بررسي تشخيص عوامل اصلي باکتريايي اندومتريت پس از زايش به روش multiplex PCR در گاوهاي شيري

عنوان                                         صفحه

فصل اول: مقدمه…………………………… 2

فصل دوم: مروری بر تحقیقات گذشته

2-1- فیزیولوژی پس از زایش……………….. 8

2-1-1- مکانیسم بازسازی رحمی……………. 8

2-1-2- آلودگی و پاک شدن باکتری­ها از رحم پس از زایش    9

2-1-3- عفونت باکتری­های بیماری­زا در رحم….. 9

2-1-4- فعالیت تخمدانی پس از زایش در گاوهای شیری  10

2-2- تعریف بیماری­های رحمی……………….. 11

2-2-1- متریت…………………………. 11

2-2-2- پیومتر………………………… 11

2-2-3- اندومتریت……………………… 12

2-2-3-1- اندومتریت بالینی……………. 12

2-2-3-2- اندومتریت تحت بالینی………… 12

2-3- شیوع عفونت رحمی……………………. 13

2-4- روش­های تشخیص اندومتریت بالینی و تحت بالینی    14

2-4-1- ملامسه رحم……………………… 14

عنوان                                         صفحه

2-4-2- ارزیابی ترشحات مهبل و گردن رحم…… 14

2-4-3- اولتراسونوگرافی………………… 15

2-4-4- سلول شناسی اندومتریوم…………… 16

2-4-5- بیوپسی رحمی و باکتری شناسی………. 17

2-5- درمان اندومتریت در گاوهای شیری………. 18

2-5-1-استفاده از پروستاگلاندین­ها………… 18

2-5-2- درمان آنتی بیوتیکی داخل رحمی…….. 19

2-6- واکنش زنجیره­ای پلیمراز (PCR)………… 21

فصل سوم:  روش کار

3-1- انتخاب حیوانات…………………….. 24

3-2- معايناتباليني……………………… 25

3-3- تهیه نمونه­های سلول شناسی……………. 26

3-4- جمع­آوری نمونه­های ترشحات رحمی………… 26

3-5- استخراج DNA از مایعات رحمی…………. 27

3-6- تشخیص حضور E. coli، T. pyogenes،  F. necrophorum

و P. melaninogenicus با PCR…………………… 27

3-7- واکنش زنجیره­ای پلیمراز چندتایی (multiplex PCR) برای

 باکتری­های E. coli، T. pyogenesو  F. necrophorum……… 29

3-8- بررسی شاخص­های تولیدمثلی…………….. 30

3-9- آزمون­ها و تحلیل­های آماری……………. 30

عنوان                                         صفحه

فصل چهارم:  نتایج

4-1- معاینه اول………………………… 33

4-1-1- ابتلای به اندومتریت بالینی ………. 33

4-1-2- باکتری شناسی…………………… 34

4-1-3- شاخص­ها و عوامل تولیدمثلی………… 35

4-2- معاینه دوم………………………… 36

4-2-1- ابتلای به اندومتریت بالینی……….. 36

4-2-2- باکتری شناسی…………………… 37

4-2-3- شاخص­ها و عوامل تولید مثلی……….. 38

4-3- مقایسه نخستین و دومین معاینه………… 39

فصل پنجم: بحث

5-1- واکنش زنجیره­ای پلیمراز (PCR)………… 49

5-2- باکتری شناسی………………………. 51

5-3- اندومتریت بالینی و دیگر شاخص­های تولید مثلی    54

فهرست منابع…………………………….. 59

فهرست جداول

عنوان                                         صفحه

جدول 1. پرایمرهای استفاده شده در شناسایی ژن­های هدف  28

جدول 2. تعداد موارد سالم و مبتلا به اندومتریت بالینی در معاینه اول و دوم……………………………………. 42

جدول 3. مقایسه وضعیت بدنی، روزهای باز و درصد نوتروفیل گردن رحم

در ابتلا به اندومتریت بالینی در طی معاینه اول و دوم(Mean±SE)   42

جدول 4. موارد مثبت PCR در گاوهای سالم و مبتلا به اندومتریت بالینی

در معاینه اول و دوم……………………… 42

جدول 5. ضریب همبستگی آلودگی باکتریایی با یکدیگر در معاینه اول 43

جدول 6. ضریب همبستگی آلودگی باکتریایی با یکدیگر در معاینه دوم 43

جدول 7. ضریب همبستگی آلودگی به باکتری­ها و ساختار تخمدان

در معاینه اول با شاخص­های تولیدمثلی ……….. 43

جدول 8. ضریب همبستگی آلودگی به باکتری­ها و ساختار تخمدان

در معاینه دوم با شاخص­های تولیدمثلی ……….. 43

جدول 9. مقایسه روزهای باز در آلودگی باکتریایی نمونه­های رحمی

در معاینه اول و دوم (Mean±SE)……………… 44

جدول 10. مقایسه درصد نوتروفیل ترشحات گردن رحم در آلودگی باکتریایی

نمونه­های رحمی در معاینه اول و دوم (Mean±SE)…. 44

جدول 11. مقایسه وضعیت بدنی، روزهای باز و درصد نوتروفیل گردن رحم

در قطرهای متفاوت گردن رحم (سانتی­متر) در طی معاینه اول و دوم(Mean±SE)………………………………………. 44

عنوان                                         صفحه

جدول 12. مقایسه وضعیت بدنی، روزهای باز و درصد نوتروفیل گردن رحم

در دو شاخ رحم متقارن و نامتقارن در طی معاینه اول و دوم (Mean±SE)   45

جدول 13. مقایسه وضعیت بدنی، روزهای باز و درصد نوتروفیل گردن رحم

 در رحم­های واجد و فاقد لومن در طی معاینه اول و دوم(Mean±SE)   45

جدول 14. مقایسه وضعیت بدنی، روزهای باز، درصد نوتروفیل و تعداد تلقیح

در ساختارهای غالب متفاوت تخمدانی در طی معاینه اول و دوم (Mean±SE)  46

جدول 15. ضریب همبستگی شاخص­های تولیدمثلی با یکدیگر    46

جدول 16. عوامل خطر همراه با احتمال وقوع اندومتریت بالینی تشخیص داده شده

در معاینه اول و دوم……………………… 47

فهرست تصاویر

عنوان                                         صفحه

تصویر 1. محصولات PCR استاندارد DNA ژنومی ترشحات رحمی 40

تصویر 2. محصولات واکنش زنجیره­ای استاندارد و چندتایی DNA ژنومی

 ترشحات رحمی برای باکتری­های E. coli، T. pyogenes، F. necrophorum

و P. melaninogenicus…………………………… 41