اثر تراتوژنیک نیترات بر روی تکوین کبد در جنین موش سوری

فهرست مطالب

عنوان                                                                                                                                           صفحه

چکیده …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….1

فصل اول : مقدمه

مقدمه ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..3

1-1) نیترات …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….4

1-2) ساختمان شیمیایی نیتراتها و نیتریك ……………………………………………………………………………………………………………………7

1-3)  منابع نیترات و نیتریت………………………………………………………………………………………………………………………………………7

1-4) نیترات در رژیم غذایی …………………………………………………………………………………………………………………………………… 8

1-5)  مواد غذایی ………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 8

1-6) آب آشامیدنی ………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 9

1-7) متابولیسم نیترات در بدن……………………………………………………………………………………………………………………………………..11

1-8) اثرات نیترات در بدن ……………………………………………………………………………………………………………………………………….12

1-8-1)متهموگلوبینما……………………………………………………………………………………………………………………………………………… 12

1-8-2)اثر سو بر جنین……………………………………………………………………………………………………………………………………………. 13

1-8-3) سرطان ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………. 14

1-9)  فواید و ضرر هايNO …………………………………………………………………………………………………………………………………….14

1-10)مسمومیت ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………….14

1-10-1) مسمومیت غذایی ………………………………………………………………………………………………………………………………………..15

1-10-2) انواع مسمومیت غذایي………………………………………………………………………………………………………………………………….15

1-10-3) سرنوشت سم در بدن  …………………………………………………………………………………………………………………………………16

11-1) تراتوژن…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..16

1-11-1)  بررسی تراتوژن مهم اثر گذار بر رشد…………………………………………………………………………………………………………….17

12-1) تکوین دوران جنینی موش سوری …………………………………………………………………………………………………………………….18

1-12-1) تکوین اندام کبد ، پانکراس و کیسه ی صفرا …………………………………………………………………………………………………..25

1-12-2) خون و لوله گوارش: تخصصی شدن کبد  ………………………………………………………………………………………………………26

13-1) معرفی بافت در کبد ………………………………………………………………………………………………………………………………………..26

1-14)  تشکیل کبد ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………26

1-15) ساختمان بافتی کبد…………………………………………………………………………………………………………………………………………..27

1-16) عملکرد های کبد…………………………………………………………………………………………………………………………………………….29

1-17) نقش NO در کبد……………………………………………………………………………………………………………………………………………30

1-18) تست های کبدی……………………………………………………………………………………………………………………………………………..32

1-19)آپوپتوزیس ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………..33

1-19-1)تفاوت بین آپوپتوزیس و نکروز……………………………………………………………………………………………………………………..34

1-19-2) آنتی بادی Bcl2…………………………………………………………………………………………………………………………………………35

1-20) اهداف تحقیق………………………………………………………………………………………………………………………………………………….38

1-21)اهداف و فرضیه تحقیق …………………………………………………………………………………………………………………………………….38

فصل دوم : پيشينه

2-1) مطالعات انجام شده …………………………………………………………………………………………………………………………………………..40

فصل سوم : مواد و روش کار

3-1)  ابزار ها و مواد مورد استفاده …………………………………………………………………………………………………………………………….44

3-2)فیکساتیو بوئن …………………………………………………………………………………………………………………………………………………47

3-3)  فرمالین …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………47

3-4) طرز تهیه چسب هاپت …………………………………………………………………………………………………………………………………….48

3-5)  ائوزین ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….48

3-6)  هماتوکسیلین …………………………………………………………………………………………………………………………………………………49

3-7)  روش سنجش نیترات ……………………………………………………………………………………………………………………………………..49

3-8) حیوانات تجربی و دلایل انتخاب آن ها ………………………………………………………………………………………………………………49

3-9) پرورش حیوانات …………………………………………………………………………………………………………………………………………….49

3-10)چگونگی آماده کردن حیوانات …………………………………………………………………………………………………………………………50

3-11)تشریح موش باردار 17 روزه   …………………………………………………………………………………………………………………………53

3-12) روش های تهیه ی مقاطع میکروسکوپی از نمونه ها …………………………………………………………………………………………..54

3-13)روش کار ایمونوهیستوشیمی…………………………………………………………………………………………………………………………. 55

3-13)روش آماری ………………………………………………………………………………………………………………………………………………. 58

فصل چهارم : نتایج

4-1) بررسی های ماکروسکوپی…………………………………………………………………………………………………………………………………60

4-2) بررسی شکل ظاهری ……………………………………………………………………………………………………………………………………….60

4-2-1) بررسی وزن جنین ها……………………………………………………………………………………………………………………………………62

4-2-2)وزن موش باردار …………………………………………………………………………………………………………………………………………..64

3-4 ) بررسی های میکروسکوپی…………………………………………………………………………………………………………………………….. 65

4-3-1 ) شمارش هپاتوسیت ها در سلولهای کبدی در جنین ……………………………………………………………………………………… 66

4-3-2) بررسی مقدار گلبول قرمز در بین سه گروه در جنین  ……………………………………………………………………………………  66

4-3-3) بررسی فضای سینوزوئیدی در بین سه گروه در جنین……………………………………………………………………………………  68

4-3-4 )  ضخامت قطر هپاتوسیت ها در جنین………………………………………………………………………………………………………… 71

