%31تخفیف

امکان سنجی فاژتراپی در کنترل عفونت های زخم با استفاده از مدل موشی

تعداد 87صفحه در فایل word

کارشناسی ارشد در رشته زیست شناسی گرایش میکروبیولوژی

امکان سنجی فاژتراپی در کنترل عفونت های زخم با استفاده از مدل موشی

کلید واژه ها: باکتریوفاژ، موش، مقاومت به آنتی­بیوتیک، E. coli بیمارستانی

چکیده:

مقدمه: باکتریوفاژها ویروس­هایی هستند که به باکتری­ها حمله و آن­ها را با روشی کارآمد و ویژه لیز می­کنند. این دشمنان طبیعی باکتری­ها قبل از ظهور آنتی بیوتیک­ها به عنوان عوامل درمانی مطرح شدند. در حال حاضر، با گسترش سریع باکتری های مقاوم به چند دارو، فاژ درمانی می تواند یک درمان جایگزین موثر برای باکتری های مقاوم در برابر آنتی بیوتیک باشد. در این مطالعه اثر باکتریوفاژها در از بین بردن E. coli بیمارستانی مقاوم به آنتی بیوتیک در موش سوری بررسی شده است.

مواد و روش­ها: نمونه های مختلف از زخم بستر و زخم پا در بیماران مبتلا به دیابت گرفته شد. سویه­های E. coli جداسازی شده و با روش­های استاندارد شناسایی شدند. آنتی بیوگرام سویه­ها به روش انتشار دیسک کربی بائر با ده آنتی بیوتیک تهیه شد. باکتریوفاژها از نمونه­های آب های محیطی جداسازی شدند. آن­ها با استفاده از روش آگار دولایه (DLA ) برای به دست آوردن پلاک با باکتری میزبان کشت یافتند. واکنش کراسینگ فاژها روی سویه­های باکتری جداسازی شده برای تعیین گستره اثر فاژها انجام شد. فاژی که طیف گسترده تری داشت برای مطالعه حیوانی انتخاب شد. موش­ها به پنج گروه هفت­تایی گروه تقسیم شدند و در پشت آن­ها زخم ایجاد شد. گروه 1 به عنوان گروه کنترل، گروه 2 گروه دریافت کننده باکتری  E. coli، گروه 3 که فقط فاژ دریافت کرد تا عفونت­زایی فاژ مورد ارزیابی قرار گیرد، گروه 4 که E. coli دریافت کرد و تحت درمان با جنتامیسین قرار گرفت و گروه 5 که پس از دریافت باکتری تحت درمان با فاژ قرار یافت.

نتایج: ده سویهE. coli  جداسازی شدند که E. coli M1 تا E. coli M10 نام گرفتند. الگوی مقاومت آنتی بیوتیکی آن­ها مقاومت بالا در برابر آنتی بیوتیک های استفاده شده را نشان داد. باکتریوفاژهای اختصاصی برای هر سویه، به نام TPR1 تا TPR10 جداسازی شدند. با توجه به نتایج واکنش کراسینگ فاژ TPR7 برای مطالعه حیوانی انتخاب شد. در گروه 3 که فقط باکتری دریافت کردند، چهار موش در روز سوم مردند و بقیه تا روز هفتم در نمونه گیری­ها باکتری E. coli نشان دادند. در گروه 4 و 5 نمونه برداری از زخم از روز سوم هیچ E. coli نشان ندادند. جنتامایسین و فاژ TPR7 توانستند در 48 ساعت عفونت را حذف کنند. فاژ توانایی بالقوه برای از بین بردن باکتری همانند جنتامیسین داشت.

بحث: با توجه به نتایج پژوهش، باکتری­های بیمارستانی نسبت به آنتی بیوتیک­های مختلف مقاوم هستند و فاژهایی که راحت و کم هزینه جداسازی می­شوند می­توانند این باکتری­ها را بکشند. این نتایج هم راستا با نتایج تحقیق محققان دیگر است که آن­ها افزایش مقاومت به آنتی بیوتیک در باکتری­های مختلف را مشاهده کرده­اند و با جداسازی فاژهای مختلف اثر مثبت آن­ها در از بین بردن عفونت در شرایط برون تن و درون تن را منتشر کرده­اند.

