايه هاي ويروس بي بذري گوجه فرنگي

114

شکل 5-5- توالي حفاظت شده در انتهاي 3’UTR جدايه هاي ويروس بي بذري گوجه فرنگي و جدايه ايراني Ker.Mah.P

115

شكل5-6- درخت فيلوژنتيكي رسم شده با استفاده ازترادف نوكلئوتيدي ژن پروتئين پوششي جدايه هاي ايراني ويروس بي بذري گوجه فرنگي و ساير جدايه هاي موجود در بانك ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN

116

  شکل 5-7- مقايسه درصد همولوژي ترادف نوكلئوتيدي ژن پروتئين پوششي
جدايه­هاي ايراني ويروس بي بذري گوجه فرنگي و جدايه هاي موجود در بانک ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN

117

شکل 5-8- مقايسه درصد همولوژي ترادف اسيد آمينه ژن پروتئين پوششي جدايه­هاي ايراني ويروس بي بذري گوجه فرنگي و جدايه هاي موجود در بانک ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN

118

شكل 5-9- درخت فيلوژنتيكي رسم شده با استفاده ازترادف نوكلئوتيدي ژن پروتئين حرکتي جدايه Ker.Mah.P و ساير جدايه هاي موجود در بانك ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN

119

شکل 5-10- مقايسه درصد همولوژي ترادف نوكلئوتيدي ژن پروتئين حرکتي جدايه Ker.Mah.P و ساير جدايه هاي موجود در بانك ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN

119

شکل5-11- مقايسه درصد همولوژي ترادف اسيد آمينه ژن پروتئين حرکتي جدايه Ker.Mah.P و ساير جدايه هاي موجود در بانك ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN

120

شكل 5-12- درخت فيلوژنتيكي رسم شده با استفاده ازترادف نوكلئوتيدي قطعه
RNA-3 جدايه Ker.Mah.P و ساير جدايه هاي موجود در بانك ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN.

121

شکل 5-13- مقايسه درصد همولوژي ترادف نوكلئوتيدي قطعه RNA-3 جدايه Ker.Mah.P و ساير جدايه هاي موجود در بانك ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN

121

شکل 5-14- مقايسه درصد همولوژي ترادف اسيد آمينه  قطعه RNA-3 جدايه Ker.Mah.P و ساير جدايه هاي موجود در بانك ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN

122

شکل 5-15-نواحی حفاظت شده RdRP در قطعه RNA-2  جدايه ايراني Ker.Mah.P و ساير جدايه هاي گزارش شده ويروس بي بذري گوجه فرنگي

123

شکل 5-16- نواحي حفاظت شده پروتئين 2b جدايه ايراني Ker.Mah.P و ساير
جدايه هاي گزارش شده ويروس بي بذري گوجه فرنگي

123

شکل 5-17- توالي حفاظت شده در ناحيه 3’UTR قطعه RNA-2 جدايه ايراني Ker.Mah.P و ساير جدايه هاي گزارش شده ويروس بي بذري گوجه فرنگي

124

شكل 5-18- درخت فيلوژنتيكي رسم شده با استفاده ازترادف نوكلئوتيدي ژن 2a جدايه Ker.Mah.P و ساير جدايه هاي موجود در بانك ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN

124

شکل 5-19- مقايسه درصد همولوژي ترادف نوكلئوتيدي ژن 2a جدايه Ker.Mah.P و جدايه هاي موجود در بانک ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN

124

شکل 5-20- مقايسه درصد همولوژي ترادف اسيد آمينه  ژن 2a جدايه Ker.Mah.P و جدايه هاي موجود در بانک ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN

125

شكل5-21- درخت فيلوژنتيكي رسم شده با استفاده ازترادف نوكلئوتيدي ژن 2b جدايه Ker.Mah.P و ساير جدايه هاي موجود در بانك ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN

125

شکل 5-22- مقايسه درصد همولوژي ترادف نوكلئوتيدي ژن 2b جدايه Ker.Mah.P و جدايه هاي موجود در بانک ژن با استفاده از نرم افزار .DNAMA

