%34تخفیف

دانلود پروژه:ارزیابی اثرات ضد سرطانی کیلیتورهای گیاهی آهن بر روی رده های سلولی سرطانی MCF-7, HT-29, A-549 و مقایسه این اثرات با کیلیتورهای سنتزی دفراسیروکس و دفریپرون و بررسی این کیلیتورها در دفع فلزات سنگین در مدلهای بیولوژیکی

تعداد 138صفحه در فایل word

 

چکیده

در سالهای اخیراثرات ضد سرطانی کیلیتورهای آهن مورد توجه قرار گرفته است. آهن یک عنصر ضروری در تغذیه ی انسان است که در بسیاری از فرایندهای بیوشیمیایی از قبیل تولید ATP ، سنتز   DNAو پیشرفت چرخه ی سلولی شرکت می کند که همه ی این فعالیتها در سلولهای سرطانی افزایش می یابند. بنابراین از دست دادن آهن با استفاده از کیلیتورها به عنوان یک ابزار برای پیشگیری و درمان سرطان مورد توجه قرار گرفته است. با وجود تاثیر بالینی خوب کیلیتورهای سنتزی، ایجاد اثرات جانبی مضر، استفاده از آنها را با محدودیت مواجه می کند. کیلیت کردن آهن و دفع کردن گونه های اکسیژن واکنش پذیر از مشخصات اصلی فعالیت آنتی اکسیدانی است. برای یافتن ترکیبات گیاهی با فعالیت های کیلیتوری آهن وآنتی اکسیدانی، تعدادی از گیاهان دارویی از قبیل مازو، گشنیز، چای سبز، پوست سبز گردو و ترب سیاه مورد بررسی قرار گرفتند و پس از عصاره گیری آنها با متانول 80٪ فعالیت آنتی اکسیدانی و کیلیتوری آن ها ارزیابی گردید. بعلاوه ارتباط بین توانایی کیلیت کنندگی، آنتی اکسیدانی و محتوای فنلی تام مورد بررسی قرار گرفت. پس از تعیین فعالیت کیلیتوری آهن عصاره های تام، قویترین عصاره (مازو) برای رسیدن به ترکیبات موثر فرکشنه شد. سپس اثر ضد سرطانی عصاره تام و جزء با بیشترین فعالیت کیلیتوری آهن در تعدادی از رده های سلولی سرطانی مورد بررسی قرار گرفت. اثر ضد سرطانی جزء اتیل استاتی بسیار بیشتر از عصاره ی تام بود. IC50s  محاسبه شده برای جزء اتیل استاتی در رده های سلولیA-549  و MCF-7  به ترتیب µg/ml 3/142 و 3/8  بود. همچنین فعالیت ضد تکثیری جزء اتیل استات و دفراسیروکس به عنوان یک کیلیتور مشهور آهن در  سلولهای سرطان پستان   MCF-7در مقایسه با سلولهای سرطان ریه A-549 بیشتر بود. عصاره تام و جزء اتیل استاتی هیچ تاثیری بر روی سلولهای سرطان روده HT-29 نداشتند. پیشنهاد می شود که این اثرات ضد سرطانی می تواند مربوط به حضور ترکیبات کیلیت کننده آهن از قبیل تانن ها در عصاره باشد. در پایان، این فرضیه که کیلیتورهای طبیعی آهن ممکن است در دفع آهن و فلزات سنگین (از قبیل جیوه) از مدلهای بیولوژیکی موثر باشند مورد توجه قرار گرفت. کیلیت درمانی با کیلیتورهای طبیعی (مازو و جزء اتیل استاتی) و کیلیتورهای سنتزی(دفراسیروکس و دفریپرون) نشان داد که این کیلیتورهای طبیعی می توانند آهن و جیوه را از بدن دفع کنند. بنابراین فرکشنه کردن بیشتر جزء اتیل استاتی برای یافتن اجزاء دارویی موثر ( به عنوان عوامل ضد سرطان و کیلیت کننده ی آهن) توصیه می شود.

