انتقال ژن GUS به Cardaria Draba

فهرست مطالب

     عنوان                                                                                                                                                                     صفحه

 

فصل اول:مقدمه ………………………………………………………………………………………………………………………………. 2

1-2 مزایای مهندسی ژنتیک ……………………………………………………………………………………………………………… 3

1-2-1 مقاومت به آفات و بیماری‌ها ……………………………………………………………………………………………………. 3

2-2-1 افزایش عملکرد …………………………………………………………………………………………………………………….. 3

3-2-1 تحمل تنش‌های زنده و غیرزنده ……………………………………………………………………………………………… 3

4-2-1 استفاده از زمین‌های رها شده ………………………………………………………………………………………………… 4

5-2-1 افزایش طول دوره انبارداری میوه …………………………………………………………………………………………… 4

6-2-1 برتری تغذیه ای ……………………………………………………………………………………………………………………. 4

7-2-1 تولید واکسن ………………………………………………………………………………………………………………………… 4

1-3  اثرات نامطلوب گیاهان تراریخت ……………………………………………………………………………………………….. 5

1-3-1از بین رفتن منابع زیستی ارزشمند ………………………………………………………………………………………….. 5

1-3-2 اثرات منفی بر فرآیندهای اکوسیستم …………………………………………………………………………………….. 5

1-3-3 اثر مخرب بر جوامع زنده ………………………………………………………………………………………………………. 6

1-3-4 آسیب به گونه های غیر هدف ………………………………………………………………………………………………… 6

1-3-5 گیاهان زراعی تراریخته مقاوم به علف‌کش ……………………………………………………………………………. 6

1-3-6 گسترش گیاهان زراعی ……………………………………………………………………………………………………….. 7

1-3-7مقاومت به آنتی بیوتیک ها …………………………………………………………………………………………………… 7

1-3-8 از بین رفتن خزانه ژنتیکی گیاهی …………………………………………………………………………………………. 7

1-3-9 اتکاء کشاورزان به علف کش های شیمیایی با تولید گیاهان مقاوم به این مواد ……………………………. 7

1-4  راه‌های انتقال ژن …………………………………………………………………………………………………………………………. 7

1-4-1 انتقال ژن به روش غیر مستقیم ( به وسیله ناقل) …………………………………………………………………………. 8

