%31تخفیف

بررسي اثر علف کش بوتاکلر در تخريب DNA گلبول قرمز ماهي کپور معمولي (Cyprinus carpio) با استفاده از روش کامت قليايي

تعداد 67صفحه در فایل word

کارشناسي ارشد زيست شناسي دريا آلودگي دريا (M. Sc.)


بررسي اثر علف کش بوتاکلر در تخريب
DNA گلبول قرمز ماهي کپور معمولي
(
Cyprinus carpio) با استفاده از روش کامت قليايي

چکيده

بوتاکلر يکي از علف کش هاي پر مصرف در شمال کشور مي باشد و مطالعات مختلف نشان داده است بوتاکلر ترکيب سمي است. اما در رابطه با توانايي بوتاکلر در تخريب DNA ي موجودات آبزي، اطلاعات بسيار کمي وجود دارد. در اين پژوهش اثر غلظت هاي مختلف علف کش بوتاکلر در تخريب DNA در ماهي کپور معمولي Cyprinus carpio در شرايط آزمايشگاهي مورد بررسي قرار گرفت. به اين منظور، سه غلظت زير حد کشندگي 07/0، 15/0 و 3/0 ميلي گرم در ليتر از علف کش بوتاکلر، به همراه يک گروه شاهد (آب شهري) تهيه شد. شرايط آزمايش ساکن (Static) و طول دوره آزمايش 9 روز تعيين گرديد. براي بررسي اثر زمان در تخريب DNA، نمونه برداري در زمان هاي 24، 48، 96 و 192 ساعت انجام شد. در زمان هاي نمونه برداري، از هر تيمار 3 نمونه به صورت تصادفي برداشته شد. سپس توسط سرنگ هپارينه 5/2 ميلي ليتري، مستقيماً از قلب ماهي به ميزان 5/0 ميلي ليتر خون گرفته شد. بعد از خون گيري،
نمونه هاي خون سريعاً براي انجام آزمون کامت مورد استفاده قرار گرفتند. بر اساس آناليز آماري واريانس يک طرفه (تست Tukey)، اختلاف معني داري در تخريب DNA بين گروه شاهد و تيمارهاي در معرض بوتاکلر مشاهد شد و با افزايش غلظت آلاينده ميزان تخريب DNA افزايش يافته است (05/0 p <).

در نتيجه بوتاکلر توانايي تخريب DNA ماهي کپور را دارد و يک ترکيب ژنوتوکسيک است. مطالعه حاضر تاييد مي کند آزمون کامت يک روش مناسب و کاربردي براي بررسي سميت ژنتيکي آلاينده هاي محيطي است.

 

کلمات کليدي: آزمون کامت قليايي، بوتاکلر، تخريب DNA، علف کش، ماهي کپور معمولي.