کلمات کلیدی:

aکیلیت درمانی، آنتی اکسیدان، ضد سرطان، دفراسیروکس، دفریپرون، آهن، مازو

 

فهرست مطالب

عنوان                                                                                                                               صفحه

فصل اول: مقدمه

1-1- نقش آهن در بدن- 2

1-1-1-عمکرد بیوشیمیایی آهن- 2

1-1-1-1-ترانسفرین- 3

1-1-1-2-فریتین- 4

1-1-1-3-هموگلوبین- 4

1-1-1-4-میوگلوبین- 5

1-1-1-5-سیتوکروم 5

1-1-1-6-آنزیم های دارای آهن دخیل در عملکرد آنتی اکسیدانی- 5

1-1-2- جذب، توزیع و دفع آهن در بدن- 6

1-1-3-افزایش بیش از حد آهن- 6

1-2-کیلیت درمانی- 7

1-2-1-انواع کیلیت درمانی- 8

1-2-1-1-کیلیت درمانی توسط یک لیگاند- 8

1-2-1-2-کیلیت درمانی توسط چند لیگاند- 8

1-2-2-خصوصيات يک داروي کيليت کننده ي مناسب و قواعد ليپينسکي- 9

1-2-3-کیلیتورهای آهن به عنوان عوامل ضد سرطان- 10

1-2-3-1-دزفری اکسامین- 12

1-2-3-2-دفریپرون- 12

1-2-3-3- دفراسیروکس– 13

1-2-4- استفاده ازکیلیت درمانی در دفع فلز سمی جیوه 14

1-2-4-1-کاربردهای جیوه 14

1-2-4-2- سمیت جیوه 14

1-3- رادیکال آزاد 14

1-3-1-انواع رادیکالهای آزاد 15

1-3-2-نقش آهن در تولید رادیکال آزاد 15

1-4- آنتی اکسیدان ها 16

1-5-استرس اکسیداتیو- 18

1-6-ترکیبات پلی فنلی- 18

1-7-مهمترین ترکیبات مورد توجه در فیتوشیمی- 18

1-7-1-فلاونوئیدها 19

1-7-2- آلکالوئیدها 19

1-7-3- تانن ها 20

1-7-4- ساپونین ها 20

1-8-عوامل ضد تومور با منشا گیاهی- 20

1-9- گیاهان دارویی- 21

1-9-1- خصوصیات گیاهان- 21

1-9-1-1- مازو 21

1-9-1-2- دانه ی گشنیز- 22

1-9-1-3- چای سبز- 22

1-9-1-4- پوست سبز گردو 23

1-9-1-5- ترب سیاه 23

1-10-عصاره 24

1-10-1-روشهای مختلف عصاره گیری- 24

1-11- سرطان- 26

1-11-1- رده های سلولی مورد استفاده 27

1-11-1-1- رده سلولی A-549- 27

1-11-1-2- رده سلولی HT-29- 27

1-11-1-3- رده سلولی MCF-7- 27

1-11-2- عوامل ایجاد کننده ی سرطان- 27

1-11-3-کشت سلولی- 28

1-11-3-1-محيط كشت سلولي و خصوصيات آن- 28

1-11-4-بررسی اثرات مهارکنندگی داروهای جدید بر روی رشد سلولهای سرطانی- 29

1-11-5-نمک های تترازولیوم 30

1-12-الایزا ریدر 30

1-13-دستگاه تبخیر روتاری- 31

1-14-طیف سنجی مرئی- فرابنفش– 31

1-15-اسپکتروسکوپی جذب اتمی- 32

1-15-1-اصول جذب اتمی- 32

فصل دوم: بخش تجربی

2-1- مواد مورد استفاده در مطالعات گیاهی- 35

2-2- دستگاههای مورد استفاده در مطالعات گیاهی- 35

2-3- مشخصات گیاهان مورد استفاده 36

2-4- آزمایش های فیتوشیمیایی- 36

2-4-1- روش شناسایی وجود فلاونوییدها 36

2-4-2- روش شناسایی وجودآلکالوئیدها 37

2-4-2-1- تهیه معرف ید (واگنر) 37

2-4-2-2- تهیه معرف مایر- 37

2-4-2-3- تهیه معرف دراژندروف– 37

2-4-3- روش شناسایی وجود تانن ها 38

2-4-4- روش شناسایی وجود ساپونین ها 38

2-5-عصاره گیری- 38

2-6- روش های مورد استفاده در ارزیابی فعالیت آنتی اکسیدانی عصاره های گیاهی- 39

2-6-1- سنجش فعالیت آنتی اکسیدانی با روش مهار رادیکال DPPH- 39

2-6-1-1-آنالیز آماری نتایج- 40