عنوان

صفحه

مقدمه

1

1-1 ویروس­های پروکاریوتی

3

 1-1-1 آرکئو­ویروس

4

 1-1-2 باکتریوفاژ

8

  1-1-2-1 طبقه بندی باکتریوفاژ

8

  1-1-2-2 مکانیسم عمل باکتریوفاژ

13

  1-1-2-3 کاربرد­های بالینی باکتریوفاژ

14

   1-1-2-3-1 باکتریوفاژ­تراپی

15

     1-1-2-3-1-1 تاریخچه فاژ­تراپی

15

     1-1-2-3-1-2 فاژ­های طبیعی و فاژ­های مهندسی شده

18

   1-1-2-3-2 استفاده از محصولات فاژی یا لیزین فاژ

20

   1-1-2-3-3 فاژ­ها در حذف بیوفیلم­ها

22

   1-1-2-3-4 ساخت واکسن

23

  1-1-2-4 کاربردهای غیربالینی فاژ

23

  1-1-2-5 چالش­های فاژ­تراپی

24

   1-1-2-5-1 چالش محدودیت میزبانی یا اختصاصیت فاژ­ها

24

   1-1-2-5-2 چالش عوارض جانبی فاژتراپی

26

   1-1-2-5-3 چالش مقاومت باکتری­ها به فاژ

27

   1-1-2-5-4 چالش تولید باکتریوفاژ

28

   1-1-2-5-5 چالش عرضه باکتریوفاژ

29

   1-1-2-5-6 چالش میزان اثر­بخشی

29

   1-1-2-5-7 چالش دریافت مجوز

30

   1-1-2-5-8 پذیرش بازار

31

  1-1-2-6 مزایا و معایب باکتریوفاژ نسبت به آنتی بیوتیک

32

   1-1-2-6-1  مقایسه روش عمل

34

   1-1-2-6-2  مقایسه مکانیسم های مقاومت

35

   1-1-2-7 فارماکوکینتیک فاژ­ها

36

     1-1-2-7-1 نفوذ فاژ

37

     1-1-2-7-2  توزیع فاژ

37

     1-1-2-7-3 سوخت و ساز فاژ

38

     1-1-2-7-4 دفع فاژ

38

     1-1-2-7-5  مطالعات فارماکوکینتیکی فاژ

38

  1-1-2-8 سلامت باکتریوفاژ­ها

39

  1-1-2-9 دورنمای فاژتراپی

41

 1-1-3 اهداف پژوهش

43

2-1 تجهیزات و مواد مورد استفاده

45

 2-1-1 تجهیزات و لوازم

45

 2-1-2 مواد شیمیایی مورد استفاده

46

2-2 جداسازی باکتری ها

47

2-3 تهیه محیط های کشت

47

2-4 شناسایی باکتری ها

47

2-5 بررسی حساسیت آنتی بیوتیکی باکتری های جداسازی شده

50

تعیین غلظت باکتری­ها

51

2-6 جمع آوری نمونه آب و تقویت فاژی

51

2-7 جداسازی باکتریوفاژ

52

2-8 بررسی اثر فاژ بر باکتری

52

2-9 خالص سازی باکتریوفاژ

52

2-10 تیتر کردن باکتریوفاژ

53

2-11 نگهداری باکتریوفاژ

53

2-11-1 تهیه SM بافر

53

2-12 کراسینگ فاژ­ها (بررسی اثر فاژهای اختصاصی بر روی میزبان های دیگر)

54

2-13 حیوانات

55

2-14 گروه بندی موش­ها

55

2-15 مدل ایجاد زخم

56

2-16 روش تلقیح باکتری و فاژ به موش

56

2-17 نمونه برداری از موش­ها

57

3-1 باکتری­های جداسازی شده

59

3-2 نتایج حساسیت آنتی بیوتیکی باکتری­ها

63

3-3 باکتریوفاژ­های جداسازی شده

65

3-4 کراسینگ فاژ­های جداسازی شده

66

3-5 نتایج کارآزمایی بالینی در حیوان

68

4-1 وضعیت مقاومتی E. coli های مورد بررسی به آنتی­بیوتیک­ها

73

4-2 جداسازی فاژها و کاربرد درمانی آن­ها علیه E. coli

74

4-3 فاژتراپی عفونت­های باکتری­های مختلف در داخل بدن

76

نتیجه­گیری

79

پیشنهادها

80

منابع

81

فهرست شکل­ها

عنوان                                                                                                                        صفحه

شکل 1-1 طبقه بندی باکتریوفاژ­ها

12

شکل 1-2 انواع مختلف باکتریوفاژ­های دم­دار

12

شکل 1-3 چرخه لیتیک و چرخه لیزوژنیک فاژ

14

شکل 1-4 مکانیسم فاژ­ها برای حذف باکتری در فاژتراپی

34

شکل 1- 5 جستجوهای انجام گرفته در PubMed در دوره های زمانی مختلف با عنوان “فاژتراپی”

42

شکل 3-1: تصویر میکروسکوپ نوری باکتریE. coli  

62

شکل3-2: نتایج تست IMViC و تست حرکت

62

شکل3-3: نتیجه تست TSI

62

شکل 3-5: پلاک­های فاژ TPR9

65

شکل 3-6: پلاک­های فاژ TPR1

65

 شکل 3-7: میانگین تعداد کلنی­ها در گروه­های مختلف موش در کارآزمایی بالینی فاژ TPR7 روی E. coli M6

70

فهرست جدول­ها

عنوان                                                                                                                        صفحه

جدول 2-1 تجهیزات و لوازم استفاده شده

45

جدول 2-2 مواد شیمیایی استفاده شده

46

جدول 3-1 مشخصات بیوشیمیایی و میکروسکوپی E. coli

61

جدول 3-2 الگوی حساسیت به آنتی بیوتیک باکتری­های جداسازی شده

64

جدول 3-3 واکنش کراسینگ فاژهای جداسازی شده علیه E. coli های جداسازی شده

67

جدول 3-4 مقایسه مقاومت سویه ها به آنتی بیوتیک و حساسیت آن ها به باکتریوفاژ

67

جدول 3-5 بررسی روند بهبود زخم موش­ها

70

دیدگاهها

هیچ دیدگاهی برای این محصول نوشته نشده است.

اولین نفری باشید که دیدگاهی را ارسال می کنید برای “امکان سنجی فاژتراپی در کنترل عفونت های زخم با استفاده از مدل موشی”

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *

قبلا حساب کاربری ایجاد کرده اید؟
گذرواژه خود را فراموش کرده اید؟
Loading...
enemad-logo