فهرست مطالب

چکيده 1

فصل اول. 4

کليات.. 4

1-1- راه هاي ورود آلاينده به محيط و بدن موجودات زنده 5

1-2- سموم کشاورزي.. 6

1-3- مصرف سموم کشاورزي در ايران. 7

1-4- علف کش ها (Herbicides) 9

1-5- علف کش بوتاکلر (Butachlor) 9

1-6- سميت آفت کش ها 11

1-7- مطالعات سم شناسي ژنتيکي (Genetic toxicology) 12

1-7-1- عوامل ايجاد کننده آسيب DNA.. 12

1-7-2- انواع تخريب DNA.. 13

1-7-3- روش هاي اندازه گيري تخريب DNA.. 13

1-8- آزمون کامت (Comet assay) 13

1-9- علت انتخاب ماهي.. 15

1-10- ماهي کپور معمولي (Cyprinus carpio) 16

1-10-1- انواع سلول هاي خوني در ماهي.. 17

1-11- گلبول قرمز ماهي.. 18

1-12-1- مروري بر مطالعات انجام شده در ايران. 20

1-12-2- مروري بر مطالعات انجام شده در خارج از کشور. 21

فصل دوم. 24

مواد و روش ها 24

2-1- انتقال و سازگاري نمونه ها 25

2-2- آماده سازي محلول هاي مورد نياز براي آزمون کامت.. 25

2-2-1- محلول بافر ليز کننده (1ليتر) 25

2-2-2- تهيه محلول بافر الکتروفورزي(1 ليتر) 26

2-2-3 تهيه محلول (بافر) خنثي کننده (1 ليتر) 26

2-2-4- تهيه محلول نمک فسفات بافر (PBS)، (1 ليتر) 26

2-2-5- تهيه محلول رنگ… 27

2-3- تهيه محلول علف کش بوتاکلر(Butachlor) با آب (1 ليتر) 27

2-3-1- تهيه غلظت هاي مورد نظر براي تيمارهاي آزمايش… 28

2-4- آماده سازي آکواريوم ها 29

2-5- ثبت و کنترل شرايط محيطي.. 30

2-6- روش نمونه برداري.. 33

2-7-روش کار. 34

2-7-1- تهيه لام پوشش دار با ژل آگارز معمولي 1 درصد تا 25/1%. 34

2-7-2- تهيه ژل آگاروز با نقط ذوب پايين 75/0 درصد. 34

2-7-3- مخلوط ژل LMA و سلول خوني.. 34

2-7-4- ليز سلولي.. 35

2-7-5- خنثي سازي قبل از الکتروفورز. 35

2-7-6- الکتروفورز. 35

2-7-7-خنثي سازي بعد از الکتروفورز. 36

2-7-8-تثبيت نمونه. 36

2-7-9-رنگ آميزي و آشکار سازي و بررسي نمونه. 36

2-8- ارزيابي و کمي سازي کامت.. 36

فصل سوم. 38

نتايج. 38

3-1- داده هاي نمونه برداري اول (24 ساعت) 39

3-2- داده هاي نمونه برداري دوم (48 ساعت) 39

3-3- داده هاي نمونه برداري سوم (96 ساعت) 40

3-4- داده هاي نمونه برداري چهارم (192 ساعت) 41

3-5- نمودار ستوني ميانگين آسيب DNA ( زمان ثابت) 41

3-5-1- نمودار ستوني ميانگين آسيب DNA در زمان 24 ساعت.. 41

3-5-2- نمودار ستوني ميانگين آسيب DNA در زمان 48 ساعت.. 42

3-5-3- نمودار ستوني ميانگين آسيب DNA در زمان 96 ساعت.. 43

3-5-4- نمودار ستوني ميانگين آسيب DNA در زمان 192 ساعت.. 43

3-6- ضريب همبستگي و آناليز رگراسيون (زمان ثابت) 44

3-6-1- ضريب همبستگي و آناليز رگراسيون در زمان 24 ساعت.. 44

3-6-2- ضريب همبستگي و آناليز رگراسيون در زمان 48 ساعت.. 44

3-6-3- ضريب همبستگي و آناليز رگراسيون در زمان 96 ساعت.. 45

3-6-4- ضريب همبستگي و آناليز رگراسيون در زمان 192 ساعت.. 46

3-7- نمودار ستوني ميانگين آسيب DNA (غلظت ثابت) 46

3-7-1- نمودار ستوني ميانگين آسيب DNA، کنترل. 46

3-7-2- نمودار ستوني ميانگين آسيب DNA، غلظت 07/0. 47

3-7-3- نمودار ستوني ميانگين آسيب DNA، غلظت 15/0. 47

3-7-4- نمودار ستوني ميانگين آسيب DNA، غلظت 3. 48

3-8- ضريب همبستگي و آناليز رگراسيون (غلظت ثابت) 48

3-8-1- ضريب همبستگي و آناليز رگراسيون آسيب DNA، کنترل. 48

3-8-2- ضريب همبستگي و آناليز رگراسيون آسيب DNA، غلظت 07/0. 49