2-6- 2- سنجش ظرفیت آنتی اکسیدانی کل با روشFRAP- 41

2-7- اندازه گیری فنل تام 42

2-8- تعیین فعالیت کیلیتوری آهن در عصاره های گیاهی- 42

2-9-آنالیز آماری نتایج- 42

2-10- جداسازی اجزاء عصاره مازو با روش استخراج مایع-مایع- 43

2-11- مواد مورد استفاده در کشت سلولی- 44

2-12- دستگاهها و تجهیزات مورد استفاده در کشت سلولی- 44

2-13- آزمایش سمیت سلولی- 45

2-13-1- نحوه ی دریافت و نگهداری سلول ها 45

2-13-2- از انجماد خارج نمودن و کشت سلول ها 45

2-13-3- واکشت سلول ها (پاساژ دادن سلول ها) 45

2-13-4- تهیه ی محیط کشت مغذی برای رشد سلول ها 46

2-13-5- تهیه ی تریپسین استریل- 46

2-13-6- تهیهPBS- 46

2-14- روش استفاده از هموسیتومتر برای شمارش سلول ها 47

2-14-1- تهیه ی رنگ تریپان بلو- 48

2-15-تهیه محلول MTT- 48

2-15-1-اساس آزمایش MTT- 48

2-15-2- مراحل بررسی سمیت سلولی نمونه ها بر روی رده های سلولی با استفاده از آزمایش    MTT  50

2-16- آنالیز آماری- 50

2-17- مواد مورد استفاده در مطالعات درون تنی- 51

2-18- دستگاهها وتجهیزات مورد استفاده در مطالعات درون تنی- 51

2-19- تعیین فعالیت کیلیتوری آهن عصاره های گیاهی در مدل های بیولوژیکی- 51

2-19-1-حیوانات آزمایشگاهی به عنوان مدل های بیولوژیکی- 51

2-19-2-گروه بندی موشهای مورد آزمایش تحت اضافه بار آهن- 52

2-19-3- نمونه برداری از گروههای مختلف تحت اضافه بار آهن- 52

2-19-3-1-آماده سازی نمونه های گرفته شده از موشهای آزمایشگاهی- 53

2-19-4-اندازه گیری آهن در بافتهای مختلف موشهای تحت اضافه بار آهن- 53

2-20- بررسی فعالیت کیلیتورهای آهن دردفع فلز جیوه  در مدل های بیولوژیکی- 53

2-20-1-حیوانات آزمایشگاهی به عنوان مدل های بیولوژیکی- 53

2-20-2-گروه بندی موشهای مورد آزمایش با فلز جیوه 54

2-20-2-1-ورود جیوه به بدن موشهای آزمایشگاهی- 54

2-20-3- نمونه برداری از گروههای مختلف موشهای آزمایشگاهی مسموم شده با جیوه 55

2-20-3-1-آماده سازی نمونه های گرفته شده از موشهای آزمایشگاهی- 55

2-20-4-اندازه گیری جیوه در بافتهای موشهای مسموم شده با جیوه 55

2-20-5-اندازه گیری آهن در بافتهای موشهای مسموم شده با جیوه 56

2-21- آنالیز آماری نتایج- 56

فصل سوم: نتایج و بحث

3-1- نتایج بدست آمده ازآزمایش های فیتوشیمیایی بر روی نمونه های گیاهی- 58

3-1-1-نتایج حاصل از شناسایی وجود فلاونوییدها 58

3-1-2- نتایج حاصل از شناسایی وجودآلکالوئیدها 58

3-1-3- نتایج حاصل از شناسایی وجود تانن ها 59

3-1-4- نتایج حاصل از شناسایی وجود ساپونین ها 59

3-2-نتایج بدست آمده از عصاره گیری- 60

3-3- نتایج حاصل از بررسی فعالیت آنتی اکسیدانی در عصاره های گیاهی- 61

3-3-1-سنجش فعالیت آنتی اکسیدانی در عصاره های گیاهی با روش مهار رادیکال DPPH- 61

3-3-2-سنجش ظرفیت آنتی اکسیدانی کل در عصاره های گیاهی با روش FRAP- 61

3-4-نتایج اندازه گیری فنل تام در عصاره های گیاهی- 63

3-5-نتایج حاصل از بررسی فعالیت کیلیتوری آهن در عصاره های گیاهی- 64

3-6-ارتباط بین مقدارفنل تام با مقدار آنتی اکسیدانی و فعالیت کیلیتوری  در عصاره های گشنیز، چای سبز، پوست سبزگردو و ترب    68