4-3-5) بررسی و شمارش سلول های کوپفر در کبد جنین ……………………………………………………………………………………….. 71

4-4)  بررسی ایمونوهیستوشیمی در کبد جنین 17 روزه ……………………………………………………………………………………………. 72

4-5-) بررسی کیفی موش باردار…………………………………………………………………………………………………………………………….. 76

4-5-1) شمارش سلولهای هپاتوسیت در موش باردار ………………………………………………………………………………………………. 76

4-5-2(شمارش سلولهای کوپفر……………………………………………………………………………………………………………………………… 77

4-5-3) آرایش و نحوه قرار گیری سلولهای کبدی……………………………………………………………………………………………………. 78

4-5-4) مقایسه ضخامت هپاتوسیت ها در بین سه گروه……………………………………………………………………………………………….78

4-6 ) بررسی بیوشیمیایی ……………………………………………………………………………………………………………………………………… 81

4-6-1)بررسی آنزیم AST در بین سه گروه……………………………………………………………………………………………………………… 81

4-6-2) بررسی آنزیم  AlTدر بین سه گروه ……………………………………………………………………………………………………………. 81

4-6-3) بررسی آنزیم Alkدر بین سه گروه …………………………………………………………………………………………………………….. 82

فصل پنجم : نتيجه گيري

بحث و نتیجه گیری   …………………………………………………………………………………………………………………………………………… 85

نتیجه گیری …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………. 96

پیشنهادات  …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………  97

منابع…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..  98

چکیده انگلیسی …………………………………………………………………………………………………………………………………………………. 111

فهرست جداول

عنوان                                                                                                                                             صفحه

جدول4-1 : میانگین وزن جنین های مورد بررسی در بین 3 گروه ………………………………………………………………………………..   62

جدول4 -2: میانگین نمودار وزن موش های باردار مورد بررسی …………………………………………………………………………………….. 64

جدول 4-3: میانگین فضای سینوزوییدی در بین جنین های مورد بررسی ……………………………………………………………………….. 69

جدول 4-4: میانگین سلول های کبدی در جنین 17 روزه (هپاتوسیت ها و سلول های کوپفر…………………………………………….. 73

جدول4-5: مقایسه میانگین _– ⁺ سلول های کبدی در موش باردار مورد بررسی ………………………………………………………………… 80

جدول 4-6: مقایسه میانگین آنزیم های کبدی در گروه های مورد بررسی ………………………………………………………………………. 83

فهرست اشکال

عنوان                                                                                                                                             صفحه

شکل 1-1: منشا جنینی پارانشیم کبدی، تکوین هپاتوسیت از اندودرم جنینی………………………………………………………………………25

شکل3-1: نمایی از موش های سوری ماده…………………………………………………………………………………………………………………….51

شکل 3-2: نمایی از رحم و کبد موش باردار گروه تجربی در روز 17 بارداری ……………………………………………………………….. 52

شکل 3-3 : نمایی از تشریح جنین و جدا کردن کبد آن ……………………………………………………………………………………………….  53

شکل 3-4: ریختن مارکر بر روی نمونه (آنتی بادی Bcl2) …………………………………………………………………………………………… 57

شکل 3-5: رنگ گرفتن نمونه کبد بعد از ریختن مارکر و مثبت شدن جواب IHC ………………………………………………………….. 57

شکل4-1: جنین موش کنترل ……………………………………………………………………………………………………………………………………. 60

شکل4-2 : جنین موش تجربی اول  ………………………………………………………………………………………………………………………….. 61

شکل 4-3 : جنین موش تجربی دوم…………………………………………………………………………………………………………………………… 61

شکل 4-4 : کم شدن تعداد جنین ها در گروه تجربی دوم و افزایش سقط در این گروه…………………………………………………….. 62

شکل4-5 : وزن کردن جنین 17 روزه ………………………………………………………………………………………………………………………… 63

شکل4-6 : نمایی از سلول کبدی در جنین 17 روزه با بزرگنمایی 40×  …………………………………………………………………………….67

شکل4-7: افزایش گلبول قرمز در گروه تجربی گروه اول با بزرگنمایی0 4×…………………………………………………………………….. 67

شکل 4-8 : افزایش گلبول قرمز در گروه تجربی گروه دوم با بزرگنمایی0 4×…………………………………………………………………….68

شکل 4-9 : شکل کبد جنین گروه کنترل با بزرگنمایی 100×………………………………………………………………………………………… 70

شکل4-10: گروه تجربی اول با بزرگنمایی 100×………………………………………………………………………………………………………… 70

شکل4-11 : گروه تجربی گروه دوم با بزرگنمایی 100× ……………………………………………………………………………………………… 71

شکل 4-12 : کبد جنین کنترل با بزرگنمایی 100× ……………………………………………………………………………………………………… 74

شکل 4-13: کبد جنین تجربی گروه اول با بزرگنمایی 100× ……………………………………………………………………………………….. 75

شکل 4-14 : گروه تجربی گروه دوم با بزرگنمایی 100×  ………………………………………………………………………………………………76

شکل 4-15  : کبد جنین باردار گروه تجربی اول با بزرگنمایی 100× ……………………………………………………………………………. 79

شکل 4-16 : نمایی از سلول کبدی موش باردار تجربی دوم با بزرگنمایی 100× ……………………………………………………………. 80