3-8-3- ضريب همبستگي و آناليز رگراسيون آسيب DNA، غلظت 15/0. 49

3-8-4- ضريب همبستگي و آناليز رگراسيون آسيب DNA، غلظت3/0. 50

3-9- آناليز آماري ANOVA (One-way ) 51

فصل چهارم. 53

بحث.. 53

نتيجه گيري.. 59

پيشنهادات.. 60

فصل پنجم. 61

منابع. 61

Abstract 68

فهرست جداول

جدول1- 1- طبقه بندي سموم کشاورزي بر اساس موجود هدف.. 6

جدول1- 2- طبقه بندي سموم کشاورزي بر اساس ساختمان شيميايي.. 7

جدول1- 3- طبقه بندي سموم کشاورزي بر اساس عمل کرد مهاري.. 7

جدول1- 4- نوع و ميزان سموم کشاورزي مصرف شده در استان گيلان (ارقام به تن) 8

جدول1- 5- گروه هاي مختلف علف کش… 9

جدول2- 1- ميانگين طول (سانتي متر) و وزن (گرم) ماهي ها بعد از نمونه برداري.. 30

جدول2- 2- پارامترهاي فيزيکي و شيميايي آب آکواريوم ها در روز اول تا سوم دوره آزمايش… 31

جدول2- 3- پارامترهاي فيزيکي و شيميايي آب آکواريوم ها در روز چهارم تا ششم دوره آزمايش… 32

جدول2- 4- پارامترهاي فيزيکي و شيميايي آب آکواريوم ها در روز هفتم تا هشتم دوره آزمايش… 33

جدول3- 1- ميانگين تخريب DNA  در زمان 24 ساعت.. 39

جدول3- 2- ميانگين تخريب DNA  در زمان 48 ساعت.. 40

جدول3- 3- ميانگين تخريب DNA  در زمان 96 ساعت.. 40

جدول3- 4- ميانگين تخريب DNA  در زمان 192 ساعت.. 41

فهرست اشکال

شکل1- 1- ساختمان شيميايي علف کش بوتاکلر  10

شکل1- 2- Cyprinus carpio. 16

شکل1- 3- پراکنش Cyprinus carpio در درياي خزر  17

شکل1- 4- گسترش خوني از ماهي کپور معمولي   19

شکل2- 1-علف کش بوتاکلر (امولسيون 60 درصد) 28

شکل2- 2- تيمارهاي تحت آزمايش    29

شکل2- 3- تانک الکتروفورز در دماي 4 درجه سانتي گراد 35

شکل2- 4- درجه بندي کامت بر اساس اندازه و شدت روشنايي دم 37

شکل2- 5- مراحل کلي انجام آزمون کامت قليايي  37

شکل3- 1- نمودار ميانگين آسيب DNA در زمان 24 ساعت.. 42

شکل3- 2- نمودار ميانگين آسيب DNA در زمان 48 ساعت.. 42

شکل3- 3- نمودار ميانگين آسيب DNA در زمان 96 ساعت.. 43

شکل3- 4- نمودار ميانگين آسيب DNA در زمان 192 ساعت.. 43

شکل3- 5- نمودار ضريب همبستگي و معادله خط در زمان 24 ساعت.. 44

شکل3- 6- نمودار ضريب همبستگي و معادله خط در زمان 48 ساعت.. 45

شکل3- 7- نمودار ضريب همبستگي و معادله خط در زمان 96 ساعت.. 45

شکل3- 8- نمودار ضريب همبستگي و معادله خط در زمان 192 ساعت.. 46

شکل3- 9- نمودار ميانگين آسيب DNA در کنترل. 46

شکل3- 10- نمودار ميانگين آسيب DNA در غلظت 07/0. 47

شکل3- 11- نمودار ميانگين آسيب DNA در غلظت 15/0. 47

شکل3- 12- نمودار ميانگين آسيب DNA در غلظت 3. 48

شکل3- 13- نمودار ضريب همبستگي و معادله خط در کنترل. 49

شکل3- 14- نمودار ضريب همبستگي و معادله خط در غلظت 07/0. 49

شکل3- 15- نمودار ضريب همبستگي و معادله خط در غلظت 15/0. 50

شکل3- 16- نمودار ضريب همبستگي و معادله خط در غلظت3/0. 50

شکل3- 17- آسيب DNA در نمونه هاي  در معرض بوتاکلر. 52

نقد و بررسی‌ها

هنوز بررسی‌ای ثبت نشده است.

اولین کسی باشید که دیدگاهی می نویسد “بررسي اثر علف کش بوتاکلر در تخريب DNA گلبول قرمز ماهي کپور معمولي (Cyprinus carpio) با استفاده از روش کامت قليايي”

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *

قبلا حساب کاربری ایجاد کرده اید؟
گذرواژه خود را فراموش کرده اید؟
Loading...
enemad-logo