3-7-ارتباط بین فعالیت کیلیتوری آهن و فعالیت آنتی اکسیدانی در عصاره های تام گشنیز، چای    سبز، پوست سبز گردو و ترب    70

3-8- نتایج حاصل از جداسازی اجزاء عصاره مازو با روش استخراج مایع- مایع- 71

3-9- نتایج حاصل از بررسی فعالیت آنتی اکسیدانی در اجزاء عصاره مازو 71

3-9-1-سنجش فعالیت آنتی اکسیدانی در اجزاء عصاره مازو با روش مهار رادیکال DPPH- 71

3-9-2-سنجش ظرفیت آنتی اکسیدانی کل در اجزاء عصاره مازو با روش FRAP- 72

3-10-نتایج اندازه گیری فنل تام در اجزاء عصاره مازو 73

3-11-نتایج حاصل از بررسی فعالیت کیلیتوری آهن در اجزاء عصاره مازو 73

3-12-ارتباط بین مقدارفنل تام با فعالیت کیلیتوری و مقدار آنتی اکسیدان در مازو  و اجزاء مختلف                            آن  78

3-13-ارتباط بین فعالیت کیلیتوری آهن و فعالیت آنتی اکسیدانی در مازو و اجزاء مختلف آن- 80

3-14-ارزیابی اثرات ضد سرطانی عصاره ی تام مازو و جزء موثر (جزء اتیل استاتی) آن  بر روی                 رده های سلولی MCF-7, HT-29, A-549- 81

3-15-نتایج حاصل از بررسی فعالیت کیلیتورهای طبیعی آهن در مدلهای بیولوژیکی- 87

3-15-1-منحنی کالیبراسیون جهت اندازه گیری آهن در موشهای تحت اضافه بار آهن- 87

3-15-2- نتایج اندازه گیری آهن در بافتها 88

3-15-2-1- اندازه گیری آهن در قلب پس از اضافه بار آهن و بعد از کیلیت درمانی- 88

3-15-2-2- اندازه گیری آهن درکبد پس از اضافه بار آهن و بعد از کیلیت درمانی- 90

3-15-2-3- اندازه گیری آهن درکلیه پس از اضافه بار آهن و بعد از کیلیت درمانی- 92

3-15-2-4- اندازه گیری آهن در روده پس از اضافه بار آهن و بعد از کیلیت درمانی- 94

3-15-2-5- اندازه گیری آهن در طحال پس از اضافه بار آهن و بعد از کیلیت درمانی- 96

3-15-2-6- اندازه گیری آهن در ریه پس از اضافه بار آهن و بعد از کیلیت درمانی- 98

3-16-نتایج حاصل از بررسی کیلیت درمانی در دفع فلز سمی جیوه در مدلهای بیولوژیکی- 100

3-16-1-منحنی کالیبراسیون جهت اندازه گیری جیوه در موشهای مسموم با جیوه 100

3-16-2-نتایج اندازه گیری جیوه در  بافتهای موشهای آزمایشگاهی- 101

3-17-نتایج آهن در بافتهای مختلف موشهای آزمایشگاهی در بررسی کیلیت درمانی در دفع فلز  سمی جیوه  107

3-17-1-منحنی کالیبراسیون جهت اندازه گیری آهن در موشهای مسموم با جیوه 107

3-17-2-نتایج اندازه گیری آهن در  بافتهای موشهای آزمایشگاهی مسموم شده با جیوه 108

فصل چهارم:‌ نتیجه گیری و آینده نگری

نتیجه گیری- 115

آینده نگری- 118

منابع————————————————————– 120

قبلا حساب کاربری ایجاد کرده اید؟
گذرواژه خود را فراموش کرده اید؟
Loading...
enemad-logo