125

شکل 5-23- مقايسه درصد همولوژي ترادف اسيد آمينه  ژن 2b جدايه Ker.Mah.P و جدايه هاي موجود در بانک ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN

126

شكل 5-24- درخت فيلوژنتيكي رسم شده با استفاده ازترادف نوكلئوتيدي قطعه
RNA-2 جدايه Ker.Mah.P و ساير جدايه هاي موجود در بانك ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN

126

شکل5-25- مقايسه درصد همولوژي ترادف نوكلئوتيدي قطعه RNA-2 جدايه Ker.Mah.P و جدايه هاي موجود در بانک ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN

126

شکل5-26- مقايسه درصد همولوژي ترادف اسيد آمينه  قطعه RNA-2 جدايه Ker.Mah.P و جدايه هاي موجود در بانک ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN

127

شکل 5-27- موتيف هاي حفاظت شده IV و V در ناحيه هليکاز قطعه RNA-1 جدايه ايراني Ker.Mah.P و ساير جدايه هاي گزارش شده ويروس بي بذري گوجه فرنگي

127

شکل 5-28- توالي حفاظت شده در ناحيه 3’UTR قطعه RNA-1 جدايه ايراني Ker.Mah.P و ساير جدايه هاي ويروس بي بذري گوجه فرنگي

127

شكل5-29- درخت فيلوژنتيكي رسم شده با استفاده ازترادف نوكلئوتيدي ژن1a  جدايه Ker.Mah.P و ساير جدايه هاي موجود در بانك ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN

128

شکل 5-30- مقايسه درصد همولوژي ترادف نوكلئوتيدي ژن1a  جدايه Ker.Mah.P و جدايه هاي موجود در بانک جهاني ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN

128

شکل 5-31- مقايسه درصد همولوژي ترادف اسيد آمينه ژن1a  جدايه Ker.Mah.P و جدايه هاي موجود در بانک جهاني ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN

129

شكل 5-32- درخت فيلوژنتيكي رسم شده با استفاده ازترادف نوكلئوتيدي قطعه
RNA-1  جدايه Ker.Mah.P و ساير جدايه هاي موجود در بانك ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN

129

شکل 5-33- مقايسه درصد همولوژي ترادف نوكلئوتيدي قطعه RNA-1 جدايه Ker.Mah.P و جدايه هاي موجود در بانک ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN

129

شکل 5-34- مقايسه درصد همولوژي ترادف اسيد آمينه  قطعه RNA-1 جدايه Ker.Mah.P و جدايه هاي موجود در بانک جهاني ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN

لینکدین واتساپ

محصولات مرتبط

%46تخفیف

اثر تاریخ کاشت و مالچ کاه و کلش بر رشد و عملکرد لوبیا محلی گیلان

21,000 تومان
3.00
0 فروش
افزودن به سبد خرید
%46تخفیف

اثر پرايمينگ بذر بر شاخص هاي جوانه زني بذر شش گياه زينتي

21,000 تومان
2.00
0 فروش
افزودن به سبد خرید
%38تخفیف

دانلود پروژه: مرکز هنرهای نمایشی با رویکرد بازیابی مفهوم هویت شهری شیراز

23,000 تومان
2.00
0 فروش
افزودن به سبد خرید
امتیاز 0 از 5 از 0 دیدگاه

23,000 تومان

  • تاریخ ایجاد دی 15, 1399
  • تاریخ بروزرسانی اسفند 13, 1401
  • فروش 0
  • دیدگاه 0
شرایط استفاده از محصول

تمام محصولات به ازای پرداخت پروژه تنها قابل استفاده می باشند. این بدین معنی است که برای استفاده از یک یا چند محصول ، لازم به خرید آن محصول است.

مزایای خرید این محصول:
  • دسترسی به فایل به صورت همیشگی
  • پشتیبانی رایگان
  • پشتیبانی 24 ساعته محصول
  • بازگشت وجه در صورت عدم رضایت مشتری
مشاهده قوانین سایت
قبلا حساب کاربری ایجاد کرده اید؟
گذرواژه خود را فراموش کرده اید؟
ثبت نام کنید
enemad-logo