1-4-2 انتقال ژن به روش مستقیم ( بدون ناقل) ………………………………………………………………………………………. 8

1-4-1-1 انتقال ژن به وسیله آگروباکتریوم ……………………………………………………………………………………………… 8

1-5 ژن ^*GUS …………………………………………………………………………………………………………………………………….. 10

1-6 هدف استفاده از تکنیک هیستوشیمیایی ……………………………………………………………………………………….. 10

1-7 بسترها ………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 11

1-8 سایر سیستم‌های گزارشگر ……………………………………………………………………………………………………………… 11

1-9 گیاه شناسی ازمک …………………………………………………………………………………………………………………………… 12

1-10 بوم‌شناسی و زیست‌شناسی …………………………………………………………………………………………………………….. 13

1-11  کارداریا درابا ………………………………………………………………………………………………………………………………….. 13

1-12  ریشه ازمک ………………………………………………………………………………………………………………………………….. 14

1-13 رزت و ساقه ………………………………………………………………………………………………………………………………….. 14

1-14 تولیدمثل جنسی ……………………………………………………………………………………………………………………………. 14

1-15 طریقه انتشار …………………………………………………………………………………………………………………………………. 15

1-16 زیستگاه ……………………………………………………………………………………………………………………………………….. 15

1-17 اثرات اقتصادی ……………………………………………………………………………………………………………………………….  16

1-18  خواص دارويي گياه ازمک ……………………………………………………………………………………………………………….. 16

فصل دوم: بررسی منابع …………………………………………………………………………………………………………………………… 17

2-1 ازمک و کشت بافت ………………………………………………………………………………………………………………………….. 18

2-2 انتقال ژن ……………………………………………………………………………………………………………………………………… 18

1-2-1 آگروباکتریوم ……………………………………………………………………………………………………………………………….. 18

2-3 بیوتکنولوژی …………………………………………………………………………………………………………………………………. 19

2-4  آمار کشت گیاهان تراریخت …………………………………………………………………………………………………………… 20

2-5 تست هیستوشیمیایی …………………………………………………………………………………………………………………….. 30

فصل سوم:مواد و روش‌ها ……………………………………………………………………………………………………………………….. 31

3-1 تهیه مواد شیمیایی و زیستی …………………………………………………………………………………………………………… 32

3-1-1 تهیه محلول‌های مادری ……………………………………………………………………………………………………………….. 32

• هورمون‌های گیاهی …………………………………………………………………………………………………………….. 32

3-1-1-1-1 هورمون توفوردی كلروفنوكسي استيك اسيد ………………………………………………………………………… 32

3-1-1-1-2 هورمون بنزيل آمينو پورين ………………………………………………………………………………………………….. 33

3-1-1-1-3 هيدروكسيد سديم ……………………………………………………………………………………………………………….33

3-1-1-1-4 اسيد كلريدريك …………………………………………………………………………………………………………………. 33

• آنتی‌بیوتیک‌های مورد استفاده ……………………………………………………………………………………………. 33

3-1-1-3 ضدعفوني وسايل و سطح كار …………………………………………………………………………………………………..  34

3-1-1-4 مواد گياهي و آماده سازي بذرها ………………………………………………………………………………………………. 34

3-1-1-5 محیط کشت گیاهی MS^* …………………………………………………………………………………………………………. 35

3-1-1-6 كشت بذرها براي تهيه ريز نمونه ……………………………………………………………………………………………… 36

3-1-1-7 محیط کشت باکتریایی LB^* (Lauri and Bertani) ………………………………………………………………… 37

3-1-1-8  باکتري‌هاي مورد استفاده ………………………………………………………………………………………………………. 38

3-1-1-8-1 باکتري  E.coli …………………………………………………………………………………………………………………… 38

3-1-1-8-1-1 محیط کشت باکتري E.coli ……………………………………………………………………………………………. 38

3-1-1-9 تهیه سلول مستعد  (Competent cell) …………………………………………………………………………………. 38

3-1-1-10  ترانسفورماسیون باکتري E.coli ………………………………………………………………………………………….. 40

3-1-1-11 استخراج پلاسمید ………………………………………………………………………………………………………….. 41

3-1-1-12 ارزیابی کمی پلاسمید استخراج شده ………………………………………………………………………………… 43

3-1-1-13 ارزیابی کیفی پلاسمید استخراج شده ………………………………………………………………………………. 44

3-1-1-14 باکتری و سازه‌ی مورد استفاده …………………………………………………………………………………………. 44

3-1-1-15 پلاسمید ………………………………………………………………………………………………………………………….. 45

3-1-1-16 الکتروفورز با ژل آگارز……………………………………………………………………………………………………….. 47

3-1-1-16-1  مواد و وسايل لازم براي الكتروفورز با ژل آگار…………………………………………………………………. 47

3-1-1 -16-1-1 تهيه بافرTBE(X10)  ……………………………………………………………………………………………….. 47

3-1-1-16-1-2  تهیه ژل آگارز 1 درصد ……………………………………………………………………………………………… 48

3-1-1-17 تراريختي ريزنمونه های ساقه و برگ …………………………………………………………………………………. 48

3-1-1-18 تهیه ذخیره باکتری برای نگهداری طولانی مدت …………………………………………………………………. 50

فصل چهارم:نتایج ……………………………………………………………………………………………………………………………….. 51

4-1 ترانسفورم کردن و کشت باکتری ………………………………………………………………………………………………….. 52

4-2 انتخاب کالوس‌های تراریخته و باززایی آنها ……………………………………………………………………………………. 53

4-3 تراریختی ……………………………………………………………………………………………………………………………………. 56

4-4 واکنش زنجیره پلی‌مراز برای گیاهان باززایی شده ………………………………………………………………………….. 57

5-4 رنگ‌آمیزی کالوس برای ارزیابی وجود ژن گاس ……………………………………………………………………………… 58

فصل پنجم:بحث …………………………………………………………………………………………………………………………………. 59

فصل ششم:پیشنهادات ……………………………………………………………………………………………………………………….. 65

مراجع ……………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 67

واژه نامه ……………………………………………………………………………………………………………………………………………… 74

چکیده انگلیسی …………………………………………………………………………………………………………………………………. 75

فهرست شکل ها

شکل 1-1 ………………………………………………………………………………………………………………………………………. 11

شکل 2-1  ………………………………………………………………………………………………………………………………………. 13

شکل 3-1  ………………………………………………………………………………………………………………………………………. 15

شکل 1-2  ………………………………………………………………………………………………………………………………………. 30

شکل 1-3  ………………………………………………………………………………………………………………………………………. 35

شکل 2-3  ………………………………………………………………………………………………………………………………………. 37

شکل 3-3  ………………………………………………………………………………………………………………………………………. 44

شکل 4-3  ………………………………………………………………………………………………………………………………………. 45

شکل 5-3  ………………………………………………………………………………………………………………………………………. 48

شکل 6-3  ………………………………………………………………………………………………………………………………………. 49

شکل 1-4  ………………………………………………………………………………………………………………………………………. 52

شکل 2-4  ………………………………………………………………………………………………………………………………………. 53

شکل 3-4  ………………………………………………………………………………………………………………………………………. 54

شکل 4-4  ………………………………………………………………………………………………………………………………………. 54

شکل 5-4  ………………………………………………………………………………………………………………………………………. 55

شکل 6-4  ………………………………………………………………………………………………………………………………………. 55

شکل 7-4  ………………………………………………………………………………………………………………………………………. 56

شکل 8-4  ………………………………………………………………………………………………………………………………………. 57

شکل 9-4  ………………………………………………………………………………………………………………………………………. 57

شکل 10-4  ………………………………………………………………………………………………………………………………………. 58

فهرست جداول

جدول 1-3  ………………………………………………………………………………………………………………………………………. 36

جدول 2-3  ………………………………………………………………………………………………………………………………………. 37

جدول 3-3  ………………………………………………………………………………………………………………………………………. 46

جدول 4-3  ………………………………………………………………………………………………………………………………………. 46

جدول 5-3  ……………………………………………………………………………………………………………………………………….